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1、1,梅毒的血清学试验,检验科 李修敏,2,梅毒的病原学,苍白螺旋体：细长螺旋形，原核微生物，长7-14微米，不易着色，普通显微镜不易看到，可用暗示野显微镜观测到。,3,人体的免疫学反应,非特异性抗心脂质抗体可用牛心脂质检测出 抗梅毒螺旋体抗体可用梅毒螺旋体检出,4,梅毒的血清学试验,非螺旋体抗原血清试验（抗原：心磷脂 胆固醇 卵磷脂） 临床意义：初筛 疗效评价 复发及再感染的判断,螺旋体抗原血清试验（抗原：精选的梅毒螺旋体抗原片段） 临床意义： 诊断试验 是否感染过梅毒 无法评价疗效,5,非螺旋体抗原血清试验,镜下判读结果 性病研究实验室试验（VDRL）Venereal Disease Res
2、earch Laboratory 非加热血清反应素试验（USR）Unheated Serum Reaging 肉眼判读结果 快速血浆反应素试验(RPR)Rapid Plasma Reaging 甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)Toludine Red Unheated Serum Test,6,试验方法（TRUST),试剂复温（23-29） 试剂与血清等量混匀，水平转动8分钟。 结果判断：中等或大的红色凝聚物为阳性反应；较小的红色凝聚物为弱阳性反应；无凝聚物为阴性反应。,7,存在的问题,假阳性 1、生物学假阳性：见于瘤型麻风、疟疾、系统性红斑狼疮、硬皮病、雅司病、回归热、钩端螺旋体病、血吸
3、虫病、包虫病、旋毛虫病、支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、结核病等疾 2、人为因素：试剂与血清反应后放置时间过长，因干燥在纸片上留下假性凝集；没有做阴性对照，肉眼判定错误；标本错误。 假阴性 反应时间不足、反应方式不正确、反应温度不够、前带现象。,8,9,10,螺旋体抗原血清试验,荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS) 梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA) 梅毒螺旋体被动微粒凝集试验(TPPA) ELISA法梅毒抗体检测 胶体金法梅毒抗体检测,11,ELISA法梅毒抗体检测,全自动酶免仪、全自动洗板机 半自动酶免仪、半自动洗板机 手工法 操作步骤及原理同其它免疫项目,12,注意的问题,实验
4、器材的计量（酶免仪、洗板机、恒温箱、冰箱、空调、生物安全柜、精确移液器、量筒、振荡器、温度计） 环境温度：室温（18-23） 人员培训 样本的要求 实验前试剂的复温 精确的加样：移液器的正确使用,13,续移液器的使用,吸液的操作 : 1、连接恰当的吸嘴；2、按下控制钮至第一档； 3、将移液器吸嘴垂直进入液面下 1-6mm （视移液器容量大小而定）； 0.1-10ul 容量的移液器进入液面下1-2mm 2-200ul 容量的移液器进入液面下 2-3mm 1-5ml 容量的移液器进入液面下 3 -6mm 注：为使测量准确可将吸嘴预洗 3 次，即反复吸排液体 3 次。 4、使控制钮缓慢滑回原位； -
5、！5、移液器移出液面前略等待 1-3 秒； 1000ul 以下停顿 1 秒 5-10ml 停顿 2-3 秒 . 6、缓慢取出吸嘴，确保吸嘴外壁无液体。,14,续移液器的使用,排液的操作 : 1、将吸嘴以一定角度抵住容量内壁； 2、缓慢将控制钮按至第一档并等待约 1 3 秒； 3、将控制钮按至第二档过程中，吸嘴将剩余液体排净； 4、慢放控制钮； 5、按压弹射键弹射出吸嘴。,15,续移液器的使用,养护： 1、如液体不小心进入活塞室应及时清除污染物； 2、移液器使用完毕后，把移液器量程调至最大值，且将移液器垂直放置在移液器架上； 3、根据使用频率所有的移液器应定期用肥皂水清洗或用 60 的异丙醇消毒
6、，再用双 蒸水清洗并晾干； 4、避免放在温度较高处以防变形致漏液或不准； 5、发现问题及时找专业人员处理。,16,注意的问题,加样： 加酶标液： 加底物： 加终止液： 震荡： 盖膜： 洗板： 洗涤液的要求 握板的要求,17,注意的问题,比色： 孵育时间： 操作时差的问题： 质控问题：内部质控、外部质控 影响ELISA测定结果的干扰因素 外源性干扰因素：溶血、细菌污染、标本保存不当、标本凝集不全、添加剂 内源性干扰因素：RF、补体、嗜异性抗体等,18,结果解释,图标演示,19,20,21,22,三种梅毒血清 学试验的结果解释,23,先天性梅毒的确证指标,暗示野查到梅毒螺旋体 患儿RPR滴度持续上升（出生后6个月内每隔1个月查1次滴度） RPR滴度高于其母亲 患儿检出抗梅毒19s-IgM 具备以上指标之一即可诊断,24,神经梅毒的实验室诊断,脑脊液VDRL+(不是RPR) 血清特异性螺旋体抗体+,25,谢谢大家,
