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1、泰山区人民医院制度规范 免疫室 SOP 文件 1 丙型肝炎病毒抗体检测（酶联免疫法） 1、原理：本法采用间接法酶联免疫吸附试验原理。在微孔条上预 包被基因重组 HCV 结构和非结构区，配以酶标记 IgG 抗体及 TMB 显色 等其他试剂，检测人血清或血浆中的丙型肝炎病毒抗体。 2、标本采集与处理 2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血 前应禁食 4-6 小时。 2.2 静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响 水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐 分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过分钟，穿刺成功 后立即松开止血带。 2.
2、3 采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻 璃试管作为容器。 2.4 标本处理：血液标本应尽快地送实验室。本试剂使用样品为人 血清或血浆，含 EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实 验。 2.5 标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无 溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血 日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。 2.6 标本储存：样品中应无微生物，可在 2-8oc 储存 1 周，长期储 存应低温冻存，避免反复冻融。 泰山区人民医院制度规范 免疫室 SOP 文件 2 3、试剂与仪器： 3.1 测定试剂： 3.1.1 生产厂
3、商：北京万泰生物药业股份有限公司 3.1.2 批准文号：国药准字 S20010014 3.1.3 包装：96T1 3.1.3 试剂配置： 浓缩洗涤液 50ml1 瓶 样品稀释液 12ml1 瓶 HCV 酶标板 812 孔或 128 孔 HCV 酶标试剂 12 ml1 瓶 HCV 阳性对照 0.2ml1 支 HCV 阴性对照 0.2ml1 支 底物液 A、B 液 各 6ml1 瓶 终止液 6ml1 瓶 自封袋 1 个 封版膜 2 张 说明书 1 份 32 测定仪器： 3.2.1 酶标仪： 上海安泰 model MT-858 3.2.2 洗板机： ANALYTECH 828 4、操作步骤： 41
4、配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水 20 倍稀释。 泰山区人民医院制度规范 免疫室 SOP 文件 3 42 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 3 孔， 阳性对照 2 孔和空白对照 1 孔（空白对照孔只加稀释液不加样品及酶标 试剂）其余各孔加入 100UL 样本稀释液。 43 加样：分别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照 10 微升， 轻轻振荡混匀。 44 温育：用封版膜封版后，置 37oc 温育 60 分钟。 45 洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤 5 遍，最后一次尽量扣 干。 46 加酶标抗体：空白对照孔不加 酶标试剂，每孔加入酶标记抗 体 100 微升，轻轻振荡混匀。 47 温
5、育：置 37oc 温育 30 分钟。 48 洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤 5 遍，最后一次尽量扣干 49 显色：每孔加入显色剂 A，B 液各 1 滴（50 微升），轻轻振 荡匀，37oc 避光显色 30 分钟。 410 终止：每孔加终止液 1 滴（50 微升），轻轻振荡混匀。 411 测定：10 分钟内测定结果，设定酶标仪单波长 450 nm 或双 波长 450 nm /600-650 nm 测定。用空白孔调零点后测定各孔 A 值。 5：结果判断 51 目测： 在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为丙型肝炎病毒抗 体（抗 HCV）阳性；无色者为丙型肝炎病毒抗体（抗 HCV）阴性。 泰山
6、区人民医院制度规范 免疫室 SOP 文件 4 52 酶标仪检测： 521 临界值（CUT/OFF）计算：CUT/OFF=阴性对照孔 A 均值 +0.12。（不足 0.02 按 0.02 计算） 522 阳性判定：样品 A 值临界值（CUTOFF）者判为抗 HCV 阳性。(注意初试阳性应重新取样双孔复试) 523 阴性判定：样品 A 值临界值（CUTOFF）者判为抗 HCV 阴性。 6：注意事项： 61 本品仅用于体外诊断，操作应按说明书严格进行。封版膜不 能重复使用，不同批号酶标板、酶标试剂和阴阳对照不可混用，不能与 其他厂家试剂混用。 62 避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒剂（如 84 消毒
7、液）的环 境下操作。 63 使用前请将试剂平衡至室温（平衡 30 分钟以上）实验前将试 剂轻轻振荡混匀，使用后立即放回 2-8oc.未用完的微孔板条与干燥剂一 起用自封袋密封 2-8oc 保存。过期试剂请勿使用。 64 加样时必须使用加样器，并经常校对加样器的准确性。加入 不同样品或不同试剂组分时，用更换加样器吸头和加样槽，以防出现交 叉污染。 65 洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使 用洗板机应设定 30-60 秒浸泡时间。再洗板结束后，必须立即进行下一 泰山区人民医院制度规范 免疫室 SOP 文件 5 步，不可使酶标板干燥。避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验 条件的
8、均一。 66 结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标 板底部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指印或划痕都可 能影响板孔的读值。 67 所有样品、废液和废弃物都应按传染物处理。终止液为硫 酸，使用时必须注意安全。 68 显色时必须加显色剂 A 液后再加显色剂 B 液，以免显色过 低。 69 由于 ELISA 反应原理的限制，本试剂检测阴性并不排除 HCV 感染的可能。检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。 7：临床意义： 检测人血清或血浆中的 HCV 抗体。适用于血液的筛查及临床丙型 肝炎病毒感染的辅助诊断。 泰山区人民医院制度规范 免疫室 SOP 文件 6 梅毒螺旋体
9、抗体（酶联免疫法） 1、原理：本试剂盒采用双抗原夹心法酶联免疫吸附试验原理。在 微孔条上预包被梅毒螺旋体抗体基因重组抗原，配以酶标记抗原及 TMB 显色剂等其他试剂，检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。 2、标本采集与处理 2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血 前应禁食 4-6 小时。 2.2 静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响 水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐 分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过分钟，穿刺成功 后立即松开止血带。 2.3 采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻 璃试管作为容器
10、。 2.4 标本处理：血液标本应尽快地送实验室。本试剂使用样品为人 血清或血浆，含 EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实 验。 2.5 标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无 溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血 日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。 2.6 标本储存：样品中应无微生物，可在 2-8oc 储存 1 周，长期储 存应低温冻存，避免反复冻融。 泰山区人民医院制度规范 免疫室 SOP 文件 7 3、试剂与仪器： 3.1 测定试剂： 3.1.1 生产厂商：北京万泰生物药业股份有限公司 3.1.2 批准文号：国药准字 S200
11、10013 3.1.3 包装：96T1 3.1.3 试剂配置： 浓缩洗涤液 50ml1 瓶 TP 酶标板 812 孔或 128 孔 TP 酶标试剂 12 ml1 瓶 TP 阳性对照 0.2ml1 支 TP 阴性对照 0.2ml1 支 显色剂 A、B 液 各 6ml1 瓶 终止液 6ml1 瓶 自封袋 1 个 封版膜 2 张 说明书 1 份 32 测定仪器： 3.2.1 酶标仪： 上海安泰 model MT-858 3.2.2 洗板机： ANALYTECH 828 4、操作步骤： 41 配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水 20 倍稀释。 泰山区人民医院制度规范 免疫室 SOP 文件 8 42 编
12、号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 3 孔， 阳性对照 2 孔和空白对照 1 孔（用双波长检测，可不设空白对照孔） 43 加样：分别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照 100 微 升，轻轻振荡混匀。 44 温育：用封版膜封版后，置 37oc 温育 60 分钟。 45 洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤 5 遍，最后一次尽量扣 干。 46 加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶标记抗 体 100 微升，轻轻振荡混匀。 47 温育：用封版膜封板后，置 37oc 温育 30 分钟。 48 洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤 5 遍，最后一次尽量扣干 49 显色：每孔加入显色剂 A，B 液各
13、 1 滴（50 微升），轻轻振 荡匀，37oc 避光显色 30 分钟。 410 终止：每孔加终止液 1 滴（50 微升），轻轻振荡混匀。 411 测定：10 分钟内测定结果，设定酶标仪波长于 450 nm（建 议双波长 450 nm /600-650 nm 测定）用空白孔调零点后测定各孔 A 值。 5：结果判断 51 目测： 在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为梅毒螺旋体抗体 （TP-AB）阳性；无色者为梅毒螺旋体抗体（TP-AB）阴性。 泰山区人民医院制度规范 免疫室 SOP 文件 9 52 酶标仪检测： 521 临界值（CUT/OFF）计算：临界值=阴性对照孔 A 均值 +0.18
14、。 522 阳性判定：样品 A 值临界值（CUTOFF）者判为 TP 阳 性。(注意:初试阳性应重新取样双孔复试) 523 阴性判定：样品 A 值临界值（CUTOFF）者判为 TP 阴 性。 6：注意事项： 61 本品仅用于体外诊断，操作应按说明书严格进行。封版膜不 能重复使用，不同批号酶标板、酶标试剂和阴阳对照不可混用，不能与 其他厂家试剂混用。 62 避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒剂（如 84 消毒液）的环 境下操作。 63 使用前请将试剂平衡至室温（平衡 30 分钟以上）实验前将试 剂轻轻振荡混匀，使用后立即放回 2-8oc.未用完的微孔板条与干燥剂一 起用自封袋密封 2-8oc 保存。过期试剂请勿使用。 64 加样时必须使用加样器，并经常校对加样器的准确性。加入 不同样品或不同试剂组分时，用更换加样器吸头和加样槽，以防出现交 叉污染。 65 洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使 用洗板
