免疫分型教程-新修订

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1、 40-免疫分型教程(1)免疫分型教程(1) 正常骨髓免疫分型 上图是正常骨髓经 CD45、CD71、CD33 染色后组成的 CD45/SSC、CD71/CD33 双参数散点 图 ； 通过这两个组合，能够分辨骨髓的正常细胞、检查是否有异常细胞存在、评估细胞的成 熟情况。 CD45/SSC 图中可见： 1，CD45 强阳性 SSC 低信号的细胞群为淋巴细胞（褐色细胞群体） ； 2，中等强度的 CD45 表达，SSC 信号最强的细胞群体为粒细胞（蓝色及红色细胞群体） ； 3，CD45 表达与 SSC 信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体（绿色细胞群体） ； 4，CD45 阴性，SSC 信号

2、最低的有核红细胞和细胞碎片； CD33/CD71 图中可见： 1，CD33 表达最强的单核细胞群体（绿色） ； 2，粒细胞 CD33 表达较单核弱，不成熟粒表达 CD71，成熟后不表达。 3，淋巴细胞、有核细胞和细胞碎片不表达 CD33、CD71。 CD11B/CD15 图可用来评估髓系细胞向单核、粒分化的程度（随着髓细胞成熟，细胞逐步获 得 CD11B，粒细胞高表达 CD15）： 1，单核细胞（绿色）高表达 CD11B，CD15 中等到表达； 2，粒细胞（蓝色及橘红色）高表达 CD15，蓝色成熟粒 CD11B 表达较橘红色不成熟粒细胞 强，幼稚髓细胞仅表达 CD15 而无 CD11B。 3，

3、T、B 淋巴细胞不表达 CD15、CD11B，NK 细胞表达 CD11B 而无 CD15（红色细胞） 。 4，有核红细胞及碎片不表达 CD15 和 CD11B。 根据骨髓细胞 CD45/SSC 图中分布情况设门圈定各类细胞： R1 门为成熟淋巴细胞； R2 门为正常单核细胞位置； R3 门正常粒细胞位置； R4 门为幼稚淋巴细胞出现位置； R5 门为有核红细胞或细胞碎片位置； R6 门为幼稚髓细胞出现位置； 白血病细胞通常会在 R4、R6 两门位置处出现。 M0 免疫分型M0 免疫分型 M0:急性髓细胞白血病微分化型 原始细胞在光镜下类似 L2 型细胞,核仁明显,胞浆透明,嗜碱 性 ,无 嗜

4、天 青 颗 粒 及 Auer 小 体 ,髓 过 氧 化 酶 (MPO)及 苏 丹 黑 B 阳 性 细 胞 3%的幼稚细胞表达 MPO，较 M0 多。 不表达 CD11B，CD15，CD16 等。 M1:CD11B-/+,HLA-DR+,CD13+,CD33+,CD34+,CD14+,MPO+,TdT-/+to+/-1:CD11B-/+,HLA-DR+,CD13+,CD33+,CD34+,CD14+,MPO+,TdT-/+to+/- M2 免疫分型M2 免疫分型 CD45/RALS 图中细胞分布广泛与 M1 不同，这是因为 M2 细胞已进一 步分化幼稚细胞减少，粒细胞增多并与 BLAST WIN

5、DOWS 区域内细 胞相连。因细胞没有明显分群，很难将异常细胞与正常相区分， 故设立多个门进 行分析检测其成熟度抗原的表达情况。 M2 免疫表型与 M1 类似，HLA-DR，CD33，CD13 阳性。上图中可见 幼稚细胞 CD33 与 CD71 表达均比成熟粒细 胞强。CD13 表达强于 CD33。 M2 肿瘤细胞弱表达 CD15 与 CD11B,说明细胞已分化。 CD34 表达显著降低。 M2 肿瘤细胞不表达 CD5,CD7 和 TdT 等抗原，如病例伴 t(8;21),则 经常表达 CD19 偶表达 CD56。一般肿瘤细 胞 MPO 强阳性。偶见形 态为 M2 并伴 t(8;21)，但 C

6、D13-，CD33-，CD14-，而 MPO+。 细胞分布广泛，幼稚细胞较 M1 少。 CD13 和 CD33 阳性，且 CD13 表达高于 CD33。 HLA-DR 阳性，CD15 弱阳性。 M2 肿瘤细胞伴 t（8，21）CD19 阳性。M2 肿瘤细胞伴 t（8，21）CD19 阳性。 M3 免疫分型 上图为 M3V， 少颗粒型早幼粒白血病细胞， 细胞中颗粒少 RALS 信号 低而集中， SS 座标上出现大量肿瘤细胞。 肿瘤细胞大，FS 信号强。 通过 CD45/RALS 双参图可辨别出 M3 与 M3V。下为经典 M3 多颗粒细胞的 CD45/RALS 和 SS/FS 图。 M3 与 M

7、3V 在免疫表型上无区别。 M3 肿瘤细胞特征性地不表达髓系早期标志物 CD34 和 HLA-DR；部分病例中 CD9 特征性地阳性，但不是完全 特异。CD2 在 M3 与 M3V 中会出阳性表达，在 HLA-DR 阴性的病例中，与染色体 t(15,17)异常相关。 肿瘤细胞 CD33 表达比正常粒细 胞强与正常单核细胞相似， CD13 表达多样。肿瘤细胞不表 达晚期髓细胞 分化抗原 CD15， CD16 和 CD11B。肿瘤细胞完全不表达 CD15，与正常早幼粒细胞表达 CD15 相区别 ； 正常早 幼粒细胞细胞周期中含高比例 S 期细胞，而肿瘤细胞中几乎不见细胞周期。 肿瘤细胞 MPO 阳

8、性，上图中 MPO 与 LACTOFERIN 双染来区分成熟粒 细胞。肿瘤细胞除表达 CD2 外，很少表 达 T 或 B 系抗原。 M3 肿瘤细胞因其胞浆内多颗粒，细胞具有很强的自发荧光。 M3:CD33+,CD13+,MPO+,CD34-,HLA- DR-,CD11b-,CD14-,CD15-,TdT- M4 免疫分型 典型的 M4 病例 CD45/RALS 图中会出现一群异常的单核细胞和一群骨髓幼稚细胞，肿瘤细胞较 M0，M1 细胞的 FS 和 SS 信号增强。有时这两群细胞会相互叠加占据 BLAST WINDOWS 和成熟单核细胞位置，故 难圈出独立成群的肿瘤细胞。对于 M4 病例一般都

9、设多个门对异常细胞进行分析，且每个异常细胞群根据 其成熟度的不同，表型也可能互不相同。本例为 M4EO，增多的嗜酸细胞 RALS 信号与早幼粒相似 CD45 信号与单核细胞相似，本例中为 R4 门中紫色细胞。 幼稚细胞群表达 CD34，HLA-DR，而异常单核细胞则 CD34 阴性，HLA-DR 阳性。 幼稚细胞 CD33 阳性，CD14 阴性，而异常单核细胞则为 CD33 阳性，CD14，CD64 阳性。CD64 表达如象 本图中强阳性表达则为单核细胞特异性标志。 M4 肿瘤细胞在 CD11B/CD15 图中会特征性分布如上，存在幼稚细胞及各期的粒细胞及单核细胞。CD2 表 达与 M4EO

10、有很大相关性，可能与 16 号染色体异常有关。 M4/blast population: CD13+,CD33+,CD34+,HLADR+,CD11b-,CD14- M4/abnomal monocytic cell:CD13+,CD33+,CD34-,HLA- DR+,CD11b+,CD14+/-,CD4+/- M5 免疫分型 M5 肿瘤细胞从细胞大小、颗粒度和 CD45 表达都向成熟单核细胞过渡，形成一大细胞群体。M5 分为二个亚 型 M5a 和 M5b，前者细胞稍大，与成熟单相比 CD45 表达弱但不独立成群。 髓系细胞的分化情况可从 CD15/CD11B 双参数图中观察,本例中肿瘤细胞

11、 CD15 较平常高,但低于右上角黑色 的粒细胞.不成熟的 单核细胞 CD11B 表达弱.如出现 CD33 阳性，CD13，CD34 阴性。 M5 肿瘤细胞通常高表达 CD33，CD13 表达多样。CD4 是髓系幼稚细胞向单核系分化的敏感指标。 CD14 一般表达在成熟单核细胞上，本例中肿瘤细胞 CD14 阴性，CD64 阳性。AMML 病例中，CD64 在单 核细胞上表达特别强。本例中 CD61 弱阳性,这种情况是由于幼稚细胞与血小板粘附造成的。 M5a: HLA-DR+,CD11b+/-,CD34+,CD33+,CD13+,CD14-/+,CD4+/-M5a: HLA-DR+,CD11b+

12、/-,CD34+,CD33+,CD13+,CD14-/+,CD4+/- M5b: HLA- DR+,CD11b+,CD34-,CD13+,CD16+/-,CD14+,CD4+/- M6 免疫分型 本例中可见两群幼稚细胞，M6 的定义是红系祖细胞占骨髓幼稚细胞群体的 50%强，而其他系别的幼稚细胞 可占 30%以上。固诊断 M6 时要依据形态学红系细胞的数量来确定，如仅根据免疫分型很难得出正确诊断， 必须结合形态计数幼稚细胞数量来确定。以上是典型的 M6 免疫分型图，出现两群幼稚细胞。 肿瘤细胞可通过 CD71 强阳性表达加以确认，在一些红细胞稍成熟病例中血型糖白 A 阳性。HLA-DR，CD3

13、4 和 CD33 或 CD13 通常阳性。 很多 M6 病例中会出现一群髓系幼稚细胞，如本例中的红色细胞群体。 M6;CD71+,GP-A+,CD34+/-,HLA- DR+/-,CD13+/-,CD33+/-,CD34+/-,CD14-,CD11b- M7 免疫分型 本例中幼稚细胞 CD45/RALS 信号都不强。与 B-ALL，M6 的肿瘤细胞相似。 M7 肿瘤细胞表达 CD61 和 CD41，髓系抗原表达多样。成熟血小板粘附地白细胞也会表达 CD41 和 CD61，这 时会对诊断产生影响，此时要加做 CD62 来确认是否为成熟血小板粘附造成 CD41 或 CD61 阳性。 本例 CD34

14、 阳性，CD71 弱阳，其他系别抗原不表达。 其他系别抗原均为阴性，与 M0、M1 相似。 M7:HLA-DR+,CD34+,CD33+/-,CD14-,MPO-,TdT- TALL 免疫分型 T-ALL 的肿瘤细胞 CD45 表达较 B-ALL 细胞强， 肿瘤细胞在 CD45/SSC 图中可能会出现在 BLAST WINDOWS 或单 核细胞区或 与正常淋巴细场胞相混。 本例中肿瘤细胞 CD10 阳性， 约三分之一的 T-ALL 会出现该 现象， 但 CD19 绝对阴性。 本例 CD34 阳性， 约 40% 的 T-ALL 的肿瘤细胞 CD34 阳性，与细胞是否表达原始或成熟表型无关。 T-

15、ALL 肿瘤细胞表面 CD3 经常阴性,但如用 PE 标记的 CD3 抗体则经常能检测到弱阳性。 CD3/CD5 双参数图中， 肿瘤细胞总出现在正常 T 细胞以外的位置上,上图中黑色阳性颗粒为正常 T 细胞.肿瘤细胞 CD4/CD8 表达多 样化,但是总与正常 T 细胞的表达不两只,如发现 CD4/CD8 双阳性则提示为 T-ALL。 T-ALL 最敏感的指标是 CD7,但其特异不强有近 30%的 AML 同样阳性。 当 CD7 与 HLA-DR 联用时其特异性增强， 许多 T-ALL，特别是在儿童，CD7 强阳性而不表达 HLA-DR，而在 AML 中 CD7 弱表达并伴 HLA-DR 阳性

16、。 T-ALL 因与 T 细胞的成熟度相关，可被分为三期： pre-thymic：CD7+，CD1a-，CD4/8-，CD3-； thymic:CD7+，CD4/8+，CD3-； matrue:CD3+,CD1a-; 原始 T 细胞 ALL 与 AML 很难区分，要加测胞浆内 CD3。 T-ALL 最常见的表型是：CD2，CD5，CD7，CD1，CD4/8 双阳性，CD3 弱阳性，TdT 强阳性。次其次为 ： CD2，CD5，CD7 和 TdT 强阳性。再次为 ： CD2，CD5，CD7 伴 CD4 或 CD8 部分表达，CD3 表达少并少量表达 TdT。 T-ALL 最常见的表型是：CD2，CD5，CD7，CD1，CD4/8 双阳性，CD3 弱阳性，TdT 强阳性。次其次为 ： CD2，CD5，CD7 和 TdT 强阳性。再次为 ： CD2，CD5，CD7 伴 CD4 或 CD8 部分表达，CD3 表达少并少量表达 TdT。 T-ALL 的共同特征是：下调表达的共同特征是：下调表达 T 系抗原或出现异常抗原的联合表达。系抗原或出现异