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1、食品中溶血性链球菌的检验,主要内容 溶血性链球菌概述 溶血性链球菌生物学特性 溶血性链球菌检验,一、概述,（一）分布：在自然界分布较广，可存在于水、空气、尘埃、牛奶、粪便及人的咽喉和病灶中。 （二）分类 1、按溶血能力分类： （1） 甲型（）溶血性链球菌 （2）乙型（）溶血性链球菌 （3） 丙型（）链球菌,一、概述,2、按血清学分类 主要是根据链球菌细胞壁抗原进行分类，这种方法可靠，但工作复杂。 根据族特异性抗原的不同，将乙型（）溶血性链球菌 分成A B C D E F G H K L M N O P Q R S T，共18族 在一个族内因表面抗原（即型特异性抗原）不同，又分成若干型。如A族分
2、成60多个型， B族分为4个血清型， C族分成13个血清型。用阿拉伯数字表示。 与人类疾病有关的大多属于乙型溶血链球菌，其血清型 90%属于A族链球菌。,（一）形态与染色： 1、呈球形或卵圆形， 直径0.5um-1um 链状 排列（长短不一） 2、革兰氏染色阳性， 衰老培养物常成阴性 3、无芽孢、无鞭毛、多数无夹膜,二、 生物学特性,二、 生物学特性,（二）培养特性 1、多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧或专性厌氧 2、 对营养要求高，普通培养基不能良好生长，（需加血清、血液、腹水等）。大多数菌株需苏氨酸、核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。 3、最适温度37 PH7.47.6 4、在液体培养
3、基中，溶血菌株,呈絮状或颗粒状沉淀生长（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长，如粪链菌。,（二）培养特性 5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、圆形突起的细小菌落，直径0.50.75mm，针尖大小。不同菌型其菌落周围的溶血现象不同。甲型在菌落周围出现1-2mm的绿色溶血环，放冰箱一夜呈透明溶血环，且溶血环扩大；乙型在菌落周围有2-3mm的透明溶血环；丙型菌落周围不具溶血环。,二、 生物学特性,二、 生物学特性,(三)生化特性 1、均分糖葡萄糖产酸 2、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。 3、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶。 4、乙型溶血链球菌山梨醇阴性，不被胆汁溶解、不分解菊
4、糖，奥普托辛试验阴性，可与肺炎双球菌区别。 4、触酶阴性可与葡萄球菌区别。 5、 A族菌对杆菌肽敏感，可被其抑制。,二、 生物学特性,（四）致病性链球菌可产生的毒素和酶 1、溶血素：有溶解红细胞，杀死白细胞、血小板及毒害心脏的作用，有O和S两种。 链球菌溶血素O为含有-SH基的蛋白质，能破坏白细胞和血小板，动物试验又证实对心脏有急性毒害作用，使心脏骤停，抗原性强，感染后23周，85%以上病上产生抗“O”抗体。 S为小分子多肽，相对分子质量较小，故无抗原性。 S对氧稳定，对热和酸敏感。 血平板所见透明溶血是由“S”所引起，能破坏白细胞和血小板，给动物静注可迅速致死。注射小鼠腹腔，引起肾小管坏死。
5、,二、 生物学特性,（四）致病性链球菌可产生的毒素和酶 2、致热外毒素：曾称红疹毒素(Erythrotoxin)或猩红热毒素(Scarletfever toxin)，是人类猩红热的主要致病物质，为外毒素。主要有A族链球菌产生。小剂量可使局部产生红疹，大剂量引起全身性红疹，并伴有发热、头痛、恶心、呕吐、周身不适等。 3、透明质酸酶：又称扩散因子，可溶解组织间质的透明质酸，故能增加细菌的侵袭力。 4、链激酶：又称溶纤维蛋白酶，具有增强细菌在组织中的扩散作用。 5、杀白细胞素：在肉汤培养基中培养可产生。可使白细胞失去动力，变为球形，最后膨胀破裂。,二、 生物学特性,（五）抵抗力 抵抗力一般不强，60
6、30min即被杀死，对常用消毒剂敏感。 乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺均敏感。青霉素是溶血链球菌感染的首选药物。 (六)流行病学与致病性 溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。,二、 生物学特性,一般来说，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品： 1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性炎症时造成食品的污染； 2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺
7、炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染； 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。,化脓性链球菌),三、微生物检验,（一）检验程序 液体检样 固体检样样品处理增菌培养分离培养分纯培养生化鉴定报告 （二）检验操作要点 1、采样：食品：按常规 2、增菌培养： 葡萄糖肉浸液肉汤 ：一般情况 361 24h 匹克氏肉汤：在污染严重时用,（二）检验操作要点 3、分离培养：血平板， 37 24h,菌落:灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有透明溶血环
8、 4、分纯培养：血平板 37 24h 5、镜检：革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者可做生化鉴定。,三、微生物检验,（二）检验操作要点 6、生化鉴定： （1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验） 吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入链球菌18-24h36肉浸液肉汤培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，置于36水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。,三、微生物检验,三、微生物检验,（二）检验操作要点 6、生化鉴定： （2）杆菌肽敏感试验 将分纯的乙型溶血性链球菌接种血平板，在划线处贴附杆菌肽纸片，3718h，出现抑菌带为阳性，据此可推测为乙型溶血性链球菌。,（二）检验操作要点 7、报告： 根据培养后的形态，菌落特征及生化试验可报告： 有乙型溶血性链球菌生长。,三、微生物检验,思考题,1、链球菌的溶血现象有哪几个类型，各类型的溶血特征如何？ 2、溶血性链球菌能产生什么毒素和酶？ 3、溶血性链球菌在血平板中生长有何特征？,
