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1、家畜人工授精技术简介,主讲人：李井春 黑龙江八一农垦大学,内容简介,第一节 概述 Section 1 Introduction 第二节 采精 Section 2 Semen collection 第三节 精液品质检查 Section 3 Semen quality examination 第四节 精液的稀释 Section 4 Semen extend and extenders 第五节 精液保存 Section 5 Semen storage 第六节 输精 Section 6 Insemination,第一节 概 述 Section 1 Introduction of AI,一、概念 二、意
2、义 三、AI发展概况,一、AI概念 利用器械采集公畜的精液，经检查和处 理后，再用器械将精液输入到母畜生殖道 的适当部位，使之妊娠，以此来代替公母 畜自然交配一种科学配种方法。,第一节 概 述 Section 1 Introduction of AI,二、AI在畜牧生产中的意义 1、提高良种公畜配种效能； 2、提高母畜受胎率； 3、防止疾病的传染； 4、克服公母畜体格差异使交配不易的困难; 5、采用冷冻精液技术，使种公畜的利用不受地域限制，同时也加快了育种步伐； 6、降低饲养管理费用； 7、推广繁殖新技术的一项基础措施。,三、AI的发展简况 Brief introduction （一）试验阶段
3、 Experimental stage （二）实用阶段 Application stage （三）冷冻精液阶段 Freezing semen stage,第二节 采 精 Section 2 Semen collection,一、采精前的准备 Preparations 二、采精方法 Collecting methods 三、采精频率 Frequency of semen collection,一、采精前的准备 Preparations （一）采精场地 Collection yard 使公畜建立良好的性反射并防止精液污染，并能 使采精工作易于进行。采精场内设有采精架以保定台 畜，或设立假台畜。,马
4、采精横木架及母马保定,（二）台畜的准备 Dummies and mounts 采精时可以用假台畜，也可以用活台畜，但要进行 训练，并且其尾根、外阴、肛门等部位要清洗，擦干 净。,（三）公畜的准备 1、公畜体况：必须选用体质健康的公畜。 2、公畜的调教与采精前准备 外激素法：于假台畜后躯涂抹发情母畜尿液，或阴道粘液。 空爬跨：采精前先让公畜空爬几次，可以增强性欲和提高精液品质。 真假法：在假台畜身旁放一发情母畜。 观摩法（隔栏学习法）：看已调教好的公畜爬跨假台畜采精。,二、采精方法 Collecting methods 定义：借助特定的器械将雄性的精液采集出来的技术。 （一）假阴道法 Artif
5、icial vagina （二）手握法和筒握法 A gloved hand （三）按摩法采精 Massage method （四）电刺激采精法 Electroejaculation,（一）假阴道法 （用于牛、马） 原理：利用人工模拟发情母畜的阴道环境，诱导公畜在其中射精的方法。 1、假阴道的结构和安装 （）结构：内胎、外壳、漏斗、集精瓶（杯）、充气和水孔、固定胶圈,度温水,固定胶圈,外壳,漏斗,集精瓶,2、假阴道的准备 应满足三个条件：温度、压力和润滑度 （1）适宜的温度：加入温水（保持在38-40）； （2） 适当的压力：冲入气体； （3）一定的润滑度：涂抹石蜡油。,不太理想的状态（但可以用
6、）,牛羊假阴道安装充气后理想的状态,3、采精操作 Procedures（实习中学习） （1）可以将假阴道置于假台畜后躯内，并使假阴道纵轴方向与公畜阴茎伸出方向在同一直线上。 （2）采精员也可以站在台畜右侧，手持假阴道采精，当公畜爬跨阴茎勃起伸出，将阴茎导入假阴道。,（二）手握法和筒握法采精（仅用于公猪） 1、手握法采精：采精员戴上手套握住勃起并已突出包皮 的公猪龟头，缓缓顺势拉出，并有节律的松紧握手，就能 采到公猪的精液。此法在南方全年和在北方夏季都可采 用。 2、筒握法采精：用普通的假阴道，但前端末装集精瓶， 当公猪阴茎插入假阴道后，在假阴道漏斗部握住公猪龟头 采精的方法。,（三）按摩法采精
7、（Massage method） 采精员用手经直肠壁找到公畜的精囊腺和壶腹腺，轻柔按摩。可达到使公畜阴茎部分勃起而射精。 该法适用于牛、犬和家禽。,（四）电刺激采精法 Electroejaculation 通过电极隔直肠壁选择一定的频率通电，刺激输精管壶腹，使公畜阴茎勃起并射出精液。一般在麻醉状态下进行。 这一方法一般用于未经采精训练或胆小不易控制的动物，如各种野生动物和丧失交配能力但种用价值高的公畜。,电刺激采精装置,三、采精频率 Frequency of semen collection 定义（记忆）：指在一定时间内（通常为次周）采精的次数。 公牛：每周2-3/次周 猪、马：因为射精量大，
8、隔日一次. 绵、山羊：配种季节内，每天可采精多次，并连续数周 一般在观察到精子尾部有未脱落的原生质小滴，说明采精频率过高，此时应减少或停止采精。,采精频率是以雄性生产精子的能力来决定。 eg. 每克睾丸组织每天产生2500万精子 1头公猪的1对睾丸重 1000克 1次射精量为250ml 每ml精子数为 2亿 则2500万1000克 7日1750亿精子/周 每次射精精子数为250ml 500亿 每周采精次数为1750亿500亿2.5次 采精频率过低则经济上不划算，过高则阻碍公畜的 生长发育和缩短其使用寿命。,第三节 精液品质检查 Section3 Semen quality evaluation
9、,目的：是了解精液质量高低、种公畜配种负担能力、精液稀释倍数、采精时精液是否受到污染和采精技术好坏程度的工作。 包括： 外观检查 显微镜检查（精子活率、密度、形态） 微生物检查 精子代谢能力检查 其他检查（受胎效果）,一、精液外观性状检查法 （一）精液量(ml) 奶牛：5-10；肉牛：4-8； 绵羊：0.8-1.2 ； 猪：150-300；山羊：0.5-1.5；马：30-100,（二）颜色与气味 一般为乳白色或灰白色。正常牛羊精液呈乳白色或乳黄色，猪、马的精液呈淡乳白色或浅灰白色。,(三)云雾状 浓份精液因精子密度大、活力强，使精液翻腾 呈现旋涡云雾状。 （四）pH值 牛、羊精液pH值为6.5
10、-6.9, 猪、马为 7.4-7.5。 一般同种精液pH值较低的品质较好。 （五）杂质 如被毛、脱落上皮、炎性分泌物、灰尘、纤 丝。,二、精子活率检查 精子活率：在显微镜下观察，在一个视野内向 直线前进运动的精子占全部精子总数的百分率。 一般在37-38C温度下进行评定，牛、羊精液尚需 用生理盐水作稀释后才能评定。 活力一般用0-1.0的10级评分，一般新鲜采精液活率 应该为0.70.8左右。,三、精子密度的检查（P148） 精子密度：是指单位体积（ml）精液内 所含有的精子数。,(一）目测法：在低倍显微镜下根据精子之间的距离来定，分为密、中和稀三等。,（二）血细胞计数法： 取1ul精液或其稀
11、释液渗入血细胞计数板内，计数精子数目并根据倍数算出精液密度。,（三）光电比色法：是根据精子的透光性而测定精子数的方法。透光性越高，则精子数越少，透光性越差，则精子数越多。现在甚至可与计算机联接，立即知道被测精液的活率和密度。,四、精子的形态检查 1、精子畸形率：头部、颈部、尾部，观察200个精子，求出比例。用于输精的精子畸形率不得超过20%。 头部：巨大，细小，缺失，双头，轮廓不明显，皱缩 颈部：臌大，纤细，弯曲，不全，原生质滴 尾部：屈折，带原生质滴，双尾，折断，纤细,双头和双尾精子,2、精子顶体异常率 顶体与精子受精能力直接有关，牛超过14%，猪超过4.3%，显著降低受精率。,五、精子代谢
12、能力检查 （一）精子生存时间和生存指数 精子生存时间（记忆）：指精子在体外一定条件下 （稀释液、稀释倍数、保存温度和方法等）的总生存 时间。 具体算法：所有间隔时间累加后减去最后两次间隔时间的一半即为精子的存活时间。 精子生存指数（记忆）：相邻两次检查的间隔时间与 平均活力的积之和。 是精子存活时间与精子活率下降变化的一项综合指 标。 精子生存时间越长，则生存指数越大，说明精子生 活力越强，品质越好。,生存时间：48-8/2=44h,生存指数： h平均活率=16.8,精子生存时间=所有间隔时间累加后减去最后两次间隔时间的一半即为精子的存活时间 精子生存指数=相邻两次检查的间隔时间与平均活力的积
13、之和,（二）美蓝褪色试验 美蓝是氧化还原剂，氧化呈蓝色，还原呈无色，精子在美蓝溶液中，呼吸时氧化脱氢，美蓝获得H+后便使蓝色还原为无色。因此，根据美蓝褪色时间可测知精液中存活精子数量多少，判定精子的活率和密度高低。 （三）精液果糖分解测定 精液果糖分解能力与精子活力密切相关，因此测定一亿精子每小时消耗果糖的mg数来表示 精子的果糖分解能力，甚至反映精子活率和密度的高低。,第四节 精液的稀释 Section 4 Semen dilution,一、精液稀释的目的 Aims of semen dilution 二、稀释液的成分及作用 Composition of extenders (diluent
14、s) 三、稀释液的种类和配制 Types and make-up of extenders (diluents) 四、精液稀释方法和稀释倍数 Methods and multiple of semen dilution,一、精液稀释目的 1、精液稀释 定义：往精液中加入适宜精子体外存活，并保持精子受精能力的一定量稀释保护液。 2、精液稀释目的 （1）扩大精液量增加可配数； （2）延长存活时间； （3）便于运输和保存。,二、 稀释液的成分及作用 （一）稀释剂扩大容量 一般配制与精液具有等渗压的氯化钠、葡 萄糖或奶类液体。 （二）营养剂供能 糖类、奶类和卵黄均可。如果糖、葡萄糖、 乳糖和蔗糖等。
15、（三）保护剂中和、缓冲精清对精子保存的不良影响，防止精子受“低温打击”，创造精子生存的环境和抑制细菌等。,1、缓冲物质：保证精液适宜pH值，利于精子的存活，如柠檬酸钠、磷酸二氢钾、Tris。 2、非电解质：延长精子在体外存活时间。如各种非电解质或弱电解质，糖类或甘氨酸。 3、防冷休克物质：在精液在冷冻或解冻过程中，精子内外环境的水分，将经历液态和固态的转化过程，对精子危害较大。抗冷物质中卵磷脂和乳脂的双向亲和性对保护精子不受或减弱冷打击。常用卵黄或奶类。 4、抗冻物质：抗冻剂有提高精液冰点，少量渗入精子可降低冷冻损伤（减少冰晶形成），从而达到抗冻作用。常用甘油或二甲基亚砜(DMSO)。 5、抗
16、菌物质：抑制精液中和操作中带入的微生物的繁殖。如青链霉素、磺胺等。,（四）其他添加剂 1、酶类：H2O2酶，分解精子代谢过程中产生的H2O2，消除其危害，利于维持精子活率。-淀粉酶能促进精子获能，提高受胎率。 2、激素：OT、PG等，促进母畜生殖道的蠕动。 3、维生素：VB1、VB2、VC，利于精子存活。 4、其他：CO2、乙酸、植物汁等，可降低稀释液的pH值，有助于精子保存。,三、稀释液的种类和配置 （一）稀释液的种类 1、现用稀释液 奶类和等渗糖类为主。 2、常温保存稀释液 用于常温保存精液，pH较低。 3、低温保存稀释液 用于低温保存精液，含有卵黄和奶类等抗冷休克物质。 4、冷冻保存稀释液 用于冷冻保存精液，含抗冻物质如甘油、DMSO 。,（二）稀释液的配制 1、各种成分的准备 （1）蒸馏水：现制、灭菌。 （2）化学药品：成分要纯净，溶解过滤后消毒，高温变性药品应用细菌滤膜过滤。 （3）奶类：新鲜，不含其它物质。于（9095）水浴10min，去除奶皮。 （4
