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1、普通显微镜的使用一样和细菌形态观察1目的（1）学习并掌握油镜的工作原理和使用方法。（2）复习光学显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。2原理微生物的最显著特点是个体微小，必须借助显微镜才能观察到它们的个体形态和细胞结构。熟悉显微镜和掌握其操作技术是研究微生物不可缺少的手段。本实验将介绍目前微生物学研究中最常用的普通光学显微镜的结构和样品制作。目的在于使同学们通过实验，对光学显微镜有比较全面的了解，并重点掌握明视野普通光学显微镜中油镜的使用。3材料3.1菌种金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)及枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)梁色玻片标本。3.2溶液或试
2、剂香柏油、二甲苯、70%的酒精3.3仪器及其他用品双目显微镜、擦镜纸、涂布棒4方法与步骤4.1观察前的准备4.1.1显微镜的安置置显微镜于平整的实验台上，镜座距实验台边缘约10cm。锐检时姿势要端正。4.1.2光源调节安装在镜座内的光源灯可通过调节电压以获得适当的照明亮度，若使用反光镜采集自然光或灯光作为照明光源时，应根据光源的强度及所用物镜的放大倍数选用四面或凸而反光镜并调节其角度，使视野内的光线均匀，亮度适宜。4.1.3双简显微镜的目镜调节根据使用者的个人情况，双简显微镜的目镜间距可以适当调节，而左目镜上一般还配有屈光度调节环，可以适应眼距不同或两眼视力有差异的不同观察者。4.1.4聚光器
3、数值孔径值的调节正确使用聚光镜才能提高镜检的效果。聚光镜的主要参数是数值孔径，它有一定的可变范围，一般聚光镜边框上的数字是代表它的最大数值孔径，通过调节聚光输下面可变光阀的片放程度，可以得到各种不同的数值孔径，以适应不同物镜的需要。4.2显微观察在目镜保持不变的情况下，使用不同放大倍数的物镜所能达到的分辨率及放大率都是不同的。一般情况下，特别是初学者，进行显微观察时应遵守从低信懂到高倍镜再到询核额的观察程序，因为低倍数物镜视野相对大，易发现目标及确定检查的位置。4.2.1低倍镜观察将金黄色葡萄球菌染色标本玻片置于载物台上，用标本夹夹住，移动推进器使观察对象处在物镜的正下方。下降10倍物镜，使其
4、接近标本，用粗调节器慢慢升起镜筒，使标本在视野中初步聚焦，再使用细调节器调节使物像清晰。通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各部位，找到合适的目的物，仔细观察并记录所观察到的结果。4.2.2高倍镜观察在低倍镜下找到合适的观察目标，并将其移至视野中心后，将高倍镜移至工作位置。对操光器光圈及视野亮度进行适当调节后微调细调节器使物像清晰，利用推进器移动标本找到需要观察的部位，并移至视野中心仔细观察或准备用油镜观察。4.2.3油镜观察在高倍镜或低信镜下找到要观察的样品区域后，用相调节器将镜筒升高，然后将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域加喷香柏D从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜镜
5、头浸在油中，并几乎与标本接触时正（注意：切不可将油镜镜头压到标本，否则不仅压碎玻片，还会损坏镜买）。将聚光器开至最高位置并开足光圈(若所用聚光器的数值孔径值超过1.0,还应在整光镜与载破片之间也拥溶香轴油：保证其达到最大的效能)，调节照明使视野的亮度否适，用粗调节器将镜简徐徐上升，直至视野中出现物像并用细调节器使其清晰准焦为止.然后用相同的方法观察其他样本。4.3显微镜用后的处理上开镜筒，取下载玻片。先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸商取少许二印苯擦去钱头上的残留油迹，然后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，最后用绸布需需显微镜的金属部件。将备部分还原，反光镜垂直于镜座，将物镜转成“八”字形，再向下旋。同时把聚光镜降下以免接物镜与聚光镜发生碰撞。套上镜套，放回原处。5结果分别绘出在低倍镜、高倍镜和油镜下观察到的金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的形态，包括在3种情况下视野中的变化，同时注明物镜放大倍数和总放大率。思考题1.用油镜观察时应注意哪些问题?在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用?2.试列表比较低倍镜、高倍镜及油镜各方面的差异。为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作?3.影响显微镜分辨率的因素有哪些?4.根据实验体会，谈谈应如何根据所观察微生物的大小，选择不同的物镜进行有效的观察。
