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1、1,生物安全实验室操作技术规范,2,实验室生物安全,操作者,操作对象,环境,3,所有操作人员必须经过培训，通过考核，获得上岗证书； 在开始相关工作之前，应对所从事的病原微生物及相关操作进行危险评估，根据国家对于各种微生物操作的危险等级划分和防护要求以及危险评估的结果，制定全面、细致的标准操作规程和程序文件，对于关键的危险步骤设计出可行的防护措施并对这些细节了然于胸； 熟悉各级生物安全实验室运行的一般规则，掌握各种仪器、设备、装备的操作步骤和要点，对于各种可能的危害应非常熟悉； 应掌握各种感染性物质操作的一般准则和技术要点。,生物安全意识至关重要,4,实验室感染的传播链,容器中的病原体,泄漏,预
2、防接种,感染途径/感染剂量,传播,个人防护装备,易感宿主,规程/设备,潜伏期,医学监测,规程/设备,5,实验室的生物安全规范,实验室的运行规范 仪器设备的使用规范 针对感染性材料的操作规范 个人防护用品的使用规范 ,6,Laboratory Biosafety Manual, 3rd edition - lab commissioning and certification - lab biosecurity concepts,Biosafety: To promote the use of safe practices in the handling of pathogenic microo
3、rganisms in the laboratory during transportation in field investigations in manufacturing facilities in health-care facilities,Laboratory Biosafe ty Manual 1st edition,1983,1993,2003,2004,WHO Laboratory Biosafety Manual,- translated into F, S, P, Ch, Ru - available on web, CD-Rom, hard copies,7,病原微生
4、物实验室的生物危险,8,生物危险,感染性的致病因子，无论是直接感染，还是间接地散播到环境中去，对人类、动物或植物都是一个现实的或潜在的危险。,Animals,Humans,Plants,9,实验室主要生物危害,微生物气溶胶吸入 刺伤、割伤 皮肤、黏膜污染 食入 感染的实验动物咬伤 ,还有许多不明原因的实验室相关感染,10,病原微生物实验室相关感染的途径,11,Pike等对3 921例实验室相关感染统计分析结果发现，已知原因的实验室感染只占全部感染的18，不明原因的实验室感染却高达82。 对不明原因的实验室感染的研究表明，大多数可能是病原微生物形成的感染性气溶胶在空气扩散，实验室内工作人员吸入了
5、污染的空气感染发病的。,12,实验室微生物气溶胶的种类,飞沫核气溶胶 粉尘气溶胶,两类微生物气溶胶对实验室工作人员都具有严重的危害性，其程度取决于微生物本身的毒力、气溶胶的浓度、气溶胶粒子大小、以及当时实验室内的微小气候条件。 研究发现，粒径100m的飞沫沉降很快，而粒径5m的飞沫核能够被呼吸道的粘膜捕获。,13,可产生各种严重程度微生物气溶胶的实验室操作,14,产生微生物气溶胶的其它因素,另外，一些在自然环境中可以繁殖的微生物，一旦进入实验室的空调或通风系统，污染了空调的冷却水，则可以形成更广泛的微生物气溶胶污染。 除了实验室操作可以产生微生物气溶胶外，患有呼吸道传染病或皮毛上染有病原微生物
6、的实验动物也可以产生微生物气溶胶。 微生物气溶胶在一个实验室内产生后，还可以通过气流转移到同一建筑物的其他地方，甚至污染整个建筑物的空气。,15,生物安全实验室的运行规范,16,一、BSL-1和BSL-2实验室,17,（一）实验室的进入,未经批准，任何人不得进入实验室工作区域。儿童不得进入实验室工作区域。可能增加获得性感染的危险性或感染后可能引起严重后果的人员不允许进入实验室或动物房。 BSL-2实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，包括通用的生物危险性标志，标明传染因子、实验室负责人或其他人姓名、电话、以及进入实验室的特殊要求。 实验室的门应保持关闭。 工作人员进入动物房应当经过特别批
7、准。 与实验室工作无关的动物不得带入实验室。,18,（二）防护要求,在实验室工作时，必须穿着合适的工作服或防护服。 在进行可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。 在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。 为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染、碰撞或人工紫外线辐射的伤害，必须戴合适的安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。 严禁穿着实验室防护服离开实验室工作区域。 不得在实验室内穿露脚趾的鞋。 禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。 禁止在实验室工作区域储存
8、食品和饮料。 在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。,19,20,21,办公室,22,（三）有关操作的指导原则,严禁用口吸移液管, 严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。 所有的实验操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。 应限制使用注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液外，注射针头和注射器不能用于移液或用作其他用途。 实验室应制订并执行处理溢出物的标准操作程序。出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室负责人报告。实验室应如实记录有关暴露和处理的情况，保存相关记录。 污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方法）
9、。根据所处理的微生物因子的危险度评估结果准备专门的污水处理系统。 只有保证在实验室内没有受到污染的文件纸张才能带出实验室,23,（四）实验室工作区的管理原则,实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。 每天工作结束后应清除工作台面的污染。若发生具有潜在危害性的材料溢出应立即清除污染。 所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须先清除污染。 感染性材料的包装和运输应遵循国家和或国际的相关规定。 如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。,24,25,26,27,28,（五）生物安全管理的指导原则,实验室负责人负责制订和采用生物安全管理计划以及实验室安全或/和操作手
10、册。 实验室应能提供常规的实验室安全培训, 并建立制度。 实验室负责人（或生物安全负责人）要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或/和操作手册，并遵循标准的操作程序。实验室内应备有可供取阅的安全或/或操作手册。所有实验室人员必须经过培训，了解所从事工作的危险、掌握有关的管理规定和操作程序，通过考核后方可从事相关实验室工作。 应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。 如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监测和治疗，并建立健康档案。实验室人员应接受与所操作生物因子或实验室内潜在的因子相关的免疫接种或检测。,29,二、BSL-3实验室,BSL-3的使用应符合病
11、原微生物实验室生物安全管理条例的有关规定。 张贴在实验室入口门上的国际生物危害警告标志,应注明生物安全级别以及管理实验室出入的负责人姓名，并说明进入该区域的所有特殊条件，如免疫接种状况等。 实验室防护服应为长袖、背面开口的隔离衣或连体衣，应穿着鞋套或专用鞋。实验室防护服不能在实验室外穿着，且必须在清除污染后再清洗。最好使用一次性连体防护服。 开启各种潜在感染性物质的操作均必须在生物安全柜或其他类似的防护设施中进行。,30,二、BSL-3实验室,有些实验室操作，或在进行感染了某些病原微生物的动物操作时，必须配备呼吸防护装备。 实行双人工作制，严禁任何人单独在实验室工作。 实验室内原始记录未经可靠
12、消毒不得带出实验室。通常使用传真进行原始记录的传输。 工作人员应开展健康监测。应收集并妥善保存工作人员的基线血清。,31,生物安全柜的使用,32,33,34,35,36,37,38,39,生物安全柜内感染性材料溢洒的处理,当发生少量溢洒时，应用吸收纸巾立即处理，并立即用浸满消毒液的毛巾或纱布对生物安全柜及其内部的所以物品进行擦洗。工作面消毒后应更换手套，不论是摘下手套还是更换手套都要洗手。 若发生大量溢洒，液体会通过生物安全柜前面或后面的格栅流到下面去，生物安全柜内所有的物品都应该进行表面消毒并拿出生物安全柜，在确保生物安全柜的排水阀被关闭后，可将消毒液倒在工作台面上，使液体通过格栅流到排水盘
13、上。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和/或高压灭菌处理。,40,实验室仪器设备的使用,41,仪器相关危险,42,一、吸管和移液器的使用,为防止感染，严禁用嘴吸液。应使用机械移液装置。 所有的吸管都应该有棉塞以减少对移液器或吸球的污染。建议使用带有滤芯的吸头。在BSL-2及以上级别实验室中，最好避免使用玻璃吸管。 对于感染性材料不能用吸管吹打来达到混匀的目的，操作时吸管应放入操作液面下的三分之二处，以防止产生气泡和气溶胶。从吸管吹出液体时也不要太用力，吸管内的液体应自动流出，不要强制性排出预留液。 污染的吸管应立即浸没在含有适宜的消毒剂的防破碎的容器里。在处理之前，应浸泡足够长的时间。盛装废弃
14、吸管的容器应放在生物安全柜里，而非外面。 严禁用带有注射针头的注射器吸液。 为防止从吸管滴落的感染性物质发生扩散，工作台表面应放一块具有吸收性能的材料，使用后应按感染性废弃物予以处理。,43,二、离心机的使用,44,离心可能造成的伤害途径,离心机机械故障 实验器材故障，如离心管等 产生气溶胶； 操作者失误。,45,所有的离心机应处于正常的工作状态并具有合格的机械性能，要根据厂家的说明书进行操作。 离心机应放到适宜的位置和高度，以使工作人员能看见离心桶并便于进行各项操作。 用于离心的离心管和标本容器应该根据厂家要求选用，最好使用塑料制品，而且在使用前应检查有无破损。必须在安全柜内打开盖子。 使用
15、转头时应注意转头盖与转头型号是否匹配。操作病原微生物时，离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。空离心桶配平时应该用蒸馏水或70乙醇、异丙醇，不应使用盐水和次氯酸盐溶液。离心管内液面水平距管口应留出一定空隙，以确保离心过程中液体不会溢出，尤其是使用角转头时更要注意。 应该每天检查在特定的转速下，离心杯的内表面有无污物。离心转头和离心桶应每天检查有无腐蚀点以及极细的裂缝，以确保安全。离心桶、转头和离心机腔每次用后都应该消毒。每次用后，应该把离心桶倒放，以排净离心配平的液体。,46,对于高致病性病原微生物，必须要高度警惕离心过程中产生的气溶胶风险。 大型离心机上应加装负压罩，以及时吸
16、出离心机排出的气体，并排至实验室的过滤通风系统，在BSL-3及以上级别实验室尤其要注意。 微型离心机则可放在安全柜内离心，但要注意其对安全柜气流的影响。 如果不能在安全柜内离心也无负压罩，则必须将密封的转头在安全柜内打开。 所有的离心管必须带盖密封，其开启应在安全柜内进行。,47,三、搅拌器、振荡器、混匀器和超声波破碎仪的使用,使用的管子、盖子、杯子或瓶子都应该保持完好，无裂隙、无变形。盖子、垫圈应恰好配套，保持完好。 在混匀、振荡和超声波破碎过程中，器皿内的压力会增大，含有感染性材料的气溶胶可能会从容器和盖子间的空隙逸出。推荐使用塑料的，特别是聚四氟乙烯（PTFE）器皿，因为玻璃可能会破裂，释放出感染性物质，而且可能伤及操作者。 当使用匀浆器、振荡器和超声波破碎仪时，应有防护装置，在生物安全柜里操作。使用涡旋振荡器时，必须在生物安全柜内操作，并且操作的容器必须为密闭的，以避免产生气溶胶和发生液体溅洒。 在操作结束后，应在生物安全柜里开启容器。 操作人员使用超声波破碎仪时，应有耳部听力保护装置。,48,四
