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1、PCR技术及其应用课程考试试卷（硕士研究生）班级： 硕士12班 学号： 姓名 戴鹏辉 得分 ： 一、下页试题为单项选择题，请将每题的正确答案填在试卷首页的答题栏内（共50题，每题1.8分，总分90分）题号12345678910答案题号11121314151617181920答案题号21222324252627282930答案题号31323334353637383940答案题号41424344454647484950答案二、简述RACE的原理和技术(10分)1、PCR反应的五个要素是：（ ）引物 dNTP Mg离子 模板 水 TaqDNA聚合酶水请选择A、B、C、D、2、PCR产物鉴定常用的方法
2、是：（ ）A、凝胶电泳法B、杂交法C、免疫法3、PCR反应中随着复性温度升高，扩增的特异性：（ ）A、 升高B、 下降C、 不变4、原位PCR技术中对组织和细胞进行固定的目的是：（ ）A、 维持细胞形态B、 创造一个既便于试剂进入细胞，又能减少产物渗出的内环境C、 防止操作中的细胞移动5、增效PCR包括（ ）轮PCR扩增A、1B、2C、3D、越多越好6、增效PCR第一轮扩增的目的是（ ）增加引物量增加模板量延长作用时间，降低聚合酶作用速度，以提高忠实性阻止过多引物间的作用的二聚体的形成，提高特异性A、B、C、D、7、增效PCR第二轮扩增的目的是（ ）增加模板量提高特异性延长非特异性条带增加特异
3、靶序列产量A、B、C、D、8增效PCR第一轮扩增时要求引物的量比通常其它PCR方法（ ）A、 高B、 一样C、 低D、 无所谓9增效PCR反应总的循环次数比其它PCR方法多的原因是（ ）A、 为了得到更大量的产物B、 为了提高特异性C、 为了提高敏感性D、 虽然引物总量未变，但由于分两次加入，使每次反应浓度降低了，为了得到相同的扩增产物必须增加循环次数10、膜结合PCR之所以可以对很少的模板或污染比较严重的样品进行扩增，其主要依据是：A、 模板与膜固定后可以作彻底漂洗B、 模板与膜结合后可以提高PCR扩增效率C、 模板与膜结合后，可用不同引物先后对不同区段进入扩增D、 薄膜可以吸附其它杂质从而
4、消除污染物的影响提高信噪比11、对模板进行固定以前首先应使样品变性，其原因是：（ ）A、 为PCR反应作准备B、 使样品中的杂质变性后除去C、 薄膜结合单链DNA的能力强D、 提高Taq聚合酶的活力12、膜结合PCR的扩增效率比液相扩增法为：（ ）A、 低B、 高C、 相同D、 不一定13、膜结合PCR必须（ 0A、 适当减少循环次数B、 适当减少引物用量C、 适当延长延伸反应时间D、 适当增加循环次数14、膜结合PCR不能减轻下列（ ）样品的污染：A、 蛋白质和肽类B、 核酸C、 脂类物质D、 小分子代谢产物15、反向PCR扩增到的序列与通常PCR的差别在于：（ 0A、 反向PCR扩增的是已
5、知序列之间的未知，而通常PCR反应扩增的是已知序列两侧的已知序列。B、 反向PCR扩增的是已知序列两侧的未知序列，而通常PCR反应扩增的是已知序列之间的序列。C、 反向PCR扩增的是未知序列两侧的已知序列，而通常PCR扩增的是已知序列两侧的已知序列。D、 反向PCR扩增的是已知序列，而常规PCR扩增的是未知序列。16、反向PCR之所以能扩增未知序列的原因在于：（ ）A、 通过限制性酶切然后环化改变了序列的拓扑关系B、 通过控制反应条件改变了聚合酶的聚合方向C、 通过限制性酶切然后环化，改变了序列的内外关系D、 设计的特殊引物改变了延伸反应方向17、反向PCR中为何要将环化的DNA分子切成结状（
6、 ） A、 环状双链DNA分子易于形成超螺旋结构不利于进行PCR反应B、 DNA聚合酶不能有效结合环状分子C、 环状双链分子使扩增的非特异性太强D、 环状双链无法解链，也就无法与引物结合18、将环状DNA分子切成线性分子时要求限制性内切酶位点位于：（ ）A、 已知序列外侧B、 未知序列内侧C、 已知序列内侧D、 不易判断19、可在成环的DNA分子中引入切割的方法有：（ ）煮沸法限制性酶切法EDTA-寡核苷酸介导的特异裂解法机械剪切法A、B、C、D、20、重组PCR的重组过程实质上发生在：（ ）A、 体外B、 体内C、 体外体内都有关D、 不易判断21、重组PCR能实现重组的原因在于：（ ）A、
7、 将要重组的核酸分子共同转化细胞，细胞自身就具有使其发生重组的功能B、 将要重组的分子酶切后以人工方式拼接到一起实现重组C、 在要重组的两个扩增产物端部设计上同源序列以实现同源重组D、 重组实质上是一种随机交换DNA的过程，无法人为控制22、用重组PCR进行定点诱变时，通常将错配位点设计在引物的（ ）A、3端B、5端C、中部D、无法人为控制23、用重组PCR进行定点诱变时，突变位点的局限性在于：（ ）A、 只能位于序列中部B、 只能位于序列的两侧C、 只能引入单个突变碱基D、 只能引入两个突变碱基24、重叠延伸法不能（ 0A、 将突变引入序列中部B、 实现基因拼接C、 引入多个突变碱基D、 扩
8、增未知序列并引入突变25、一般来说巢式PCR分为（ ）扩增循环。A、1个 B、2个 C、3个 D、多个26、巢式PCR之所以要用两对引物分别进行扩增，原因是（ 0提高扩增效率节约试剂用量保证反应的高特异性简化常规PCR操作A、B、C、D、27、有关巢式一步PCR的说法中正确的是：（ ）第一轮PCR引物较第二轮PCR引物短第一轮PCR引物比第二轮PCR引物退火温度高第一轮PCR引物比第二轮PCR引物退火温度低第一轮PCR引物较第二轮PCR引物长A、B、C、D、28、固着PCR是：（ ）A、 将模板与固相的琼脂糖珠相连B、 将引物与薄膜固定C、 将DNA聚合酶用耦联剂固定到琼脂糖珠上D、 将引物用
9、耦联剂固定到琼脂糖珠上29、固着PCR的主要优点在于（ ）A、 扩增产物处于溶液中易于分离纯化B、 便于聚合酶在高忠实性条件下进行扩增C、 扩增产物与固定化的琼脂糖珠相连，便于分离D、 因为引物与琼脂糖珠相连，所以可以容易把扩增产物同引物分开30、与膜结合PCR相比，固着PCR的不同点在于（ 0膜结合PCR将膜板结合到膜上，而固着PCR使引物固相化膜结合PCR便于纯化样品，而固着PCR便于纯化分离扩增产物膜结合PCR所用引物无特殊要求，而固着PCR所用引物应能与固相底质发生耦联两种PCR对聚合酶有不同要求A、B、C、D、31、单一特异引物PCR的通用引物可与（ ）配对结合。A、 载体中的特定序
10、列B、 插入片段的特异序列C、 载体中的非特异序列D、 插入片段的非特异序列32、单一特异引物PCR的特异引物可与（ ）配对结合。A、载体中的特定序列B、插入片段的特异序列C、载体中的非特异序列D、插入片段的非特异序列33、单一特异引物PCR的特异性扩增体现在（ ）A、通用引物可与载体中的特定序列特异结合B、通用引物可与插入片段的特异序列特异结合C、特异引物可与载体中的特异序列特异结合D、特异引物可与插入片段的特异序列特异结合34、重复DNA序列引物扩增法对重复序列的要求是（ ）A、 序列为低度重复B、 序列为串边重复C、 序列为散布重复D、 序列为高度重复35、重复DNA序列引物扩增法得到的
11、产物是（ ）A、 均一的B、 不均一的C、 不特异的D、 难以判断36、下列关于逆转录PCR的说法中不正确的是（ ）A、 样品中混有少量DNA对扩增结果无影响B、 需要将RNA逆转录成cDNA才能进行PCRC、 逆转录PCR方法比其它许多RNA研究方法的灵敏度高D、 逆转录PCR要求RNA比较完善37、逆转录PCR对RNA样品的要求是（ ）RNA分子完整 不含DNA 不含蛋白质和其它杂质 RNA的来源有限制A、B、C、D、38、逆转录PCR反应中合成cDNA需要的引物种类有（ ）随机六聚体下游引物寡聚（dT）寡聚（dA）A、B、C、D、39、有关引物设计中哪一个不正确（ ）A、 引物的跨度以1
12、80-500KB为宜B、 5和3无回文结构C、 引物最好跨越一个内含子D、 上下引物的Tm值应有较大差异40、一步逆转录扩增法所依据的是（ ）A、 新一代Taq聚合酶既具有聚合酶活性也有逆转录酶活性B、 适当控制反应条件C、 特殊的离子浓度D、 特殊的扩增对象41、常规PCR存在的问题是（ ）A、 加热太慢，反应不能恰开始B、 PCR反应前升温过程中聚合酶产生非特异性扩增C、 缓慢的升温过程使聚合本科活力不能有效出现D、 加热过程破坏了引物和靶序列的结合影响聚合反应42、热启动PCR克服常规PCR问题的办法是（ ）高温时加入必须的反应成份加快加热过程加入无活性的酶然后高温激活改变扩增对象A、B、C、D、43、在提取核酸过程中，除去大量蛋白质的操作是（ ）A、 煮沸 B、蛋白酶K C、酚/氯仿抽提 D、乙醇沉淀44、RNA应保存于：（ ）A、 水中B、 TE缓冲液C、 DEPC处理的离子水中D、 冻干保存45、如何监制PCR实验的污染情况？（ ） 设立阴性和阳性对照重复实验合成新引物消毒试剂A、B、C、D、46、下列说法不正确的是：（ ）A、 放射线不会造成核酸分子结构的破坏B、 多数放射性核素半衰期较短，必须随标随用C、 放射性核素与相应的元素具有完全相同
