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1、1,实验一 神经干复合动作电位的记录和观察及神经干不应期和神经冲动传导速度的测定,2,一、实验目的 1学习电刺激器、生理信号放大器和计算机处理系统的使用方法。2学习牛蛙坐骨神经干标本的制备方法。 3 神经干复合动作电位的记录 4测定牛蛙坐骨神经的冲动传导速度和坐骨神经不应期,3,二、实验原理 神经干在受到有效刺激后，可以产生动作电位，标志着神经发生兴奋。如果在神经干另一端引导传来的兴奋冲动，可以引导出双相的动作电位，如在两个引导电极之间将神经麻醉或损坏，则引导出的动作电位即为单相动作电位。 神经细胞的动作电位是以“全或无”方式发生的。坐骨神经干是由很多不同类型的神经纤维组成的，所以，神经干的动
2、作电位是复合动作电位。复合动作电位的幅值在一定刺激强度下是随刺激强度的变化而变化的。,4,神经干不应期的测定原理 神经在一次兴奋的过程中，其兴奋性也发生一个周期性的变化，而后才恢复正常。兴奋性的周期变化，依次包括绝对不应期、相对不应期、超常期和低常期4个时期。为了测定坐骨神经在一次兴奋后兴奋性的周期变化，首先要给神经施加一个条件刺激（S1）引起神经兴奋，然后再用一个测试性刺激（S2），在前一兴奋过程的不同时相给以刺激，用以检查神经阈值以及所引起的动作电位的幅值，以判定神经兴奋性的变化。当刺激间隔时间长于25ms时，S1和S2分别所引起动作电位的幅值大小基本形同。当S2距离S1接近20ms左右时
3、，发现S2 所引起的第二个动作电位幅值开始减小。在逐渐使S2 向S1 靠近，第二个动作电位的幅值则继续减小。最后可因S2落在第一个动作电位的绝对不应期内而完全消失。,5,神经冲动传导速度的测定原理 神经干受到有效刺激发生兴奋后，产生的动作电位将以一定的速度沿神经传导。对不同的神经纤维，其传导兴奋的速度也不同，一般来说直径大、有髓的神经纤维比直径小、无髓的神经纤维传导速度快。蛙类的坐骨神经干属于混合型神经，其中直径最粗的有髓神经为A类纤维，正常室温下的传导速度约为3540m/s。 测定神经纤维兴奋的传导速度v时，在远离刺激点的不同距离处分别用两组引导电极引导动作电位，测出两引导点之间的距离m和分
4、别引导出的动作电位的时相差s，根据v = m / s即可计算出其传导速度。 用尺子测量搭在前后两组引导电极之间的神经干长度m约为12mm，又由图6可测量得两个动作电位起始点的时间间隔s为0.40ms，故由公式v = m / s可计算实验用的神经干标本的兴奋传导速度约为：v = m / s = 12 / 0.40 = 30 mm/ms = 30 m/s。,6,三、实验试剂与器材 牛蛙、任氏液、神经屏蔽盒、Medlab计算机生物信号采集处理系统、普通剪刀、手术剪、眼科镊（或尖头无齿镊）、金属探针（解剖针）、玻璃分针、蛙板（或玻璃板）、蛙钉、细线、培养皿、滴管,7,四 实验步骤 （一）神经干标本的制
5、备： 1、双毁髓：一只手握牛蛙，背部向上，用拇指压住蛙的背部，食指按压其头部前端，使头端向下低垂：另一只手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后触画，当触及到两耳之间中间的凹陷处时，持针手感觉针尖下陷，此处即时枕骨大孔的位置，将针沿此处垂直刺入，然后将针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，以捣毁脑组织，再将针转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓，此时可看见动物的后肢突然蹬直，而后瘫软如棉。,8,9,10,2、剥皮及去除内脏和上部位肢体：将双毁髓的牛蛙腹面向上放入解剖盘，一手持手术摄轻轻提取耻骨联合上方的皮肤，另一手用手术剪横向剪开皮肤，再剪开体壁肌肉（开口要大）。然后用手术摄轻轻提起内脏，自耻骨部剪断（
6、勿损伤脊神经）。 一手轻轻托起牛蛙后肢，使头部及内脏向下，看清支配后肢的脊神经发出部位，于其前方用金冠剪横向剪断脊柱，然后再沿脊柱两侧到横向切口剪断体壁，一手捏住断开的脊柱后端，另一支手向后撕剥皮肤，并除去断开脊柱以上部位肢体及内脏。,11,3、分离两后肢：将去皮的后肢腹面向上，用左手固定标本的股部两侧肌肉，右手持手术刀，于耻骨联合处向下按压刀刃，切开耻骨联合，然后用手托取标本，用金冠剪剪开两后肢相连的肌肉组织，并纵向剪开脊柱，使两后肢完全分离，将分开的后肢，放入任氏液中备用。,12,4、分离坐骨神经：将一侧后肢的脊柱端用面向上，趾端向外侧翻转，使其足底向上。用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经
7、。股部沿腓肠肌正前方的肌二头肌和半膜肌之间的肌缝，找出坐骨神经，坐骨神经基部（即与脊神经相连的部位），背部有一梨状肌盖住神经，用玻璃分针轻轻挑起肌肉，便可看清下面穿行的神经，剪断肌肉，完全暴露出坐骨神经及其相连的脊神经，再用玻璃分针轻轻挑起神经，自前向后剪去支配腓肠肌之外的神经分支，将坐骨神经分离至胳窝处。此处下行分为两支，内侧为胫神经，外侧为腓神经，沿这两根神经分离至踝部。用线结扎坐骨神经干的脊柱端，然后再剪断胫腓神经的足端游离神经干，将其放入盛有任氏液的培养皿中，稳定兴奋性5分钟。,13,14,15,注意：在剥离时尽量将神经干剥离长一些，将神经干周围的组织剔除干净（剥离时切勿损伤神经干）。
8、在分离过程中，应经常加任氏液保持神经干湿润，以保留活性。,16,（二）实验装置连接 将神经屏蔽盒与计算机连在一起。打开MedLab信号采集系统，选用通道2记录神经干动作电位、通道4显示刺激的方波。 进入信号处理系统进行实验。 观察内容：动作电位；测传导速度； 测不应期.,17,18,19,1. 剥制神经标本时要仔细，须将神经周围的结缔组织去干净，避免与金属接触和戳伤神经标本。 2. 神经标本必须与五根电极良好接触。 3. 神经干在空气中不可暴露过久，应时常用任氏液润湿，但不可向神经盒内滴加任氏液。 4. 神经干要伸直，防止弯曲，折叠和贴附 5. 两对引导电极间距离应尽可能大。 6. 用刚能使神
9、经干产生最大动作电位的最大刺激强度刺激神经。,20,7. 盖上神经盒的盒盖，并接地，防止干扰。 8. 在观察双相动作电位时，如果第二相动作电位波幅太小，可将两个刺激电极的距离保持在最小，但不能碰在一起，引导电极2与 刺激电极的距离保持在2 cm左右，逐渐加大引导电极2与正负极之间的距离，则第二相动作电位的振幅可逐渐增大。 9. 神经盒内放入润湿纱布，以保持盒内润湿，防止标本干燥，切勿向盒内直接滴加任氏液。10.位于刺激电极和记录电极外侧端的神经干及棉线要尽量短，不可与盒底接触，更不要缠绕在电极上,21,(1)神经干兴奋阈值的测定 刺激强度从0.1V开始，逐渐增加刺激强度，当刚刚出现动作电位时的
10、刺激强度，即为神经干的兴奋阈值。 (2)双相动作电位 在刺激阈值的基础上逐渐加大刺激强度，可见动作电位的图形为双相，而且其幅值随刺激强度增大而加大。当刺激增加到一定强度时，可见动作电位的幅值不再增大。 (3)单相动作电位 在两个引导点击之间损伤神经干标本，可使原来的双相动作电位的下相小时，变为单相；注意上相动作电位的图形有什么变化。,22,实验报告 1.注释曲线 2.简述神经动作电位产生的机制。 3 你所测量出的神经冲动传导速度是多少？ 4. 当两个刺激脉冲的时间间隔逐渐缩短时，第二个动作电位如何变化？为什么？,23,任氏液配方 氯化钠6.5 氯化钾)0.14 氯化钙0 .12 碳酸氢钠0.4 磷酸二氢钠0.01 葡萄糖(g) 2(可不加) 蒸馏水加至(ml) 1000,24,成份 浓度() 任氏溶液 乐氏溶液 台氏溶液 氯化钠(NaCl) 20 32.5毫升 45.6毫升 40.0毫升 氯化钾(KCl) 10 1.4毫升 4.2毫升 2.0毫升 氯化钙(CaCl2) 10 1.2毫升 2.4毫升 2.0毫升 磷酸二氢钠(NaH2) 1 1.0毫升 5.0毫升 氯化镁(MgCI2) 5 2.0毫升 碳酸氢钠(NaHCO3)5 4.0毫升 2.0毫升 20.0毫升 葡萄糖 2.0克(可不加) 1.02.5克1.0克 加蒸馏水至 1000毫升 1000毫升1000毫升,
