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1、黑龙江医药 , 学 , 封三 仙人掌果色素的高效液相分析 溉冬 提要通过提取分离测定附莱城的 方法 , 对 生长在西 西里的仙人掌果的色素进行研究用不 同溶荆系统 试脸表明 , 用水一乙醉溶荆系统 适于 色紊的提取 。 用固定相 一 反 相低压柱 层析对甜莱城预分 离是合适的 。 用磷酸 盐坟 冲液一甲醉能使主妥的黄色 素和萦红色素明显地溶解 并得到了高质 圣的色 素 。 用 比例为的 同样溶荆洗脱 , 分离出三个 次级黄色素和萦红色素 。 用分光 光度计在 处测定黄 色素含女在处浏定紫红色素含 全 。 用反相 沮定 处理后高质贡色素的含 , 其条件为 一个柱 , 洗 脱液碑酸盐缓 冲液一甲醉
2、 , 用分光光 度计在处检浏 红色素 , 在 处 检测黄色素 。 这个黄 色紊是纯仙人掌果黄质 , 而萦红色素认定是附莱戒和异甜菜贰 前言自从欧共体国家法规限制使用合成红色素作 为食品添加剂 , 并查禁了有害添加剂以来 , 人们逐渐 对夭然色素产生浓厚兴趣 。 甜菜贰 , 亦称甜菜红 , 在夭然色素中已被欧共体 和意大利法律法规所接受 , 列 , 它主要用于着 色不藉加热处理的食品 , 如酸牛奶 , 糖果 , 糕点 , 冰淇 淋 , 密饯和香肠 。 甜菜贰是一组配基对映甜菜伏和异 甜菜式的 一花青昔 的糖贰的主要成份见图 , 其 结构已由 等人确定 。 一花青昔是目植物色素 , 它为 分类中的
3、化学成份 , 如一些植物的花色贰一花育 昔通常认为与甜菜黄素同源花青普包括两种色素 其它研究者已列出种花育昔 , 代表个科种 植物 , 通过检测另外种仙人掌植物发现 了新的 花青昔 , 在仙人掌一文中与合作者确定出两 个主要色素 , 一个紫红甜菜昔 , 它通 常伴有少量在 上异构的异甜菜昔 , 另一个是仙人掌黄质 图 对甜菜昔颜 色剂的研 究始于意大利种植的草 幕 , 色素的提取是很容易的 , 但必须除去毒贰 , 由此 获得的产品由于其着色力和稳定性而试验用于软饮 以泊 笠 。 才今 一 一 飞 点 弘 。 浅 以力 图仙人掌主要色素 甜菜红 二异甜菜红 仙人掌果黄质 料和酒精饮料中 在南部意
4、大利 , 农林部把热带水果栽培和利用 作为研究项目 , 对仙人掌果色素很感兴趣 , 因此我们 研究了使用固相技术和高效液相分析来提取和测定 这些色素的方法 。 实验原料来 自西西里种植的仙人 掌成熟果实 , 黑龙江医药 一 , , 计算 、 、 系统在均化前剥去皮薄层层析 采用 , 厚的硅胶板 色紊提取上述果浆于下列提取溶剂 中和 , 厚纤 振摇水稀柠檬酸乙醇一水维素板 , 用双流动相 展开 和乙醇一柠檬酸搅拌 , 后 , 悬浮液在 乙酸一甲醇和乙酸一丙醇一水 。 转离心 , 重复提取三次 , 直至颜色全部去 , 分 析用板 掉 , 含水提取物稀释至而 , 放于振荡 器中 , 在稀 , 展开剂
5、为 释之前用旋转燕发器于 真空蒸去乙醇 。 。 磷酸盐缓冲液和和磷酸盐缓 提 取物 色谱在可见 光范围 内用一 个菲利浦冲液一乙睛 , 和 分光光度计扫描 、 色素浓缩液用甜菜昔在 二 。测定 , 用仙人掌黄质通过 二 表结果 固定相展开 荆 硅胶 纤维紊 硅胶 酸甲醉 酸丙醉 水 , 碑醚盐缓 冲液 乙猜 , 萦色黄 色 低压柱层析 预实验用玻璃柱 于黑暗处在顶端充洗脱 , 用 。 展开剂磷酸盐缓冲 液一乙睛 , 和 , 用硅 胶 一 和 一一 生化 展开剂磷酸盐 缓冲液一甲醇 , , 和 。 色素的反相 柱层析试验将上述 一 装填 进一个柱中 , 暗处充洗脱 , 分二步 完成 , 第一 步
6、用 。 磷酸盐缓冲液一甲醇 , 第二步用磷酸盐缓冲液一甲 醇 。 , 然后用异丙醇冲洗柱子 , 用第一步洗脱 液活化之 , 以进行新的分离 色素的 系统 包括一 个型泵 , 一 个 型进样器和一个型 一 分光 光度仪一个 一 , 一 拜 , 柱 , 用 。一 磷酸 盐 缓冲液 一甲醇 以 速率洗脱 预检样在和试验 检测二次 , 以确定黄色和紫红色部分的最大 特征吸收峰 。 市售的甜菜昔用上述方法 提纯 , 作为甜菜昔和异甜菜昔标准品 , 用所得样进行 。 色 素中糖贰的醇化降解为了从糖贰 中分离贰 元 、 取用糖贰醇按和和 和处理紫色素体积的紫色部分 和红甜菜提在 用 一糖 贰 保温 培 养
7、。 立即移动样品 , 后进样 , 跟踪糖贰 峰消失 。 表低压柱层析结果 固定相洗脱荆 硅胶碑酸盐缓 冲液 七猜 , 洗脱结果 分 离不好 一 硅胶 一 硅胶 同上 第一步洗 脱荆 醉 第二步洗脱荆 醉 碑酸 缓 中液 娜 一两带黄 受变竺尧彭萝牡重乡 “ 合物, 门下 一 侧已 又 、 一派 巴 麟酸 缓冲 液 一 七 个 少带粉色 二紫红色 、 检色 黑龙江医药 , , 结果和讨论仙 人掌果水醇提取物的可见吸 收光谱与其果汁可见 吸收光谱相同从 中可以看到 两个吸收带 , 一是黄色素在的吸收 , 另一是紫 红色素在的吸收 , 它们的平均含量在鲜果 肉 中每百克黄色 素约 , 紫红色素约 ,
8、 即二 者之比为试用不 同溶剂提取的色素收率无明显 差异选择乙醉一水 。 溶剂是因为此溶剂可以 从果 肉中完全分离色素 , 而不必再次提取多糖和其 它醇不榕物 , 使色素提取物进一步纯化 。 色素的预层析 在不同吸附层的板上用数个溶 剂系统做预试验 , 其值如表所示 。 在硅胶板和 纤维素板上分离出的红色可见色谱带表明此带是紫 色和黄色素的混合物 。 硅胶板与其它两种薄板 相比在短时间 内有着分离紫色和黄色色素的最佳分 离效果 。 因为溶剂既使避光 密闭也会蒸发引起色带 很快褪 色 , 所以可以认为不能 达 到预试 验目 的 液相层析预试验由于硅胶板的弱离子文 换能力而在上能最好地气紫 色素中
9、分离出黄 色素 , 因此此条件被用于层板社做预试验 。 在甜菜昔 预试验中已被应用的 一 和 一 在这 里亦用 。 因为甜菜昔在处有最大吸收且稳定 , 故所有溶剂系统均配成此值 , 此试验结果如表 所示 。 通过变换两种洗脱剂的不同浓度用 一 可以得到色素的总洗脱物第一组洗脱液成功地洗 脱下两种主要色素 , 即黄色有机部分和紫色有机 部分 , 保留在 柱顶端的弱极性的色素用第二组洗 脱液洗脱 。 由图所示的吸收光谱 , 和部分显示为单 色物质 , 然而 、 和部分在不同部分上显示 为少量黄色素和紫色素组成的混合物 图 邵分 图用 碑酸缓 冲液 一 醉 洗脱 一 柱 , 其 和的吸收尤 语 。
10、图用】碑的缓 冲液一醉 , 洗脱 一 柱 。 少量的 一粉色 紫红色 一橙色的吸收光谱 作为少量色素在应用上不太重要 , 因而我们的 研究目的是发展应用 主要色素部分和 , 层析上 选择 一 柱和用 。 磷酸盐缓冲液一 甲醇 。 单一洗脱来进行预试验柱上残 留物最 好用异丙醇洗脱 和部分的用端头加盖 的 一 相 分离的黄色部分在处检测显示出一个单 峰根据此物质从保留时间和吸收光谱 上看应该是仙人掌黄质 用如上同一 条 件分离 的紫红部分在 处 显示出个主要洗脱峰 , 它们是 峰 , 峰和 ,其它微小的峰 被认作裂解物此同一条件亦被应用于预纯 化工业甜菜昔的浓缩物 , 比较仙人掌色素和红甜菜 的
11、两个层析色谱峰的保留时间 , 我们能确定峰是 甜菜昔 、 峰是异甜菜昔 , 同时的峰不 出 现在甜菜根提取物中通过处理二者的甜菜普提取 物的糖贰而得到证实根据和报 道甜菜昔和异甜菜昔的酶化降解升高的配基峰比其 它母体化合物保留的峰高 。 黑龙江医药 。 ,。 一 一 卜 一卜 一一一 屯 时问 图柑莱抵提取物 处理前后 一氛二苦的 。 甜菜红异甜菜红 , 甜菜红配基 , 异甜菜红配羞 已 门的叫 时 问 图 一菊萄糖海水 解前 后 部分的 甜菜红异甜菜红 、 甜菜红配基异甜菜红配基 在的峰未知的甜菜昔 如图所示甜菜根提取物的酶降解物单独分 离出甜菜昔和异甜菜昔 、 峰和 , 峰 。 降解部分
12、在图中也有相同的倾向 较小的峰和是一 氛贰 , 而 , 和 , 是相应的低极性基团因此紫红色 部分在图谱上的各物质是甜菜红 , , 甜菜红配基 , 异甜菜红 , 异甜菜红配基甜菜红和甜 菜红配基不同洗脱结果和 和的 报告比较 , 可以看出 一 和 一 之 间的极性 有 明显不同 。 因此这些物质和固相间的交互作用可 以改变 。 保留时间为的紫红 色物质在文献中 没有报道 。 它比甜菜红 的极性小 , 在于 和处有吸收 , 可被一葡萄糖酶水解吸收光 谱和 一 分析 排除了是新甜菜昔一种由 发现的一种橙色的仙人掌主要色素的峰 的可能性 。 目前只能推测此物质是一种低极性的一 氰贰 。 讨论 从血红
13、色仙人 掌果中提取的紫红 色素与红甜 菜提取的甜菜红 浓缩物有一些不同之处紫红色素 主要 由甜菜红和一氛贰还有少量异甜菜红和 异甜 菜红配基构成而红甜菜色素主要由等量的甜菜红 和异甜菜红组成 。 选用醇水溶剂和在 一 柱上层析的工艺可 以从血红仙人掌果中得到两种主要的黄色素和紫红 色素用水一醇提取法可以抑制酶的活性 , 并把多搪 和醇不溶物留在残渣中 。 再者 , 此方法避免了人工品 的特征 。 事实上 , 只有微量异甜菜红和异甜菜红配基 被检出 , 这表明在预试验过程中差向异构已被降至 最小 。 因此低压液相层析可应用和研究 改进的异极性 一 法适用于检测黄 色 和紫红色物质的成份 。 采用
14、此法在紫红部分发现了 一个尚未知晓的,氰贰根据我们的结果 , 色素在 时最稳定 。 此值证明象 柱这样顶 端加盖尺寸适合弱极性 一 相柱 , 能很好地分离这些物质 峰的纯度用二极管阵分光光度计检测 , 证明用 此柱有较高分辨力这种分离和 测定方法一定会被 继续研究和发展下去 。 下转页 黑龙江医药幻 , 而水浸液不能较好地提取有效成分结果见图 、。 取液做为对照液进行薄层层析 , 证明 乙 醇提取能较好地将有效成分提取出来 。 结果 如图 。 匕一一一一三山 图 复方 中蛇床子 图语 环乙醉提取液 蛇床子对照药材 空白对照 乙醉提取液 水提取液 六味中药材进行不同浓度乙醇和水提取 的对比实验
15、, 同时用蛇床子 对照药材乙醚提 实验结果与分析 从以上薄层来看 , 可以确定工艺的合理性和 正确性 , 能够较好地把有效成分提取出来 , 从 其阴性对照液来看 , 各药材相互无干扰 , 薄层 层析能真实地反 映出工艺的优越性 , 流 程如 下 鲜鲜雄柞柞柞柞柞柞柞柞 蚕蚕蛾蛾蛾 渗滤液液 益益智仁仁仁仁仁仁仁仁仁仁仁仁 巴巴戟天 天天滤液液液过滤滤 分分分分分分分装装 其其余余余余余余余余余余 六六 味药药药回收乙醇醇醇醇醇醇 成成成成成成成品品 讨论 从 实验结果看 , 本工艺根据处方各药有效成 分的理化性质而设计 , 因而能较好地将处方 中各 味药的有效成分提取 出来 , 从而达 到更 好地发 挥药效 , 本文 的工艺研究还有待进一 步探讨 , 以便确定最佳工艺条件 。 参考文献 江西析医学院编 ,中 药大辞典上 、 下册 , 全国中草 药汇编编写组 , 全国中草 药汇编 , 上册 , 页 , , , , 收稿日期一一 试黑龙江省商业职工医院 上接页 参考文献 植物生 物化学 , , 食品化学 , 植物化 学 , 等 , 植物化学 , 等 , 植物化学 , 等 , 四面休 , 千 , 食品化 学 , 子 , , 食品化学 , 等 , 食品化 学 , 等 , , , 拉物化 学 , 子 , 译 自分析 , 一 黑龙江 省医药工业研究所陈志欲译 一一
