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1、实验题目 大肠杆菌感受态细胞的制备与质粒DNA分子转化 主讲：张杰 生物实验教学中心,基因工程操作中最常用的工具酶,主要内容,1 限制性核酸内切酶 2 DNA连接酶 3 DNA聚合酶 4 修饰酶,SUMMARY,1 限制性核酸内切酶,1.1 引言-核酸酶和限制性核酸内切酶的定义 1.2 限制性核酸内切酶的命名 1.3 限制性核酸内切酶的分类 1.4 限制性核酸内切酶活性及其影响因素,Home,核酸酶（Nuclease）： 通过切割相邻两个核苷酸残基之间磷酸二酯键，导致核酸分子多核苷酸链水解断裂的蛋白酶。 1）按作用对象可分为: Deoxyribonuclease (DNAase) 后者叫cal
2、f intestinal alkaline phosphatase (CIP)。,碱性磷酸酶的活性,注意： CIP的比活性比BAP的高出10-20倍，CIP在SDS中68就可完全失活，而BAP却是热抗性酶。,末端转移酶(terminal transferase): 是末端脱氧核苷酸转移酶简称。来源于前淋巴细胞和分化早期的类淋巴细胞。 功能： 催化5脱氧核苷三磷酸进行53方向的聚合作用, 逐个将dNTP分子加到线性DNA分子3-OH端。,4.2 末端转移酶,末端转移酶的催化作用,用途： (1) 主要用于给外源DNA片段和及载体分子加上互补同聚物尾巴； (2) 标记DNA片段的3末端。,4.3 T
3、4多核苷酸激酶,来源：T4 polynucleotide kinase来源于T4噬菌体感染的大肠杆菌细胞。 功能：催化-磷酸从ATP分子转移给DNA或RNA的5-OH末端（图）。,T4 多核苷酸激酶的活性（正向反应）,DNA/RNA（单链或双链）,T4多核苷酸激酶的交换活性,用途： （1）标记DNA的5-末端； （2）使缺失5-P末端的DNA发生磷酸化作用。,4.4 S1核酸酶,来源：来源于稻谷曲霉（Aspergillus oryzae） 功能： 是一种高度单链特异的核酸内切酶。 注意： 对双链DNA、双链RNA和DNA-RNA杂交体相对不敏感。,S1核酸酶的活性,用途： (1)测定真核基因中间隔子序列位置； (2)去除DNA片段中突出的单链尾巴； (3)打开cDNA合成时形成的发夹环结构。,
