《甾体激素类药物》参考PPT

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1、1,甾体激素类药物的分析,The analysis of Steroid Hormon Drugs,2,氢化可的松、醋酸地塞米松、地塞米松磷酸钠、曲安奈德、甲睾酮、丙酸睾酮、苯丙酸诺龙、黄体酮、醋酸甲地孕酮、米非司酮、雌二醇、炔雌醇、炔诺酮和炔诺孕酮等甾体激素类药物的基本结构与分类、鉴别试验和含量测定。,基本内容,3,掌握甾体激素类药物的基本结构与分类；各类药物的结构特征及其与分析方法的关系。 熟悉甾体激素类药物的紫外分光光度法、四氮唑比色法和异烟肼比色法；柯柏反应比色法 。 了解 甾体激素类药物的特殊杂质及其检查方法。,4,第一节基本结构与分类,甾体激素是一类具有甾体结构的激素类药物,维持生

2、命,调节性功能,免疫调节,皮肤病治疗,生育控制,甾,5,一、母核,环戊烷骈多氢菲 C10、C13位上基团为角甲基,甾,6,环上双键的表示方法： 用“”表示 ,双键的位置写在的右上角。双键位置,4,1,4,5,5(10),7,甾环构型位取代位取代,8,二、分类 按生理作用分为：,9,1肾上腺皮质激素,皮质酮的衍生物,4-3-酮结构,去氧皮质酮,10,代表药物有：,可的松,氢化可的松,11,人工合成药物：,地塞米松,氢化泼尼松 (泼尼松龙),12,结构特点： 含有21个C A环：4-3-酮结构（,-不饱和酮） 17位：醇酮基，有还原性。,13,供分析官能团： A环的4-3-酮 17位的醇酮基 17

3、、21-二羟基-20-酮 11位羟基或羰基受立体效应影响,无利用价值。,14,2雄性激素及蛋白同化激素,睾丸素的衍生物,15,代表药物：,甲睾酮,丙酸睾酮,16,蛋白同化激素在睾丸素基础上结构修饰得到，如,苯丙酸诺龙,17,结构特点： 含有19个C A环的4-3-酮 17位羟基、甲基、酯,供分析官能团： A环4-3-酮,18,3孕激素,黄体酮,醋酸甲地孕酮,19,安宫黄体酮,米非司酮,20,结构特点： 含有21个C A环的4-3-酮 17位甲酮基,供分析官能团： A环的4-3-酮 17位上的甲酮基。,21,4雌激素,雌二醇,炔雌醇,22,结构特点： 含有18个C A环：苯环， 3位上有酚羟基，

4、 10位无甲基 17位：羟基、乙炔基,供分析官能团： A环的酚羟基及17位的羟基乙炔基,23,口服避孕药,A环有4-3-酮结构； 有的第17位有羟基和乙炔基； 第10位无甲基。,炔诺酮,异炔诺酮,24,小结,甾体激素,碳原子数,A环,17位取代基,肾上腺皮质激素,21,4-3-酮,醇酮基,19,4-3-酮,-OH -CH3,孕激素,21,4-3-酮,甲酮基,雌激素,18,苯环 C3-酚OH,-OH -CCH,25,第二节鉴别试验,一、呈色反应,1母核 能与H2SO4，H3PO4，HClO4，HCl等呈色和荧光； 机制：母核的质子化。 如：,26,与硫酸显色反应,显 色 荧光 加水稀释,泼尼松龙

5、 深红 - 絮状灰,泼尼松 橙 - 黄蓝绿,炔雌醚 橙红 黄绿 红色,炔雌醇 橙红 黄绿 絮状玫红,醋酸可的松 黄或微带橙 - 褪色并澄清,27,Kober反应： 指雌激素与硫酸乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后，重新加热发生颜色改变，并在515nm附近有最大吸收的反应。（特征反应）,28,2官能团 C17-醇酮基: 肾上腺皮质激素类药物特征反应。 机理：C17-醇酮基有强还原性，与氧化剂作用，被氧化成水合醛。,29,TTC：氯化三苯四氮唑(红四氮唑RT） BT：蓝四氮唑 生成Formazan，用于皮质激素类药物鉴别和含量测定。,+水合醛,30, 羰基 3位,20位羰基可与羰基试剂反应 羰基试剂

6、:羟胺、2,4-二硝基苯肼、异烟肼 、氨基脲、苯肼等,31,32,甲酮基-孕激素特征反应 第17位的甲酮基和亚硝基铁氰化钠作用,形成蓝紫色的络合物。,黄体酮,蓝紫色,亚硝基铁氰化纳,其他甾体,淡橙色 不显色,33,34, 乙炔基,白,炔雌醇,35, 酚羟基：,36, 有机卤素,丙酸氯倍他索,37,香,水解产物的反应,特臭,特臭,38,KOH,二 制备衍生物测定m.p.,39,代表药物有：,可的松,氢化可的松,40,黄体酮,41,雌二醇,炔雌醇,42,甲睾酮,丙酸睾酮,43,三、薄层色谱法TLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别,方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液

7、的主斑点相同。,44,33003000cm-1,30002700cm-1,19001650cm-1,16501450cm-1,四、红外光谱法 IR 法 中国药典上收载的甾体激素类药物均有红外光谱图。,37503300cm-1,45,醋酸可的松,结构特征： 43酮、C17 OH C20 酮基、 C11 酮基 醋酸酯,46,醋酸酯,C20 酮, C11 酮基,43酮基,47,结构特征：酚羟基、C17 OH C17 乙炔基,炔雌醇,48,49,一、有关物质,TLC（多采用自身稀释对照法， 已经介绍）,HPLC（可与含量测定同时进行）,（合成起始物、中间体、副产物、降解产物）,第三节杂质检查,50,来

8、源 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢,剧毒,原理,方法,51,三、有机溶剂残留量(甲醇和丙酮) 气相色谱法。 四、游离磷酸 原理：,52,第四节含量测定,一、紫外分光光度法 1原理 “C=C-C=C”或“C=C-C=O”共轭体系，有紫外吸收。 4-3-酮结构，max在240nm A环为苯环，max在280nm,53,2讨论 前提是原料药中“其它甾体”必须合格，否则，不适用。需进行分离后再测定。如炔孕酮 测定制剂时，赋形剂在240nm附近有吸收需经前处理后测定。如醋酸地塞米松片,氢化可的松片和注射液,醋酸可的松片和注射液,醋酸泼尼松片,甲睾酮片,醋酸甲地孕酮片,炔雌醇片,炔诺酮片。,54,习题：

9、醋酸氢化可的松滴眼液的含量测定方法如下：取本品，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置另一100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，在241nm波 长 处 测 得 吸 收度A=0.408，求醋酸氢化可的松的标示百分含量。已知：醋酸氢化可的松的吸收系数E1%1cm =395；本品规格为3ml15mg .,55,(103.3%),56,二.四氮唑比色法 1四氮唑盐的种类： （1）红四氮唑： 2,3,5三苯基氯化四氮唑 2,3,5triphenyltetrazoliumchloride） 缩写TTC 或RT（Red tetrazolium） 还

10、原产物为不溶于水的深红色三苯甲,57,（2）蓝四氮唑： 3,3二甲氧苯基双4，4（3,5二苯基）氯化四氮唑 3,3-dianisole-bis4,4-(3,5-diphenyl) triphenyltetrazoliumchloride 缩写BT ( Blue tetrazolium ) ，还原产物为暗兰色的双甲 ，,58,2原理 17位-醇酮基具有还原性，在碱性条件下能将四氮唑盐定量地为有色的甲 ，在一定波长下具有最大吸收，可用比色法进行含量测定,59,3、测定法 ATTC法: BP; Ch.P BBT法 : USP,暗处放置40-45min,60,4、讨论,结构 溶剂和水分 碱种类和加入顺

11、序 空气中氧和光线 反应温度和时间,反应速度 呈色强度 和稳定性,61,4、讨论,（1）官能团位置的影响 a C11： 11位酮基反应速度快于11位羟基 可的松氢化可的松,62,b C21：-羟基（C21-OH） 21 -OH酯化后，较母体羟基反应速度慢 即：游离体酯类 如：可的松醋酸可的松 简单酯复杂酯， 醋酸酯磷酸酯 琥珀酸酯三甲基醋酸酯,63,（2）溶剂和水分的影响： a 常用无水乙醇 含水量5%，对结果无影响 含水量为10%，吸收度约降低10% 含水量为30%，反应完全受到抑制 b 用无醛醇 醇中不能含有醛类醛有还原性，使吸收度,64,（3）试剂质量及加入顺序 a.灵敏度：BT TTC

12、； BT：淡黄色，空白值高，稳定性差； TTC：无色，空白值较低，稳定性好. USP规定： BT：极淡黄色，空白A值与乙醇比较0.030.06,65,b.加入顺序：先加TTC或BT，后加(CH3)4N+OH- 原因：醇酮基与(CH3)4N+OH-长时间接触，有部分分解。 Ch.P:氢化可的松软膏,醋酸地塞米松注射液,醋酸可的松眼膏,醋酸泼尼松眼膏,醋酸泼尼松龙注射液,66,（4）氧及光线的影响 对光敏感，在暗处显色。 TTC法形成的甲 对空气中氧敏感，使颜色强度，稳定性。 BP规定： 加入试剂后，要往容器中充N2，以置换反应容器中的空气。,67,（5）液性： 必要条件：强碱性 以(CH3)4N

13、+OH-结果较满意,（6）温度与时间,一般室温或30,Ch.P: 25，暗处反应40-45min,68,三.异烟肼法 1原理: C3酮基及某些其他位置上的酮基能与羰基试剂异烟肼在酸性条件下形成黄色异烟腙，在一定波长下具有最大吸收，可用于定量。,max420nm,69,2、反应条件 （1）溶剂：无水乙醇，无水甲醇 （2）酸的种类、浓度及异烟肼的浓度 常用HCl HCl：异烟肼=2M:1M时，获最大吸收度。 HCl浓度：0.0074mol/L （1000ml醇中含0.625mol浓HCl） 异烟肼浓度：0.0365mol/L (0.5mg/ml),70,（3）水分、O2与光线的影响 甾体激素与异烟

14、肼的缩合反应为可逆反应，所以含水量升高可促使反应逆转而水解，使吸收度降低(H2OA）,含水量腙水解A%,具塞玻璃容器中,光线和氧影响不大,71,t ,72,3、反应的专属性 在该反应条件下,对43酮具有一定的专属性 C20酮基反应慢， C17酮基反应慢； C11酮基不反应 43酮：室温下，30反应完全。 如：醋酸地塞米松软膏,73,四. kober反应及铁一酚试剂比色法,1、Kober反应： 指雌激素与硫酸乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后，重新加热发生颜色改变，并在515nm附近有最大吸收的反应。（特征反应）,74,75,改进方法： 2铁酚试剂法 铁酚试剂的组成 硫酸亚铁铵 浓硫酸 过氧化氢

15、苯酚,76, 浓硫酸和过氧化氢的作用 浓硫酸和过氧化氢将2价铁氧化成3价铁。,77,三价铁的作用 能够加快黄色生成的速度 能促进黄色向红色的转变 能增加红色的稳定性 苯酚的作用 可消除反应产生的荧光 能够促进红色的生成,78,白,五 硝酸银一NaOH滴定法,+HNO3,+,NaOH滴定，同时做空白,79,六 非水溶液滴定法,HClO4滴定，同时做空白,米非司酮, C10位为,80,七 HPLC法,广泛用于此类药物原料和制剂的含量测定,一般为内标法,81,掌握甾体激素类药物的基本结构与分类；各类药物的结构特征及其与分析方法的关系。 熟悉甾体激素类药物的紫外分光光度法、四氮唑比色法和异烟肼比色法；柯柏反应比色法 。 了解 甾体激素类药物的特殊杂质及其检查方法。,82,1 甾体激素类药物的结构中能和四氮唑盐发生显色反应的基团 A. 酚羟基 B. 活泼次甲基 C. 甲酮基 D. C17 -醇酮基 E. 酮基,D,83,问题25 A维生素B1 B醋酸地塞米松 C两者皆是 D两者皆不是 2. 异烟肼比色法 3. 硫色素反应 4. 紫外分光光度法 5. 绿奎宁（Thaciaquin）反应,B,A,C,D,84,6.可用于氢化可的松鉴别的试剂有 A氨制硝酸银 B异烟肼 C红四氮唑 D硫酸 E重氮苯磺酸,ABCD,85,7 可用于甾体激体类药物的测定方 法有 A高效液相色