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1、. . 仅仅研究于生命科学，不适合在诊断过程使用 只能在体外使用 地高辛DNA标记和检测试剂盒1和NBT/BCIP一起用于颜色检测通过酶联免疫法采用地高辛-dUTP进行随机引物DNA标记，碱性标记和检测货号：11 745 832 910此试剂盒储存条件-15oC-25oC此试剂盒可对10ng-3ugDNA进行12次标记反应可检测100cm2面积的杂交膜24指导手册2009.11版1前言1.1容表1前言.21.1容表.21.2试剂盒容.32简介.52.1产品概述.53步骤和所需材料.83.1开始之前.83.2地高辛DNA标记.93.3 标记效率的测定.113.4 DNA 的转移和固定.143.5
2、杂交.163.6免疫检测.183.7 DNA印记的洗脱和再杂交.204结果.214.1典型的结果.215附录.235.1故障排除.235.2引用.245.3订购信息.251.2 试剂盒容瓶/杯号标签容 包括功能1地高辛高效引物1. 50ul地高辛高效引物2. 5标记的混合物的浓度，包括随机引物，核苷酸，DIG-dUTP(碱标记的)，Klenow酶和缓冲液混合的最佳浓度。3. 随时可用4. 澄清的粘液5. 用于DNA的高效随机引物标记2DIG标记的对照DNA20ul（5ug/ml ）PBR328 DNA（用Bam HI 线性化）澄清溶液用于确定标记效率3DNA稀释缓冲液31ml（50ug/ml
3、鱼精DNA在10mM Tris-HC中，1mM EDTA ;在25oCpH8.0 ）澄清溶液4抗地高辛的碱性磷酸酶结合物100ul（750U/ml）从羊，Fab段，结合碱性磷酸酶中获取的澄清溶液5NBT/BCIP61ml50浓度的原溶液（即67%（v/v）的DMSO中含有18.75mg/ml硝基氯化四氮唑蓝和9.4mg/ml 5 -溴- 4 -氯-3-吲哚磷酸盐可以在浅黄色和棕色之间变化，澄清溶液与碱性磷酸酶反应6封闭液4100ml10浓度黄色，粘液7地高辛杂交颗粒准备4100ml（为17页做准备）杂交液附加仪器与所需试剂 除了上表中列出的试剂外，你必须准备一些溶液。在下表中，你可以找到不同操
4、作程序需要准备的设备概要。在每个操作程序的前面提供了详细的信息操作程序仪器设备试剂3.2 DIG-DNA标记水浴灭菌的双蒸水0.2M pH8.0 灭菌的EDTA3.3 标记效率的半定量测定带正电荷的尼龙膜*地高辛洗涤和封组缓冲液组合*TE缓冲液或者洗涤缓冲液马来酸缓冲液检测缓冲液TE缓冲液3.4 DNA转移和固定紫外光盒或者商业化可用于紫外交联的其他设备20ssc或者10ssc3.5 杂交尼龙膜，带正电荷*杂交袋*或者耐热的塑料袋或者滚筒瓶注意：当用地高辛杂交缓冲液工作时，不要用开口的托盘3.6 免疫检测容器大小与滤器大小相适应杂交袋*地高辛洗涤和封组缓冲液组合*TE缓冲液或者洗涤缓冲液 马来
5、酸缓冲液检测缓冲液TE缓冲液3.8 DNA 斑点的脱色和重新标记探针大的托盘水浴10ssc10%SDS0.2M NaOH*标记的产品可以从Roche Applied Science 获得2 介绍2.1 产品概况实验原则 此试剂盒采用地高辛（DIG），一种甾类半抗原， 去标记DNA探针从而通过酶免疫分析法用于杂交和后续的颜色检测（1）步骤描述DNA标记根据随机引物标记技术采用地高辛标记的高效引物获得了地高辛标记的DNA探针。地高辛标记的高效引物是一种专门生产的产物混合物，其中，含有地高辛dUTP，碱性标记（图2）和所有的试剂，包括随机引物标记所必须的酶，已预先优化的5浓度反应缓冲液杂交根据标准方
6、法，地高辛标记的探针可以与固定在膜上的核酸杂交。采用碱标记形式的地高辛-11-dUTP能够更加容易和有效的被洗脱下来，使固定在膜上的核酸可以与其他的地高辛标记探针再次杂交免疫检测杂交探针可以和抗地高辛的碱性磷酸酶结合物和Fab段进行免疫检测，然后采用比色底物NBT/BCIP可以看到杂交结果。应用 地高辛标记DNA探针可以用于： 所有类型的滤膜杂交 总基因组DNA中单拷贝基因的检测，甚至对于高度复杂的生物也可以进行 检测，如人，大麦和小麦。样品材料 至少100bp的DNA片段 线性的质粒，cos质粒或者DNA 超螺旋的DNA实验时间 此表格列出了每一步实验所需的反应时间步骤反应时间DNA标记1小时-O/N杂交6小时或者O/N免疫检测1.5小时显色0.5-16小时检测数量 一个试剂盒足够用于： 不超过3ug的模板DNA的12个标准的标记反应 和100cm2有24个斑点的检测质量控制根据操作步骤中的描述，对未标记的对照品DNA（PBR328）进行标记，0.1pg同源DNA 在
