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1、1,色谱分析技术,济宁市中医院设备科 科室业务学习,2,第一节 色谱法概述,色谱法（chromatography） 是一种物理分离技术，实质上是利用混合物中各个组分在互不相溶的两相（固定相和流动相）之间的分配的差异而使混合物得到分离的一种方法，也有人称之为色层法、层析法等。,3,第一节 色谱法概述,固定相（stationary phase ） 一个有大比表面积、相对固定不动的、可以是固体或以某种方式固定了的液体 流动相（mobile phase） 携带待分离混合物、流过固定相、可以是气体或液体 两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础,4,第一节 色谱法概述,色谱仪（chromatograph）
2、 是利用色谱分离技术再加上检测技术，对混合物进行先分离后检测，从而实现对多组分的复杂混合物进行定性、定量分析。,5,第一节 色谱法概述,色谱分析特点 具有高分辨率、高灵敏度、样品量少且速度较快、结果准确等优点，是分析混合物的有效方法。,6,一、色谱法的研究进展,1903年至1906年俄国植物学家茨维特（Tswett）首先利用分离及分析技术进行植物色素方面的研究，“色谱”因此而得名。 其色谱原型装置，如右图所示：,7,一、色谱法的研究进展,1931年，文特斯汀（Winterstein)开始将这种分离技术应用于无色物质的分离。 1952年，马丁（Martin）等人提出了气液色谱法，正式推出了气相色
3、谱技术 液相色谱技术的发展相当缓慢。在70年代随高压技术、高效固定相、检测技术的发展以及电子、计算机技术等方面的新成就的不断涌现而迅速发展起来。 计算机和自动控制技术的发展 色谱仪的联用技术的发展，如气相色谱仪和质谱仪的联用已十分普及，液相色谱仪与质谱仪的联用也在不断发展。,8,二、基本原理,色谱是利用待分离的样品组分在两相中分配的差异而实现分离的。 阻力小的移动速度快、阻力大的移动速度慢 色谱分离的两要素是互不相溶的两相（流动相及固定相）以及样品（混合物）各组分在两相中分配的差异。,9,10,三、色谱仪的分类及其特点,气相色谱,气固色谱,气液色谱,流动相为气体（称为载气） 固定相为液体,液相
4、色谱,液固色谱,液液色谱,流动相为液体（淋洗液）固定相为液体,按分离柱不同可分为：填充柱色谱和毛细管柱色谱,流动相为气体（称为载气） 固定相为固体吸附剂,流动相为液体（淋洗液） 固定相为固体吸附剂,1.色谱仪的分类,11,三、色谱仪的分类及其特点,2.气相色谱仪的特点：流动相为气体（称为载气）。具有高分辨率、高速度、高灵敏度及选择性好等优点。只能用于被气化物质的分离、检测，使用范围较小,12,三、色谱仪的分类及其特点,3.液相色谱仪的特点：流动相为液体,适用于气化时易分解物质的分离、分析。,13,三、色谱仪的分类及其特点,4.色谱仪的特点 （1）应用范围广，可用于几乎所有化合物的分离和分析。
5、（2）样品用量少，用极少的样品就能完成一次分离及分析，可以实现痕量分析、微量分析。 （3）高选择性是指对性质极为相近的物质，如同位素、同分异构体等，通过选取适当的固定相及流动相和分离条件，可实现分离及分析。,14,三、色谱仪的分类及其特点,4.色谱仪的特点 （4）高效能，能够分析分配系数极为接近的组分，可分离并分析极为复杂的混合物。 （5）高灵敏度，能分析含量极微的物质，如气相可检出10-11g1013g物质。液相也接近此精度。 （6）分析速度较快，只需几分钟至几十分钟就可完成一个样品的分析工作。,15,四、色谱仪的输出信息,1.色谱图（chromatogram）,16,四、色谱仪的输出信息,
6、2.基线（base line） 是图中与时间轴平行t的记录线b。它表明纯流动相流过检测器时所产生的响应。判断基线稳定与否的标准是基线稳定性，即基线b与时间轴t平行或偏离的程度。 3.色谱峰 检测器的输出信号随流入组分的浓度或质量的变化出一个个的峰形，即为色谱峰（chromatographic peak）。,17,四、色谱仪的输出信息,4.保留时间 从进样开始到出现色谱峰最大值所需的时间为保留时间（re-tention time）。常用tR（组分名）（或简写为tR）表示，如tR1、tR2等，单位为min。与保留时间有关的其他参数，如保留体积、校正保留时间等，统称保留参数。,18,四、色谱仪的输出
7、信息,5.死时间 死时间（dead time）是指惰性物质组分，从注入到出现峰的最高点所需时间，若组分是空气，用符号t0表示，单位为min。死体积（dead volume）指色谱柱内流动相的体积，在实际中包括从进样系统到检测器的体积。,19,五、色谱技术在临床检验中的应用,气相色谱仪常用于人体微量元素的快速分析，血与尿等体液中的化合物的分析，分析鉴定药物的组成和含量、检测人体的代谢产物，通过气相色谱仪串联质谱，在“兴奋剂”检测中可分析100余种违禁药品等。 高效液相色谱仪可以应用在：分析人体体液内代谢物质；分析药物的组成和含量，在药物生产中进行中间控制；分析药物在体内的残留量，测定药物在各器官中的代谢产物，进行治疗药物效果的监测（治疗药物检测)；定性测定细胞核中的核苷及核苷酸，分析核酸以及分析氨基酸、酶、糖；激素水平的测定，微生物的鉴定等。,
