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1、结核分支杆菌培养,1,讲述内容：一、痰标本的采集二、结核分支杆菌培养操作规程,2,结核分支杆菌培养是结核病诊断细菌学检验的重要内容之一（另外是“抗酸杆菌涂片检查法”）这里我只讲结核分支杆菌培养。 讲之前我还是要强调下要保护好自己（即生物安全问题）。结核分支杆菌是怎样传播我想你们比我懂，由于时间关系，这里也不展开讲，进入正题,3,一、痰标本的采集,1、痰标本的种类 根据痰标本采集时间，可将标本分为3类： （1）即时痰：就诊时深呼吸后咳出的痰液； （2）清晨痰：患者晨起立即用清水漱口后咳 出的第2口、第3口痰液； （3）夜间痰：送痰前一日患者晚间咳出的痰液。,4,2、正确的咳痰方法：,（1）咳嗽前
2、应缓慢的深吸气，吸气后稍屏气片刻。 （2）躯干略向前倾，两侧手臂屈曲，平放在两侧胸壁下部，内收并稍加力。 （3） 咳嗽时腹肌用力快速收缩，使腹壁内陷。一次深吸气可连续咳嗽三声。 （4）停止咳嗽并收缩将剩余的气体尽量呼尽。 （5）在缓慢吸气或平静呼吸片刻，准备再次咳嗽的动作。 （6）勿将漱口水、唾液、呕吐物、鼻咽分泌物等混入痰内，以免影响检验结果。如标本不合格，检验人员应当拒收，并和临床医生对接，重新采样。 （7）标本量一般在35毫升。,5,3、痰标本的保存和输送,痰标本容器密封，勿倒置，严防痰液外溢。不能立即培养的痰标本，须置4冰箱保存，防止痰液干涸或污染。,6,二、结核分支杆菌培养操作规程,
3、培养基 酸性改良罗氏（分离培养）目前由州疾控统一购买按任务数配发并4冰箱保存。 1、将培养基从冰箱取出，恢复到室温并在培养管上编培养序号，写上患者姓名、培养日期、痰涂片编号等信息。 2、标本前处理：碱处理法 取2mL痰标本于前处理管中加1-2倍痰标本量的4%NaOH，振荡器上震动30-60s后室温放置10-15min（不得超过20min）。,7,3、接种方法：取前处理消化后痰液0.1mL,无菌操作接种于培养基斜面上，每份标本同时接种两支酸性改良罗氏培养基，放37孵育。,8,4、结果与报告,接种后37天观察，此后每周观察一次菌落生长情况，有菌落生长需经抗酸染色确认是否为分支杆菌。若至第8周仍无菌落生长方可报告阴性结果。 分支杆菌培养报告方式 分支杆菌培养阴性：斜面无分支杆菌菌落生长 分支杆菌培养阳性（1+）：菌落占斜面面积1/4 分支杆菌培养阳性（2+）：菌落占斜面面积1/2,9,分支杆菌培养阳性（3+）：菌落占斜面面3/4 分支杆菌培养阳性（4+）菌落布满全斜面。 5、培养基污染情况报告 在观察分支杆菌生长情况时，发现有非分支杆菌生长，报告污染，重新送检。污染必须控制在2%以下，当污染率高于2%时，提示培养基污染或消化处理不当，应采取相应措施，查寻和分析原因。,10,11,
