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1、第九章 维生素类药物的分析 (Analysis of Vitamin),1.前言(Preface) 维生素是人们生活中必需的营养要素，是一些具有调节和管制新陈代谢过程的生物活性物质。中国药典2019年版收载了维生素A、B1、B6、B12、C、D2、D3、E、K1、叶酸、烟酸、烟酰胺。,A B C D E K F,水溶性,脂溶性,公元前一千年我国周汉时代古书记载瘘厥、缓风、湿痒、肿等脚气病的综合症状，到晋代取名为脚气。1911年从米糠中分离出抗脚气病因子，将此成分命名为维生素(Vitamin)。此后，分离出各种营养因子，统称为维生素，发展至今，已有60多种。,干眼症、 夜盲症,缺Vitamin
2、A,佝偻病、 软骨化症,缺Vitamin D,Vitamin E,有还原性， 可作抗氧剂,存在于豆类、 蔬菜、麦胚油中,与生育有关，防治习惯性流产、不育症、牙周炎等；也用于心血管疾患、脂肪肝，新生儿硬肿症的辅助治疗。,Vitamin K,存在于绿 色植物中,凝血作用，新生 儿出血症的防治,Vitamin B1,治疗脚气病、多发性 神经炎和胃肠道疾病,存在于米糠、 麦麸和酵母中,Vitamin C,化学合成物,参与机体代谢，可帮助酶 将胆固醇转化为胆酸而排 泄，减低毛细管的脆性， 增加机体的抵抗力。,防治坏血病，预防冠心病，大量静脉注射用于 克山病的治疗,2. Vitamin A (鱼肝油中),
3、(3),(4),(2),(1),UV吸收 (325328nm),易氧化变质,与SbCl3呈蓝色,不溶于水， 溶于CHCl3、 乙醚、环己烷,鉴别？,Identification,(1)SbCl3反应,即Carr-price反应,加饱和无水SbCl3 无醇CHCl3溶液 蓝色紫红色,TLC法,(2),(3),UV法,取Vit A 加无水乙醇盐酸(100:1)溶液 溶解，立即在300400nm波长范围内紫 外扫描，应仅在326nm出有单一吸收峰。 水浴加热30秒，迅速冷却，同法扫描， 则应在348，367和389nm波长处有三个 尖锐的吸收峰，且在波长332nm处有较 低的吸收峰或拐点。,(nm)
4、,A(1%,1cm),1,2,389,367,348,326,含量？,Assay,GC法,HPLC法,荧光法,Vit A的无水乙醇溶液能 产生绿色荧光。可测定 血液或动物组织中Vit A 含量,SbCl3比色法,加SbCl3无水CHCl3溶液，在618620nm波长处有最大吸收，符合Beer定律。,(5),(4),(3),(2),(1),UV法(三点校正法),三点校正法测Vit A,1. 原理： (1)杂质吸收在310340nm内呈直线，且随波长的增大吸收度变小； (2)物质对光的吸收有加和性。 2.怎样选择三点波长： (1)第1点：选择Vit A的最大吸收波长(1) ; (2)第2点和第3点
5、：在最大吸收波长的两侧各选一点(2和3); a.等波长差法：在1的左右各选一点2 和3 ，使3 1 1 2,如ChP测Vit A醋酸酯时，规定1=328nm, 2=316nm, 3=340nm,b.等吸光度法：在1的左右各选一点2 和3 ，使A2=A3=6/7A1,如ChP测Vit A醇时，规定1=325nm, 2=310nm, 3=334nm,3. 杂质的吸收,(1)Vit A2(3去氢维生素A)和Vit A3(去水维生素A) Vit A2在345350nm波长范围内有吸收； (2)Vit A的氧化产物：环氧化物、VA醛和酸； (3)光照下产生的无生物活性的聚合物鲸醇； (4)Vit A的异
6、构体； (5)合成时产生的中间体。,4.测定方法,(1)第一法(适用于VA醋酸酯),VA醋酸酯,环己烷,在300,316,328,340,360nm波长处测A值(max=328nm),计算各波长下的吸收度与328nm波长下的吸收度之比值。,(max326329nm),差值0.02，直接在328nm处测A328 差值0.02，A328(校正)3.52(2A328-A316-A340),-15%,-3%,+3%,0,皂化法,皂化法,A328(校正),A328直接算,算效价(IU/g)：,算VA醋酸酯胶丸占标示量的百分含量：,占标示量的百分含量%,胶丸的平均内容物重量,W 内容物重量 D 稀释倍数
7、L 比色池厚度(cm),(2)第二法(适用于VA醇) 皂化法,Vit A 醇,KOH乙醇溶液回流,乙醚提取,干燥,异丙醇溶解,在300,310,325,334nm处测A值,确定max,求算,如max 323327nm 而且A300/A3250.73 按下列方法处理,0,-3%,+3%,A校,A校,A325,占标示量的百分含量%,A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334,求效价:,3. Vitamin E (药典收载： -生育酚醋酸酯),(3),(2),(1),易水解成游离生育酚,H+或OH-,Ce(SO4)2滴定检 查游离生育酚,UV吸收 max 284,溶
8、于乙醇、丙酮、醋酸乙酯、石油醚中，不溶于水,Vit E 鉴别,Identification,(1),(4),(3),(2),硝酸反应 (无水乙醇硝酸，750C显橙红色),UV法(284),TLC法,水解后氧化反应,加KOH醇试液，加热，加水、乙醚，取乙醚液再加2,2-联吡啶的乙醇溶液和FeCl3的乙醇液，应显血红色。,Vit E 含量=?,Assay,(1),(6),(5),(4),(3),(2),GC法,HPLC法,UV法 95%乙醇溶解，max292nm,荧光法,羟肟酸铁比色法,盐酸羟胺+FeCl3生成羟肟酸铁 络合物，于480及510nm处有最大吸收，测A值。,铈量法,用硫酸加热回流，水
9、解成生育酚，用Ce(SO4)2定量地氧化为对生育醌，过量的Ce(SO4)2氧化二苯胺指示剂而指示终点。,4. Vitamin B1(硫胺Thiamine),(1),(4),(3),(2),溶于水不 溶于乙醚,UV吸收 (mmax246nm),沉淀反应 碘化汞钾或硅钨酸等反应生成,碱性中遇氧化剂(铁氰化钾)产生有荧光的硫色素,鉴别试验,TLC,Vit B1 含量?,Assay,非水碱量法 冰HAc和Hg(Ac)2 HClO4滴定,硅钨酸重量法(H+),硫色素荧光法(VB1专属反应),OH,K3Fe(CN)6,硫色素,异丁醇提取,365nm照射,蓝色荧光,比较荧光强度,含量,UV法 (max 24
10、6nm),酸性染料比色法,盐酸硫胺与酸性染料(溴麝香草酚蓝)形成盐，在420nm处测A值。,HPLC法,流动注射法(FIA),离子选择性电极法,制剂中VB1用铅离 子电极直接测定,示波极谱滴定法,1,2,3,6,8,9,5,4,7,5. Vitamin C (抗坏血酸Ascorbic acid),(4),(3),(2),(1),旋光性,溶于水，酸性,强还原性,UV吸收 max245nm,Vit C 鉴别,1,5,4,3,2,UV法 溶于盐酸中 (max 243nm),AgNO3反应 黑色沉淀 (Ag ),2,6-二氯靛酚反应 (颜色消失),与别的氧化剂反应 使KMnO4、亚甲蓝等褪色,糖类性质反应,加HCl水解、脱羧、失水后变为糠醛，再加吡咯500C加热变蓝色,VC含量=?,碘量法 (直接滴定法),2,6-二氯吲哚酚滴定法,用于含VC制剂及食品分析,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,溴丁二酰亚胺滴定法由于N溴丁二酰亚胺具有弱氧化性，如有还原性干扰物质时首先氧化VC反应定量进行 (I2-KI指示剂),旋光度法,HPLC法,GC法,流动注射法(FIA),原子吸收光谱法,UV法,荧光法,
