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1、化学发光免疫检测技术在临床检验中的应用,内 容 提 要,免疫检测技术概述,化学发光免疫诊断技术简述,化学发光诊断技术在临床中的应用,第一部分 免疫检测技术概述,定 义,免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段。它可以利用同位素（荧光素）酶、化学发光物质等对检测信号进行放大和显示。,夹心法,竞争法,间接法,免 疫 检 测 常 用 方 法,临床免疫诊断技术的发展基本历经了以下三个阶段：,免疫诊断现状,当前进展,国际：国际上排名前六位的诊断巨头企业均 投入了大量的资金和人力进行化学发 光技术的研发和产业化 国内：只有一两家科研机构及企业在进行相关问题的比较深入研究，但发展较快,中
2、国免疫诊断现状,中国临床免疫定量诊断现状亟待改善 化学发光免疫诊断技术 已成为免疫定量诊断的主流 昂贵的成本价格严重阻碍 化学发光免疫诊断技术造福中国人民 临床呼唤符合国情的解决方案 中国即将迎来免疫定量诊断技术普及的新高潮,第二部分 化学发光免疫检测技术,化学发光技术概述,化学发光免疫分析技术，是将化学发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。 其特点在于灵敏度高、测定范围宽、快速、简便，并且在测试中不使用有害的试剂，无污染。,类 型,化学发光免疫分析 化学发光酶免疫分析 电化学发光分析 时间分辨免疫荧光分析,四种检测方法比较,化学发光酶免疫分析,用参与某一
3、发光反应的酶来标记抗原或抗体，免疫反应后，加入发光试剂，测定发光体系的发光强度来确定抗原或抗体的含量。 两大体系 辣根过氧化物酶（HRP）体系 碱性磷酸酶(AP)体系,碱磷酶发光信号示意图,辣根酶发光信号示意图,两大体系的比较,碱磷酶体系：水解反应，起光较慢，发光强度较弱，灵敏度较高。 辣根酶体系：氧化还原反应，起光较快，发光强度较大。,第三部分 化学发光诊断技术在临床中的应用,化学发光在临床检测中的主要应用,肿瘤标志物检测 甲状腺功能检测 生殖内分泌激素系列 糖尿病检测 传染病检测系列 肝纤维化系列,一、肿瘤标志物的检测,1、肿瘤标志物（tumor marker，TM） 是指由肿瘤组织产生的
4、 存在于肿瘤组织本身，或分泌至血液或其他体液， 或是因肿瘤组织刺激，由宿主细胞产生的 反映肿瘤的存在和生长，含量明显高于正常参考值的一类物质。 通过对这类物质的分析，能帮助人们从正常组织中区别肿瘤或测定肿瘤细胞核、细胞质以及对细胞膜上的特性进行分析，以此作为辨认肿瘤细胞的标志。,2、肿瘤标志物的分类,（1）、肿瘤胚胎性抗原标志物 该类蛋白质即前文所提到的因返祖现象的出现，而产生的肿瘤标志物。虽然该类标志物与肿瘤组织不一定具有特定的相关性，但与肿瘤的发生存在着内在的联系。 例：甲胎蛋白（alpha-fetoprotein, AFP） 癌胚抗原（carcinoembryonic antigen,
5、CEA） （2）、糖类抗原标志物 该类物质是肿瘤细胞表面的抗原物质，或肿瘤细胞所分泌的物质。这类标志物的出现为临床肿瘤的诊断带来方便，但其命名无规律可言。有些是肿瘤细胞株编号，有些是抗体物质的编号。该类标志物又可分为两类 糖类高分子粘蛋白抗原 例：癌抗原CA125 癌抗原CA15-3 血型类抗原 例：癌抗原CA19-9 癌抗原CA50,（3）、酶类标志物 酶及同工酶是最早出现和使用的肿瘤标志物之一。肿瘤状态时，机体的酶活力就会发生较大变化，这主要是因为： 肿瘤细胞或组织本身诱导其他细胞和组织产生异常含量的酶； 肿瘤细胞的代谢旺盛，细胞通透性增加，使得肿瘤细胞内的酶进入血液，或因肿瘤使得某些器官
6、功能不良，导致各种酶的灭活和排泄障碍。 例： 前列腺特异性抗原（prostate specific antigen, PSA） 神经原特异性烯醇化酶（neuron-specificenolase, NSE） （4）、激素类标志物 当具有分泌激素功能的细胞癌变时，就会使分泌的激素量发生异常。这种现象被称为正位激素异常。 而正常情况下不能生成激素的那些细胞，转化为肿瘤细胞后所产生的激素，或者是那些能产生出激素的细胞癌变后，分泌出的是其他激素细胞所产生的激素，这种现象被称为异位激素异常。 衡量异位激素异常的条件是：有非内分泌腺细胞合成的激素； 某种内分泌细胞却分泌其他分泌腺细胞的激素； 肿瘤患者同时
7、伴有分泌异常综合征； 这类肿瘤细胞在体外培养时也能产生激素 肿瘤切除或经治疗肿瘤消退时，此种激素含量下降，内分泌综合征的症状改善。 例： 人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonagotropin, HCG） 人胎盘催乳素（PRL）,（6）、其它蛋白质类标志物 另外还有一些早期发现的蛋白类肿瘤标志物，特异性稍差，但检测方法相对比较容易，因而常作为常规检测项目，用以肿瘤普查。 例： 2-微球蛋白（2-microglobulin, 2-MG） 血清铁蛋白（ Serum Ferritin, SF）,3、肿瘤标志物的检测意义 高危人群中恶性肿瘤的早期检测 预后应用 治疗监测 肿瘤复发
8、的早期检测为患者争取治疗时间，延长患者生命。,4、理想的肿瘤标志物的条件 特异性强：仅由肿瘤组织产生或只存在于肿瘤组织中,在正常组织中不存在 敏感性好：可用于小肿瘤的早期诊断或筛选,5、几种常见的肿瘤标志物,甲胎蛋白AFP检测临床意义 检测血清AFP含量是诊断原发性肝癌的重要手段之一 1977年全国肝癌防治协作会议拟定的单项AFP诊断肝癌的标准：定量400ng/ml；持续一个月以上，定量200ng/ml持续两个月以上，并能排除妊娠，活动性肝病，生殖腺胚胎性肿瘤等。 除了原发性肝癌外，AFP还用来进行： 急慢性肝炎和肝硬化的鉴别诊断 先天性胎儿畸形诊断 恶性畸胎瘤的诊断,癌胚抗原CEA CEA是
9、非器官特异性肿瘤相关抗原，升高主要见于肺癌、乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌等大多数恶性肿瘤。很适合用于体检 临床主要应用 定期检测可预防相关疾病的发生， 术后检测可以用于术后效果观察 注意： 肝炎、肝硬化及肺部疾病等也可以造成升高 吸烟者的CEA普遍偏高。,人绒毛促性腺激素HCG 正常妊娠检测 检测异位妊娠和正确指导人工流产 检测自然流产 滋养层细胞肿瘤的诊断 其他肿瘤的重要标志（如胃癌、胰腺癌、肝癌， 多发性骨髓癌、卵巢癌、乳癌等）,血清hCG浓度的变化,正常妊娠妇女血清中HCG平均值,血清hCG浓度的变化,早期自发性流产：hCG为正常怀孕妇女的50%，通常100,000。 Down综合症：血清hC
10、G浓度为正常怀孕妇女的23倍。,PSA与fPSA,前列腺癌的发病率在全球范围内呈上升趋势。在欧美国家前列腺癌是发病率最高的恶性肿瘤，死亡率仅次于肺癌位于男性肿瘤的第二位。我国前列腺癌发病率约为3.4/10万人口，远低于西方国家，但国人良性前列腺增生手术发现的偶发癌和尸检前列腺标本的潜伏癌约为欧美一半左右。而前列腺癌的早期诊断是决定能否进行根治性治疗的关键。老年性疾病，建议50岁以上的男性，有条件时每年作一次检测。,当血清PSA 10ng/ml时，应高度怀疑前列腺癌；而PSA 4-10ng/ml时，则为灰区（其主要原因未一些良性的前列腺疾病所致）。 前列腺癌诊断主要通过直肠指检（DRE）、血清P
11、SA检测或直肠B超（TRUS）针刺活检确定诊断。 血清游离PSA (f-PSA)与总PSA的比值（fPSA/tPSA）更为准确。正常fPSA仅占tPSA的10%-20%，若fPSA / tPSA 25%， 前列腺癌的可能性极小（80%），必须作前列腺活检以确诊。 连续观察血清PSA浓度的变化，前列腺癌组PSA速率显著高于良性前列腺增生组和正常人组，正常值上限为每年0.75ng/ml。这样，即使在两次检侧中PSA的浓度均在正常范围，但根据PSA的速率变化，可进一步检查发现早期前列腺癌。大量的筛选资料证明，如果PSA速率超过每年0.75ng/ml，则可发现47%的患者患前列腺癌。,前列腺检查的注意
12、点,单独检测PSA会受很多因素影响，如前列腺肥大、前列腺炎等。 常规的直肠指检、前列腺按摩、前列腺活检、膀胱镜操作、留置导尿都可以使PSA明显升高，故血清PSA测定应在前列腺操作前或操作后至少一周才抽血，前列腺活检后则需等待更长的时间。,CA125,CA125用于卵巢癌筛查 以及观察疗效，判断有无复发。 在连续检测中，CA125的初始浓度和上升斜率应考虑在内，以鉴别肿瘤是良性生长还是恶性生长。在一次8688份血清样品的回顾性研究中，发现用这种方式来计算卵巢癌的危险性，其敏感性60%，阳性预见率16%，认为这种方式是筛查早期卵巢癌的较好技术。 CA125用于卵巢癌筛查假阳性主要出现在妊娠、月经期
13、、子宫内膜炎等妇科炎症情况。在妊娠头3个月和月经期CA125假阳性分别可达57%和16%。,CA15-3,乳腺癌可使CA15-3升高。但初期敏感度只有60%。其它恶性肿瘤也可使CA15-3有不同程度的阳性率。主要用于女性体检。 定期检测含量的变化对术后观察有极大作用。 CA15-3对蛋白酶等酶类很敏感。因此，血清标本应避免微生物的污染。,CA19-9,胰腺癌、胆囊癌等CA19-9明显上升。 胃癌检出率50%，结肠癌检出率60%，肝癌检出率64.6%。胰腺癌患者85%-95%为阳性。 急性胰腺炎、胆囊炎，肝硬化、肝炎等疾病也会造成CA19-9上升，应注意区别对待。,CA50,CA50是一种非特异
14、性的广谱肿瘤标志物.对胰腺癌、胆囊癌的阳性检测率达90%，对肝癌、胃癌、结直肠癌及卵巢肿瘤诊断亦有较高价值 。 常用于常规体检 一些自身免疫性疾病也会使其上升，注意区别对待。,铁蛋白（SF）,铁蛋白为一种肿瘤相关蛋白质，多数肿瘤病人血清中铁蛋白浓度升高.血清铁蛋白浓度升高通常说明病人预后不良。 一般情况下与白血病、肺癌、乳腺癌有关，当肝癌时，AFP测定值较低的情况下，可用铁蛋白测定值补充，以提高诊断率 。 炎症感染也可造成SF升高。 SF含量过低时可诊断为缺铁。这也是诊断隐性缺铁性贫血的可靠指标。 营养不良时SF减少，它可以作为儿童营养不良流行病学调查的指标。,2-MG,它可由肿瘤细胞直接产生
15、，故原发性肝癌、胃癌、大肠癌、骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病、淋巴细胞肉瘤都会使其升高。在肿瘤早期，血清2-MG可明显高于正常值，故有助于鉴别良、恶性肿瘤。 可用于体检。 免疫疾病，如溶血性贫血等都可使其值升高。 还可用于诊断肾功能损伤和急性脑梗塞、脑膜炎、脑炎、多发性神经炎等。,肿瘤标志物检测关键点,肿瘤标志物项目进行联合检测更有意义 测定结果与肿瘤判断的对应关系。 灰区结果的分析。 动态观察。,摘自中国检验医学用品2001年 第一期,二、甲状腺功能检测,主要检测指标 T3（三碘甲状腺原氨酸） T4（甲状腺素） FT3、FT4 TSH（促甲状腺生成素） Anti-TG(甲状腺球蛋白抗体) Ant
16、i-TPO（甲状腺过氧化物酶抗体）,下丘脑-垂体-甲状腺轴的调节,下丘脑,垂体,甲状腺 T3、T4,TRH,TSH,表示促进,表示抑制,临床症状,甲亢：眼突，食欲亢进而体重下降，心悸，怕热，神经质等 甲低：新生儿甲低身材矮小，智力低下，表情迟钝及聋哑；儿童甲低生长发育迟缓，智力减退。少年期患者可有性早熟和乳溢症；成年人甲低疲劳乏力、畏寒，皮肤和毛发干燥，心率缓慢、舒张压高。女性伴有月经过多 。 老年甲状腺疾病：症状相对不明显。,甲状腺疾病的测定分析,甲亢常见模式,甲减常见模式,非常见模式影响因素,1 垂体， 下丘脑功能异常。 干扰物质甲状腺结合蛋白（TBG、白蛋白）及 一些竞争性结合蛋白物质 ，药物，激素。 亚临床甲状腺疾病。 先天性TBG，白蛋白异常。先天性甲状腺相关激素异常。,非甲状腺疾病的诊断,高达75% 非甲状腺疾病的住院病人有甲状腺功能变化的现象。疾病常见的是血中T3降低，有些病人他们不单只有T3
