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1、第二章 生物药物的杂质检查,药物的纯度要求,指药物纯净程度，反映了药物质量的优劣，含有杂质是影响药物纯度的主要因素。,杂质是指： 1. 有毒副作用的物质 2. 本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质 3. 本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但影响药物的科学管理的物质,一、杂质的来源与种类（一）杂质的来源,1. 生产过程中引入,（1）原料、反应中间体及副产物,（2）试剂、溶剂、催化剂类,（3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质,例： 阿斯匹林由水杨酸乙酰化制得,制剂过程中可能产生新物质,1在药物生产过程中引入杂质的途径为 A. 原料不纯或部分未反应
2、完全的原料造成 B. 合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成 C. 需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成 D. 所用金属器皿及装置等引入杂质 E. 由于操作不妥，日光曝晒而使产品发生分解引入的杂质,2. 贮藏过程中产生,水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等,易发生水解反应的结构：,酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等,易发生氧化反应的结构：,醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键等,（二）杂质的种类,药物中的杂质按来源分为,1. 一般杂质：如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中。,2. 特殊杂质：
3、指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。,（三）药物的纯度与化学试剂的纯度,药物的纯度考虑杂质的生理作用，药品只有两个等级：合格或不合格。 化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯。,例. 临床所用药物的纯度与化学品及试剂纯度的主要区别是 A. 所含杂质的生理效应不同 B. 所含有效成分的量不同 C. 所含杂质的绝对量不同 D. 化学性质及化学反应速度不同 E. 所含有效成分的生理效应不同,二、杂质的限量检查,指
4、药物中允许杂质存在的最大量，通常用百分之几或百万分之几来表示。 砷-10ppm 重金属-50ppm,杂质量 杂质限量 杂质量,药品合格,药品不合格,（一）药物的杂质检查法,1. 对照法 限量检查法 （Limit Test） 特点：不需知道杂质的准确含量,灵敏度法,对照法,比较法,操作: 平行试验比较两比色管的颜色或浊度,判断杂质限量是否符合规定.,管2 （对照管）,管1 （样品管）,取限度量的待检杂质对照品配成的对照溶液,与一定量供试品配成的供试品溶液在相同条件下处理, 比较反应结果, 判断供试液中所含杂质限度是否符合规定.,标准对照法,2. 灵敏度法,系指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条
5、件下，不得有正反应出现。 特点：不需对照品,3. 比较法,与空白比较： 含量测定法：测定杂质的绝对含量，如测定吸收度、pH值等。 特点：不需对照品,（二）杂质限量的计算,1检查某药物中的砷盐，取标准砷溶液2ml（每1ml相当于1g的As）制备标准砷斑，砷盐限量为0.0001，应取供试品的量为 A. 0.20g B. 2.0g C0.020g D. 1.0g E. 0.10g,已知：c1 g/ml1106 g/ml V2ml L0.0001%,2检查维生素C中的重金属时，若取样量为1.0g，要求含重金属不得过百万分之十，问应吸取标准铅溶液（每1ml0.01mg的Pb）多少ml？ A. 0.2ml
6、 B. 0.4ml C2ml D. 1ml E. 20ml,第三节 杂质检查的原理,检查方法：,一、利用药物和杂质在物理性质上的差异 二、利用药物和杂质在化学性质上的差异,一、利用药物和杂质在物理性质上的差异,（一）臭味及挥发性的差异 （二）颜色的差异 （三）溶解行为的差异 （四）旋光性质的差异 （五）对光吸收性质的差异 （六）吸附或分配性质的差异,（一）臭味及挥发性的差异,药物（特别是挥发性药物）中如存在具有特殊气味的杂质，可以由气味判断该杂质的存在。 乙醇、冰醋酸、苯酚、氟烷、浓过氧化氢 如麻醉乙醚异臭检查，控制原料乙醇中引入的杂醇油以及乙醛和过氧化物等杂质。方法为：取供试品10ml，置于
7、瓷蒸发皿中，使自然挥发，挥散完毕后，不得有异臭。,（二）颜色的差异,某些药物自身无色，但从生产中引入了有色的有关物质，或其分解产物有颜色。(维生素C）,（三）溶解行为的差异,有的药物可溶于水、有机溶剂或酸、碱中，而其杂质不溶；反之，杂质可溶而药物不溶。 葡萄糖（中间产物-糊精） 溶于热乙醇，糊精不溶,（四）旋光性质的差异,测定旋光度可以用来区别不同的药物，检查杂质的含量。利用的是供试品与其特殊杂质在比旋度上的差异。 举例：维生素C溶液（0.10g/ml) +20.5_+21.5,本身没有旋光性的药物，杂质有，则可以通过限定药物溶液的旋光度值来控制相应杂质的量,旋光度：光学活性物质的液体或溶液使
8、平面偏振光的振动面旋转的角度。以“+”表示右旋；以“-”表示左旋。 比旋度t:偏振光透过长1dm且1ml中含有1g旋光物质的溶液，在一定波长与温度下测得的旋光度。, = tc l/100,中国药典规定使用钠光谱的D线（589.3nm）测定药物在特定溶液中的旋光度。,（五）对光吸收性质的差异,药物和杂质的结构不同，因而对光吸收的性质往往有差异。分光光度法的优点：灵敏度高，简便，仪器已较普及，因此在药物的杂质检查中应用日益广泛。 1.紫外分光光度法 2.原子吸收分光光度法 3.红外分光光度法 4.荧光分析法,1.紫外分光光度法,当杂质在某一波长处有最大吸收，而药物在此无吸收时，可以通过控制供试品溶
9、液在此波长处的吸收度来控制杂质的量。 举例：规定葡萄糖注射液在284nm波长处的吸收度不得过0.32，即可控制其杂质5-羟甲基糠醛的量。 头孢噻吩在237nm处规定吸收度范围0.65-0.72，测定值偏大则说明未有效除去噻吩乙酸；测定值偏小则说明产品降解。,.,例: 肾上腺素中肾上腺酮的检查,若药物在紫外区有明显吸收，而杂质吸收很弱或没有吸收，可以根据吸收度大小限制杂质的量。规定供试品吸收度的上下限幅度，可在一定程度上控制产品的纯度。,头孢噻吩在237nm处规定吸收范围0.65-0.72，237nm的吸收特征是噻吩乙酰基产生的，测定值偏大则说明未有效除去噻吩乙酸；测定值偏小则说明产品降解。,3
10、.红外分光光度法,在杂质检查中主要用于药物中无效或低效晶型的检查。 甲硝咪唑C晶型在662cm-1处有较强吸收，其无效A晶型在640cm-1处有较强吸收。当供试品中含有A晶型时，在上述二波数处的吸收度比值将发生改变。,R=D1/D2 R=D1/D2,（六）吸附或分配性质的差异,1.薄层色谱法 2.纸色谱法 3.高效液相色谱法 4.气相色谱法 简便、快速，灵敏度高,1、薄层相色谱法（TLC) 设备简单，操作简便，分离速度快，灵敏度和分辩率较高 ）杂质对照品法 ）自身对照法 ）杂质对照品法与自身对照法联用 ）对照药物法 5）灵敏度法（不允许有杂质斑点）,（1）杂质对照品法,适用于已知杂质并能制备杂
11、质对照品的情况。要求供试品与所检杂质对显色剂所显的颜色应相同，显色灵敏度也应相同或相近。 方法：根据限量，取供试品溶液和限度量的杂质对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，展开、定位、检查，供试品中所含杂质的斑点，不得超过相应杂质的对照斑点。,（2）供试品自身对照法,适用于杂质的结构不能确定，或无杂质对照品的情况。 方法：将供试品溶液按限量要求稀释至一定浓度作为对照溶液，与供试品溶液分别点加于同一薄层板上，展开、定位、检查。供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液所显示斑点颜色。,（4）对照药物法,当无适合的杂质对照品，尤其是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，可用与
12、供试品相同的药物作为对照品，此对照物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。,此外，少数药物还利用试验条件下显色剂对杂质的检测限来控制其限量。 盐酸阿米替林，一定浓度点样于硅胶G薄层板上，以氯仿：甲苯展开，喷甲醛-硫酸显色，紫外灯下检视，除主斑点外，不得显其他斑点。,2.纸色谱法,用于极性较大物质的分离、分析。有时也用于检查放射性药物注射液中的放射化学杂质。 方法：类似于薄层色谱法中的供试品自身对照法。,3、高效液相色谱法 分离效能高，专属性强和检测灵敏度高，可准确测量各组分的峰面积 ）内标法 ）外标法 ）不加校正因子的主成分自身对照法 ）加校正因子的主成分自身对照法 ）峰面积归一化法,1.
13、 内标法：内标法测定供试品中某个杂质或主成分含量。先以杂质对照品测定其校正因子，然后测定供试品中杂质的含量。,2. 外标法：测定供试品中某个杂质或主成分的含量，用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况。,3. 不加校正因子的主成分自身对照法 将供试溶液稀释成一定浓度，作为对照液。分别取供试品溶液和对照品溶液进样，将供试品溶液中各杂质峰面积及其总和，与对照液主成分峰面积比较，以控制供试品中杂质的量。特点：1）简单方便，无须对照品。2）适用于杂质与主成分峰面积相差悬殊时的杂质检查 3）忽略了各杂质与主成分的响应值可能不同。,4. 加校正因子的主成分自身对照法：精密称取杂质对照品和待测成分对照品各适
14、量，配制测定杂质校正因子的溶液，进样，记录色谱图，计算杂质的校正因子。此校正因子可直接载入各品种正文，用于校正杂质的实测峰面积，准确计算杂质含量。,5. 峰面积归一化法：测量各杂质峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的各色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积的百分率，粗略测量供试品中杂质的含量。特点：1） 不需对照品，简便易行。2） 记录图谱的时间应为主峰保留时间的整数倍。 3） 通常只能粗略考察供试品的杂质含量。,4、气相色谱法 ）峰面积归一化法 ）内标法 3）外标法,（二）化学法利用药物和杂质在化学性质上的差异,（一）酸碱性的差异 （二）氧化还原性的差异 （三）杂质与一定试剂反应产生沉淀 （四）杂质
15、与一定试剂反应产生颜色 （五）杂质与一定试剂反应产生气体 （六）药物经有机破坏后检查杂质,二、利用药物和杂质在化学性质上的差异,（一）酸碱性的差异 利用杂质的酸、碱性。规定消耗滴定液的体积、规定PH值范围、指示剂法,（二）氧化还原性的差异 利用药物与杂质之间的氧化还原电位的差异进行检查。,（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀,（四）杂质与一定试剂反应产生颜色 根据限量要求，规定：一定反应条件下不得产生某种颜色；供试品在相同条件下呈现的颜色不得超过杂质对照品相应颜色；供试品在一定的条件下的吸收度不得过一定值。,（五）杂质与一定试剂反应产生气体 砷、硫、碳酸盐、氨或胺盐、氰化物,（六）药物经有机破坏后
16、检查杂质 含环状结构的有机药物中磷、硫、卤素及硒等杂质；不溶药物等。,氧瓶燃烧法（Oxygen flask combustion method）,将药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中燃烧，使待测元素从有机结合状态转变成无机离子，被事先装在瓶内的吸收液吸收，成为稳定的溶液状态，然后采用适当方法进行测定 用于含卤素、硫、氮、硒等元素的有机药物的鉴别、检查和含量测定,仪器装置,操作方法：,称样将样品直接置无灰滤纸上称量。 吸收液 水-NaOH（含碘、氯药物） 例盐酸胺碘酮、甲状腺粉、甲状腺片 水- NaOH -H2O2（含溴、含硫药物） 水（含氟药物） 硝酸溶液（含硒药物） 燃烧分解操作（通O2 12 min，燃烧）,注意,防爆，燃烧瓶应洗涤干净 氧气要充足，燃烧应完
