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1、手工法及自动血细胞分析仪法进行红细胞、白细胞、血小板检查,血液的基本知识,Add Your Text,血液的组成,concept,Concept,Concept,Concept,血液的基本知识,血液的概况 血液是由血细胞和血浆组成，血细胞包括红细胞、血小板和白细胞。血浆中包括各种蛋白（抗体、酶类等）、无机盐、激素、维生素和代谢产物。水分占91%92%。 理化特征：红色（血红蛋白）不透明，含量占体重的7-9%，约5L。Ph值为7.357.45，比重为1.051.06，相对粘度为45，渗透压为2.63.9kPa。,血液的基本知识,血细胞的分类和形态,寿命：7天 120天 8天 直径：60120fl
2、 1201000fl 230fl (20um) (6.77.7um) (23um) 功能：抗感染，免疫 携氧，代谢产物 凝血功能,白细胞 红细胞 血小板,血液的基本知识,白细胞的种类 中性粒细胞（75%）单核细胞（5%）淋巴细胞（25%） 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞（顺序同下图） 经过瑞氏染色后的各种白细胞,手工法检测血细胞,手工计数红细胞（显微镜法） 检测原理 显微镜计数法用等渗液稀释血液后，滴入血细胞计数板，计数一定范围内的红细胞，经换算得每升血液中的红细胞数。 操作 1、10ul末梢血或EDTA抗凝静脉血 2、加入2ml等渗液中，混匀 3、混悬液充入改良牛鲍计数板 4、高倍镜下计数中央大
3、方格的四角及中央五个中方格内的红细胞总数A。 5、换算,手工法检测血细胞,手工计数白细胞（显微镜法） 检测原理 显微镜计数法用等渗液稀释血液后，滴入血细胞计数板，计数一定范围内的白细胞，经换算得每升血液中的白细胞数。 操作 1、20ul末梢血或EDTA抗凝静脉血 2、加入380ul等白细胞稀释液液中，混匀 3、混悬液充入改良牛鲍计数板 4、高倍镜下计数四角及中间5的大方格的白细胞总数A。 5、换算,手工法检测血细胞,手工法计算血小板 显微镜直接计数法 （ 1 ）普通光学显微镜计数法 （ 2 ）相差显微镜计数法 1、普通光学显微镜检查（手工法） 原理：类似红（白）细胞手工法计数 计数中央大方格内
4、四角和中央共 5个中方格的血小板。,2、相差显微镜直接计数法 利用样品中质点折射率的不同或质点厚度的不 等，产生光线的相位差，提高细胞的清晰度和立体感，增强分辨率。（手工法的参考方法）,自动血细胞分析仪检测血细胞,血细胞分析仪的知识 1、血球仪发展 50年代80年代（半自动）：需将样本经机外稀释后才能检测，易受干扰，随机误差也大。 80年代后（全自动）：血液直接被吸入血液细胞分析仪后，在机内自动稀释、自动加溶血素、定时检测，有较高的精确度和准确性。 近年（联合型血液细胞分析系统）：将血细胞分析、涂片机、染片机、网织红细胞计数仪串联在一起。自动加样系统和真空采血管的应用，避免实验室的随机误差，提
5、高工作效率，避免实验环节造成的血行感染，成为仪器发展和使用的潮流。,自动血细胞分析仪检测血细胞,2、工作原理 细胞分析原理：阻抗法 血红蛋白测量:光电比色法氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法。 其它参数：通过计算机内换算 白细胞分析原理,自动血细胞分析仪检测血细胞,白细胞分析原理 加溶血素后，白细胞大小分布如下： 第一群：小细胞区（3590fl） 淋巴细胞 第二群：中间细胞（90160fl） 嗜碱性、嗜酸性、单核 第三群：大细胞区（160fl以上） 中性粒细胞,自动血细胞分析仪检测血细胞,血细胞分析仪的基本工作原理 血细胞分析仪的类型 电学型 电阻型：利用血细胞通过微孔时瞬间的电阻变化产生脉冲
6、电流而计数。 电容型：利用电极间加高频，血细胞通过时，静电容量发生变化而计数 光学型 血细胞固定型：利用光散射计数。 血细胞流动型：利用流体力学原理计数,自动血细胞分析仪检测血细胞,1、电阻抗法 电阻阻抗法计数原理 血细胞分析仪是利用小孔换能装置实现的,是一个用阻抗法计数的核心部件-阻抗法测试传感器（见下页示意图），管内充满导电液体，两电极接上恒流电源，中部为一小孔，小孔孔径与细胞成比列，在负压的作用下，细胞通过小孔瞬间，排开等体积的电解液，使电解液的等效电阻瞬间变大，这个变大的电阻在恒流源作用下引起一个等比例增大的电压。细胞离开小孔电解液的等效电阻又恢复正常，直到下一个细胞到达小孔，这样细胞
7、连续的通过小孔，就在电极两端产生一连串的电压脉冲。脉冲的个数与通过小孔的细胞数相当，脉冲的幅度与细胞的体积成正比。将这些脉冲经过整形、放大，计算、储存、处理，就得到了细胞分类、计数的原始数据。,自动血细胞分析仪检测血细胞,电阻阻抗法计数原理,自动血细胞分析仪检测血细胞,白细胞的计数 1、白细胞的三分类 血液细胞分析仪将白细胞按体积大小（电压幅值的高低）从35450fL分为256个通道，每个通道1.64fL，细胞按大小放在不同的通道中，得到白细胞的直方图。 第一群（3590fL）：淋巴细胞 第二群（90160fL）：单核细胞（中间细胞） 第三群（160fL）：中性粒细胞（大细胞）,自动血细胞分析
8、仪检测血细胞,WBC直方图,自动血细胞分析仪检测血细胞,RBC直方图,自动血细胞分析仪检测血细胞,PLT直方图,自动血细胞分析仪检测血细胞,2、新的方法 容量、电导、光散射（VCS）测导法 阻抗与射频技术联合检测分类法 光散射与细胞化学技术联合应用 其它：多角度偏振光散射白细胞分类（MAPSS）,自动血细胞分析仪检测血细胞,1、激光法 近十余年来，随着半导体激光器技术的进步，使用（相关试剂处理加激光加流式细胞术）方法的白细胞五分类血球仪成为当前的主流。 激光法五分类血球仪使用光散射进行测量都是基于Mie散射理论 ，如东亚SF3000 通过激光激发产生荧光进行血细胞分析成为高档机型的基本技术，如
9、东亚XT1800系列，XE2100,自动血细胞分析仪检测血细胞,激光法检测原理,自动血细胞分析仪检测血细胞,2、多角度激光偏振光散射检测法,90消偏振光散射 将嗜酸性细胞从中性粒细胞和其它细胞中分离出来,10狭角散射光 用来测定细胞结构,0前角散射光 用来测定细胞的体积,90垂直散射光 对细胞内部颗粒及细胞质进行测量,自动血细胞分析仪检测血细胞,3、鞘流技术 液体流动状态有一个分界点，这是一个常量等于2300，既称为雷偌数Re。 Re=dv/ d 管内经，- 密度，v 流速，- 粘滞系数 当 Re2300 时液流处于湍流状态。 假设：流体为纯水=1，=1， d=100m 代入公式计算得： v=
10、23米/秒 此值即是纯水的湍流、层流分界点。,自动血细胞分析仪检测血细胞,射频检测原理 细胞壁不能使低频电流通过能通过高频电流。细胞核的大小和密度不同，它们对高频电流的阻抗也不同，因此可以用来区分白细胞。 射频与电阻抗联合检测原理,自动血细胞分析仪检测血细胞,5、电阻抗和射频电导 这种方法是分别采用四个检测系统来检测不同类型的细胞 淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测系统：在细胞悬浮淮中加入溶血剂使红细胞溶解，而使白细胞保持完整，细胞浆及核形态近似于生理状态，当这些细胞通过检测系统时，对白细胞进行电阻抗法（测量细胞体积）和射频电导法（检测细胞核和颗粒密度）的联合检测，结果将细胞分成淋巴细胞、单核
11、细和中性粒细胞三个群体。 嗜酸性细胞和嗜碱性细胞两种检测系统：在细胞悬浮淮中加入特殊的溶血剂，除嗜酸性细胞和嗜碱性细胞外，其他细胞均被溶解或萎缩，再对保持完整的嗜酸性细胞或嗜碱性细胞进行计数。 幼稚细胞检测系统：在细胞悬浮淮中加入硫化氨基酸，由于占位不同，结合在幼稚细胞的氨基酸比成熟细胞多，且对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂时，成熟细胞被溶解，只保留着可能存在的幼稚细胞用来计数。 SYSMEX公司的SE9000血细胞分析仪,自动血细胞分析仪检测血细胞,血液分析仪法检测红细胞 采用电阻抗法或激光检测法,方法学评价,血液分析仪法检测血小板 电阻抗法 核酸染色荧光散射法 单克隆抗体染色荧光散射法,1
12、血小板 2 大血小板 3 红细胞 4红细胞碎片 5 碎片 6 红细胞影,B低角度放大的散射光信号,A 高角度放大的散射光信号,XE-5000 双方法检测血小板 方法一：鞘流电阻法(PLT-I ) 能准确计数绝大数正常形态和数量PLT 方法二：核酸荧光染色光散射法(PLT-O) 对数量少形态异常PLT准确性高 鉴别PLT、小RBC、 各种细胞碎片准确性高,荧光染色光散射法,流式细胞仪法 用免疫法荧光素标记特异的血小板单克隆抗体。（参考方法）,方法学评价,血液细胞分析仪的评价 精确度（准确性）高 携带污染率低 重复性好 线性范围 可比性高,手工法与自动血细胞分析仪检测血细胞的对比,手工法 血细胞分析仪 手工法操作过程的随机误差，实验器材的系统误差及检测方法本身的固有误差，计数不但费时费力，实验结果的精确性、准确性差。 血细胞分析仪测量水平不断提高，测量参数不断增加，快速、高效。为临床提供更多有用的实验数据,Thank You!,
