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1、学 海 无 涯 选修 3 易考知识点背诵 专题 1基因工程 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计， 通过体外 DNA 重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特 性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品 。基因工程是在 DNA 分子水平上进行设计和施工的，又 叫做 DNA 重组技术。 （一）基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶） 来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 功能：能够识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷 酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个 核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专 一性。 结果：经限制酶切割产生的 DNA 片
2、段末端通常有 两种形式：黏性末端和平末端。 2.“分子缝合针”DNA 连接酶 (1)两种 DNA 连接酶（EcoliDNA 连接酶和 T4-DNA 连接 酶）的比较： 相同点：都缝合磷酸二酯键。 区别：EcoliDNA 连接酶来源于 T4 噬菌体，只能将 双链DNA 片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯,1,学 海 无 涯 键连接起来；而 T4DNA 连接酶能缝合两种末端， 但连接平末端的之间的效率较低。 (2)与 DNA 聚合酶作用的异同:DNA 聚合酶只能将单个核苷 酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯 键。DNA 连接酶是连接两个 DNA 片段的末端，形成磷 酸二酯键。 3.“分子运输
3、车”载体 载体具备的条件：能在受体细胞中复制并稳定保 存。 具有一至多个限制酶切点， 供外源 DNA 片段插入。 具有标记基因，供重组 DNA 的鉴定和选择。 最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简 单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制 能力的双链环状 DNA 分子。 其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒 (二)基因工程的基本操作程序 第一步：目的基因的获取 目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。 原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。 人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合 成法_。 PCR 技术扩增目的基因,2,3,学 海 无 涯 原理：DNA 双链复制 过程
4、：第一步：加热至 9095DNA 解链；第二 步：冷却到 5560，引物结合到互补 DNA 链；第三 步：加热至 7075，热稳定 DNA 聚合酶从引物起始 互补链的合成。 第二步：基因表达载体的构建 1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以 遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。 2.组成：目的基因启动子终止子标记基因 启动子：是一段有特殊结构的 DNA 片段，位于基 因的首端，是 RNA 聚合酶识别和结合的部位，能驱动基 因转录出 mRNA，最终获得所需的蛋白质。 终止子：也是一段有特殊结构的 DNA 片段 ，位 于基因的尾端。 标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有
5、 目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用 的标记基因是抗生素基因。 第三步：将目的基因导入受体细胞_ 转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受 体细胞内维持稳定和表达的过程。 常用的转化方法： 将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转 化法，其次还有 基因枪法和 花粉管通道法等。,学 海 无 涯 将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射 技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。 将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的 原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ，最 常用的原核细胞是 大肠杆菌 ，其转化方法是：先用 C a2+ 处理细胞，使其成为 感受
6、态细胞 ，再将 重组表 达载体 DNA 分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在 一定的温度下促进感受态细胞吸收 DNA 分子，完成转化 过程。 3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受 体细胞的依据是标记基因是否表达。 第四步：目的基因的检测和表达 首先要检测 转基因生物的染色体 DNA 上是否插入了 目的基因，方法是采用 DNA 分子杂交技术。 其次还要检测 目的基因是否转录出了 mRNA，方法是 采用 用标记的目的基因作探针与 mRNA 杂交。 最后检测 目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转 基因生物中提取 蛋白质，用相应的 抗体进行抗原 抗体杂交。 有时还需进行 个体生物学水平
7、的鉴定。如 转基因抗 虫植物是否出现抗虫性状。 （三）基因工程的应用,4,学 海 无 涯 植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用 转基因改良植物的品质。 动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、 用转基因动物生产药物。 基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基 因表达产物发挥作用。 （四）蛋白质工程的概念 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能 的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成， 对现有蛋 白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的 生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然 界已存在的蛋白质） 转 录 翻 译 专题 2细胞工程 （一）植物细胞
8、工程 1.理论基础（原理）：细胞全能性 全能性表达的难易程度：受精卵生殖细胞干细胞 体细胞；植物细胞动物细胞 2.植物组织培养技术 （1）过程：离体的植物器官、组织或细胞 愈伤组 织 试管苗 植物体,5,学 海 无 涯 （2）用途：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍 体育种、细胞产物的工厂化生产。,物、植物体 植物新品 工序。,（3）地位：是培育转基因植 细胞杂交培育 种的最后一道 3.植物体细胞杂交技术 （1）过程：,诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激 等。化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。 意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。 （二）动物细胞工程 1. 动物细胞培养
9、（1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关 的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适 宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。,6,7,学 海 无 涯 动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎 或幼龄动物的器官或组织）剪碎用胰蛋白酶或 胶原蛋白酶处理分散成单个细胞制成细胞悬液 转入培养瓶中进行原代培养贴满瓶壁的细胞 重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细 胞继续传代培养。 细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就 贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增 多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细 胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑 制。 动物细胞培养需要满足以下条件 无菌
10、、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还 要在培养液中添加一定量的抗 生素，以防培养过程中的污染。 此外，应定期更换培养液，防止 代谢产物积累对细胞自身造成 危害。 营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、 无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆 等天然成分。 温度：适宜温度：哺乳动物多是 36.50.5；pH： 7.27.4。 气体环境：95%空气5%CO2。O2 是细胞代谢所必需的， CO2 的主要作用是维持培养液的 pH。,学 海 无 涯 （5）动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备 单克隆抗体、检测有 毒物质、培养医学研究 的各种细胞。 2.动物体细胞核移植技术和克隆动物
11、 哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较 容易）和体细胞核移植（比较难）。 选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大 ，容易操作；卵(母)细胞细胞质多，营养丰富。 体细胞核移植的大致过程是：（右图）,8,核移植,胚胎移植,9,学 海 无 涯,体细胞核移植技术的应用： 加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育； 保护濒 危物种，增大存活数量； 生 产 珍 贵 的 医 用 蛋 白 ； 作 为 异 种移植的供体； 用于组织器官的移植等。 体细胞核移植技术存在的问题： 克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷 等。 3.动物细胞融合 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动 物细胞结合形成
12、一个细胞的过程。融合后形成的具 有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为 杂交细胞。 动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相 同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合 的方法类似，常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的 病毒、电刺激等。 动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的不亲和 性，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新 品种培育的重要手段。 动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：,10,学 海 无 涯,4.单克隆抗体 抗体：一个 B 淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。 单克隆抗体的制备过程：,学 海 无 涯,杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，
13、又能产生专一 的抗体。 单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能 大量制备。 单克隆抗体的作用： 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异， 并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简 易、快速的优点。,注入小鼠,细胞融合,分离,抗原注入小鼠体内,B 淋巴细胞,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,细胞培养,选择培养细胞,培养基,体内培养,体外培养,从腹水提取,从培养液提取,单克隆抗体,11,12,学 海 无 涯 用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗， 可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。 专题 3胚胎工程 （一）动物胚胎发育的基本过程 1、胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行
14、的多种 显微操作和处理技术，如胚胎移植、体外受精、胚 胎分割、胚胎干细胞培养等技术。经过处理后获得 的胚胎，还需移植到雌性动物体内生产后代，以满 足人类的各种需求。 2、动物胚胎发育的基本过程 受精场所是母体的输卵管上段。 卵裂期：特点：细胞有丝分裂，细胞数量不断增 加，但胚胎的总体体积并不增加，或 略有减小。 桑椹胚：特点：胚胎细胞数目达到 32 个左右时， 胚胎形成致密的细胞团，形似桑椹。是全能细胞。 囊 胚：特点：细胞开始出现分化（该时期细胞 的全能性仍比较高）。聚集在胚胎一端个体较大的细胞 称为内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织。中间的空 腔称为囊胚腔。 原肠胚：特点：有了三胚层的分化
15、，具有囊胚腔 和原肠腔。,13,学 海 无 涯,（二）胚胎干细胞 1、哺乳动物的胚胎干细胞简称 ES 或 EK 细胞，来源于 早期胚胎或从原始性腺中分离出来。 2、具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞 核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可 分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在 体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进 行冷冻保存，也可进行遗传改造。 3、胚胎干细胞的主要用途是： 可用于研究哺乳动物个体发生和发育规律； 是在体外条件下研究细胞分化的理想材料，在培养液 中加入分化诱导因子，如牛黄酸等化学物质时，就可 以诱导 ES 细胞向不同类型的组织细胞分化，这为揭
16、 示细胞分化和细胞凋亡的机理提供了有效的手段； 可以用于治疗人类的某些顽疾，如帕金森综合症、少 年糖尿病等； 利用可以被诱导分化形成新的组织细胞的特性，移植 ES 细胞可使坏死或退化的部位得以修复并恢复正常 功能； 随着组织工程技术的发展，通过 ES 细胞体外诱导分化 ，定向培育出人造组织器官，用于器官移植，解决供 体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题。,14,学 海 无 涯,（三）胚胎工程的应用 1.体外受精和胚胎的早期培养 (1)卵母细胞的采集和培养： 主要方法：用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子， 然后，从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子在体外 受精。第二种方法：从刚屠宰母畜的卵巢中采集卵母细 胞；第三种方法是借助超声波探测仪、腹腔镜等直接从 活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。采集的卵母细胞，都 要在体外经人工培养成熟后，才能与获能的精子受精。 (2) 精子的采集和获能：在体外受精前，要对精子进行 获能处理。 受精：获能的精子和培养成熟的卵细胞在获能溶液 或专用的受精溶液中完成受精过程。 胚胎的
