流式细胞术免疫分型基础

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1、流式细胞术免疫分型基础流式细胞术免疫分型基础 免疫分型组成免疫分型组成 识别细胞识别细胞 诊断标准诊断标准 干干/祖细胞：祖细胞：CD34，CD38，HLA-DR，TdT 髓系：髓系：CD33，CD13，CD15，CD11b，CD14，CD64， cMPO，CD117, CD11c, CD36 红系：红系：CD71，glyA 巨核系：巨核系：CD41，CD61 B 细胞：细胞：CD10，CD19，CD20，CD22，CD23，k，, cCD79a,cIgM, (CD5, CD11c, CD103, CD25, FMC7) T细胞：细胞：CD2，CD3，CD5，CD7，CD4/8， cCD3,

2、TCR NK细胞：细胞：CD16，CD56，（，（CD3 - /CD56+） 浆细胞： ） 浆细胞：CD138，CD38, ck，c 系别相关标志系别相关标志 原始细胞（原始细胞（Blast） 形态学上的原始细胞包括：形态学上的原始细胞包括： 干细胞干细胞 粒系：原粒粒系：原粒+早幼粒细胞（有颗粒原粒？）早幼粒细胞（有颗粒原粒？） 单核系：原单单核系：原单+幼单幼单 淋巴系统：原淋巴系统：原+幼淋幼淋 原始巨核原始巨核 髓系幼稚细胞髓系幼稚细胞 幼稚细胞包括原粒、原单、原始巨核、幼单。幼稚细胞包括原粒、原单、原始巨核、幼单。 异常单核不能算幼稚单核，在鉴别急性粒单细 胞白血病、急性单核细胞白血

3、病、慢性粒单细 胞白血病中有重要作用。 异常单核不能算幼稚单核，在鉴别急性粒单细 胞白血病、急性单核细胞白血病、慢性粒单细 胞白血病中有重要作用。 小的异常增生巨核和微巨核不能算幼稚细胞。小的异常增生巨核和微巨核不能算幼稚细胞。 在在APL中，异常早幼粒也算幼稚细胞。中，异常早幼粒也算幼稚细胞。 原红一般不计在内，除非罕见的急性纯红细胞 白血病。 原红一般不计在内，除非罕见的急性纯红细胞 白血病。 髓系幼稚细胞免疫标志髓系幼稚细胞免疫标志 原粒、原单：原粒、原单：CD34、CD117、HLA-DR、CD13、 CD33、MPO+/- 原始巨核原始巨核:CD61、CD41a、CD9、CD36（不

4、特异）（不特异） 幼单：幼单：CD15dim、HLA-DRstr、CD64、CD11c、 CD4dim、CD11b、CD33str、CD13、CD14- APL：HLA-DR-、CD34-、CD117+、CD9+、 CD15-/+、CD33str、CD64+、CD13dim 淋系幼稚细胞淋系幼稚细胞 幼稚细胞包括原始淋巴、幼稚淋巴。幼稚细胞包括原始淋巴、幼稚淋巴。 表型：表型： 幼稚标志幼稚标志+泛泛B/T标志标志 幼稚标志：幼稚标志：CD34、TdT、B系（系（CD10）T系 （ 系 （CD1a、CD99str) 泛泛B：CD19、cCD79a、CD22 泛泛T：胞浆：胞浆CD3、CD7、C

5、D2、CD5 不表达成熟标志：不表达成熟标志：B系胞膜轻链；系胞膜轻链；T系系CD4、 CD8、CD3 2008 WHO分类2008 WHO分类 偏成熟髓系疾病偏成熟髓系疾病 髓系增殖性肿瘤(MPN)（包括肥大细胞增多症）髓系增殖性肿瘤(MPN)（包括肥大细胞增多症） 伴有嗜酸细胞增多和PDGFRA、PDGFRB、FGFR1异常的 髓系和淋系肿瘤 伴有嗜酸细胞增多和PDGFRA、PDGFRB、FGFR1异常的 髓系和淋系肿瘤 MDS/MPNMDS/MPN MDSMDS 急性髓系白血病和急性未定系列白血病急性髓系白血病和急性未定系列白血病 前体淋巴肿瘤前体淋巴肿瘤 成熟淋巴增殖性疾病成熟淋巴增殖

6、性疾病 B细胞淋巴瘤B细胞淋巴瘤 T或者NK细胞淋巴瘤T或者NK细胞淋巴瘤 何杰金氏淋巴瘤何杰金氏淋巴瘤 免疫缺陷病免疫缺陷病 组织细胞和树突细胞肿瘤组织细胞和树突细胞肿瘤 MPN（髓系增殖性肿瘤） BCR-ABL1阳性慢性髓系白血病（chronic myelogenous leukemia,CML) BCR-ABL1阳性慢性髓系白血病（chronic myelogenous leukemia,CML) 慢性中性粒细胞白血病(CNL)慢性中性粒细胞白血病(CNL) 真性红细胞增多症(PV)真性红细胞增多症(PV) 原发性骨髓纤维化(PMF)原发性骨髓纤维化(PMF) 特发性血小板增多症(ET)

7、特发性血小板增多症(ET) 慢性嗜酸性粒细胞白血病，NOS(CEL)慢性嗜酸性粒细胞白血病，NOS(CEL) 肥大细胞增多症(mastocytosis)肥大细胞增多症(mastocytosis) 髓系增殖性肿瘤，不能分类的(MPN.U)髓系增殖性肿瘤，不能分类的(MPN.U) CML加速期(Accelerated Phase,AP) 出现下述之一考虑CML AP： PB中嗜碱性粒细胞超过20%；（嗜碱性粒细 胞识别：位置：CD45/SSC图，原粒的左上， 表达CD9、CD123、CD203c、CD22dim） PB或者BM中髓系幼稚细胞为10-19% 幼稚细胞克隆为非髓系。 出现下述之一考虑C

8、ML AP： PB中嗜碱性粒细胞超过20%；（嗜碱性粒细 胞识别：位置：CD45/SSC图，原粒的左上， 表达CD9、CD123、CD203c、CD22dim） PB或者BM中髓系幼稚细胞为10-19% 幼稚细胞克隆为非髓系。 CML急变期（Blast Phase, BP）CML急变期（Blast Phase, BP） 表现为下述之一： PB中原始细胞占白细胞20%以上，BM中原 始细胞占有核细胞20%以上， 原始细胞髓外增生。 70%的病例BP是急髓变，包括中性粒、嗜酸 性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核系、巨核系 或者红系急变，或者上述组合，20-30%为淋 系急变。 表现为下述之一： PB中原

9、始细胞占白细胞20%以上，BM中原 始细胞占有核细胞20%以上， 原始细胞髓外增生。 70%的病例BP是急髓变，包括中性粒、嗜酸 性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核系、巨核系 或者红系急变，或者上述组合，20-30%为淋 系急变。 MDS/MPN CMML aCML, BCR-ABL1- JMML MDS/MPN, U CMML诊断标准诊断标准 1、持续性PB单核细胞增多1X109/L（20%) 2、无Ph染色体或者BCR/ABL1基因 3、无PDGFRA或者PDGFRB重排（尤其是伴嗜酸性粒细 胞增多的病例） 4、PB和BM中幼稚细胞20% 5、至少1个髓系增生不良，如果没有或者只有轻微 髓系增生

10、不良，需要其它条件：造血细胞中存 在获得性、克隆性细胞或者分子遗传学异常，或 者单核细胞增多至少持续3个月和排除其它所 有导致单核细胞增多的原因。 急性白血病(acute leukemia)诊断标准急性白血病(acute leukemia)诊断标准 BM：建议用瑞氏染色，计数500个分化细胞，PB计 数200个 BM：建议用瑞氏染色，计数500个分化细胞，PB计 数200个 如果有明显的细胞减少，可以使用棕色层（buffy coat）涂片。 如果有明显的细胞减少，可以使用棕色层（buffy coat）涂片。 如存在骨髓纤维化，不能涂片，如果blast表达 CD34,活检片子CD34+20%也可

11、以诊断。 如存在骨髓纤维化，不能涂片，如果blast表达 CD34,活检片子CD34+20%也可以诊断。 急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)诊断标准 急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)诊断标准 BM或者PB中：髓系原始细胞20%，或者有髓外侵 润。 BM或者PB中：髓系原始细胞20%，或者有髓外侵 润。 特例：特例： 1、重现性遗传学异常，髓系幼稚细胞、重现性遗传学异常，髓系幼稚细胞=骨髓有核细胞的50%时的 可能诊断 红系前体细胞=骨髓有核细胞的50%时的 可能诊断 MDS幼稚细胞骨髓中 非红系的 幼稚细胞骨髓中 非红系

12、的20% BM中和中和/或或PB中幼稚 细胞 中幼稚 细胞20% 50%50% M6幼稚细胞骨髓 中非红系的 幼稚细胞骨髓 中非红系的 20% BM中和中和/或或PB中幼稚 细胞 中幼稚 细胞20% 50% 诊断其它表现诊断其它表现PB/BM发现发现BM中红系前 体 中红系前 体% 注意：非红系的计算，红系前体、淋巴细胞、浆细胞都不计在内。注意：非红系的计算，红系前体、淋巴细胞、浆细胞都不计在内。 AML，NOS亚型：参照亚型：参照FAB 界限不 清，出现 分化标志 原粒以外，有分化阶段粒细 胞， 界限不 清，出现 分化标志 原粒以外，有分化阶段粒细 胞， POX,SBB,CE+ 原粒原粒90

13、%，单核系，单核系20%M2 单核标志单核系为主，单核标志单核系为主，NAE+NAF抑制单核系抑制单核系 80%M5 R6明显红系和粒系原幼明显红系和粒系原幼+分化细胞， 红系 分化细胞， 红系PAS阳性阳性 20%以上，有核红占有核细 胞 以上，有核红占有核细 胞50%以上或者红系以上或者红系80%以 上 以 上 M6 巨核标志原始巨核，巨核标志原始巨核，PAS粗颗粒阳性原始巨核粗颗粒阳性原始巨核20%以上以上M7 3群细胞粒单两系原始加分化细胞，群细胞粒单两系原始加分化细胞， POX,CE, NAE+NAF抑制 原幼粒 抑制 原幼粒+成熟粒成熟粒 20% 原幼单原幼单+成熟单成熟单 20%

14、 M4 干祖干祖+全 髓标志 原粒为主，分化阶段少，全 髓标志 原粒为主，分化阶段少， POX,SBB 3% 原粒原粒90%M1 干祖干祖+全 髓标志 像原始淋巴，全 髓标志 像原始淋巴，POX,SBB3%不定M0 表型形态学髓系幼稚占非红系比例亚型 不定M0 表型形态学髓系幼稚占非红系比例亚型 LBL/ALL定义LBL/ALL定义 定义：以局部团块为主，没有或者很 少 定义：以局部团块为主，没有或者很 少PB、BM侵润，为淋巴瘤。根据细 胞成熟阶段分为成熟淋巴瘤或者淋巴 母细胞淋巴瘤 侵润，为淋巴瘤。根据细 胞成熟阶段分为成熟淋巴瘤或者淋巴 母细胞淋巴瘤(LBL) 如果局部和如果局部和PB/

15、BM都有，分类比较武 断，有的以 都有，分类比较武 断，有的以25%为界，一般骨髓幼稚 细胞 为界，一般骨髓幼稚 细胞20%不考虑不考虑ALL，而为，而为LBL。 淋巴肿瘤的定义淋巴肿瘤的定义 成 熟 度 累及范围累及范围 NHL成熟淋巴 白血病/淋 巴瘤 成熟 淋巴 白血 病/淋 巴瘤 NHL成熟 LBLALLALLLBL幼稚 都有BM、 PB25% BM、 PB 髓外为 主 前体前体B细胞白血病细胞白血病/淋巴瘤，淋巴瘤， NOS B-ALL：以胞膜免疫球蛋白为界，不包括：以胞膜免疫球蛋白为界，不包括 Burkitt。 表型：表型：CD19+/cCD22+/cCD79a+，但是都 不特异，需要组合 ，但是都 不特异，需要组合+高强度表达。高强度表达。 表1 B-ALL/LBL免疫表型分类表1 B-ALL/LBL免疫表型分类 +cCD79a +CD22# +CD19 +-sIg +-cIgM +-CD20 +-CD10 -+CD34 -+TdT Mature B-ALL 现现Burkitt样白 血病 样白 血病/淋巴瘤淋巴瘤 Transitional pre-B-ALL* (无无EGIL编码编码) Pre B-ALL (EGIL B-III) Common B- ALL (EGIL B-II) Pro B-ALL (EGIL B-I)标志标志 -：75%病