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1、实验三 放线菌、酵母菌、霉菌的形态观察及微生物大小的测量,一、实验目的 1.掌握三类微生物的形态特点及所用染色法。 2.学会用测微尺测量微生物的大小。,1,业界荟萃,二、实验原理 1.形态观察 （1）放线菌的形态观察 插片法：将菌接入平板插盖玻片后培养取片，观察。 玻璃纸法：将灭菌玻璃纸覆盖于平板接菌培养后观察。 印片法：将带有菌苔的琼脂块印在玻片上，观察。,2,业界荟萃,3,业界荟萃,螺旋型孢子丝,直型孢子丝,4,业界荟萃,（2）酵母菌的细胞观察及死、活细胞的鉴定 常使用美兰染色法观察和鉴定。 美兰：氧化型为蓝色，还原型为无色； 活细胞：具有较强还原能力，可还原美兰； 死细胞：无还原能力，不
2、能还原美兰； 因此，染色后，活细胞为无色，死细胞为蓝色。,5,业界荟萃,（3）霉菌的观察（根霉、曲霉、青霉） 常用乳酚油制作玻片。 乳酚油：具有固定、染色、保持水分、杀菌防腐作用制成的玻片后，细胞不变形，孢子不易飞散，保存时间长。 根霉的观察：用乳酚油制作玻片，观察。 曲霉和青霉的观察：见预装片。,6,业界荟萃,7,业界荟萃,霉菌的静孢子左：毛霉的孢子囊；中：孢子囊壁破裂，露出静孢子；右：囊轴,8,业界荟萃,9,业界荟萃,青霉的扫帚状分生孢子,10,业界荟萃,（4）微生物大小的测量 采用镜台、目镜两种测微尺进行测量。 镜台测微尺：是一块特殊的载玻片，中央刻有精确刻度（1mm分成100个小格），
3、用于校正目镜测微尺。 目镜测微尺：是一圆形玻片，其上有精确刻度（50-200），经校正后用来测量。,11,业界荟萃,镜台测微尺,12,业界荟萃,目镜测微尺,13,业界荟萃,三、实验材料 酵母菌（培养36h左右）、根霉、目镜测微尺、镜台测微尺、显微镜、接种环、接种针、盖玻片等。 四、实验步骤 1.观察放线菌、青霉和曲霉的预装片（示范） 2.酵母菌玻片的制作 在干净载玻片上加一滴美兰染液无菌操作，取少量菌种与染液混匀盖上盖玻片，吸去多余染液，静置3min，观察（形态、出芽及死、活细胞），绘图。,14,业界荟萃,3.根霉压片的制作 在干净载玻片上加一滴乳酚油用接种针挑取少量带孢子的菌种置于染液中盖上
4、盖玻片，备用观察（孢子囊、假根及匍匐枝），绘图。 注：可用解剖镜观察根霉自然生长状态。 4.微生物大小的测量（以酵母菌为例） （1）校正目镜测微尺 取出目镜，将透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝下放在目镜镜筒内的隔板上后，旋上透镜插入目镜筒内。,15,业界荟萃,将镜台测微尺有刻度的一面朝上，放在载物台上。先用低倍镜观察，调节使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，找出两尺的两条刻度线完全重合的区域。 记录两重合区间目镜与镜台测微尺分别占的格数 换成高倍镜。用同样方法进行校正，并记录数据。,16,业界荟萃,1610,1640,校正示意：,17,业界荟萃,（2）菌体大小测量 移去镜台测微尺，放上酵母菌玻片，用目镜测微尺测量10个菌体的长宽并记录。 （3）注： 取酵母菌时，接种环务必冷却，防止烫死酵母菌。 每人一套测微尺，小心使用，损坏赔偿。,18,业界荟萃,五、作业 1.绘制酵母和根霉的形态图，并标注特殊结构。 2.记录测量酵母菌大小的结果。填写表1、表2。,表1 目镜测微尺校正结果,19,业界荟萃,表2 10个酵母菌大小测量记录,20,业界荟萃,
