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1、临床基因扩增检验实验室的设置及质量管理体系的建立,山东省临床检验中心 张炳昌,一.临床基因扩增检验实验室的设置,依据：卫生部颁发的临床基因扩增检验实验室管理暂行办法（卫医发200210号）,临床标本的接收,通常的工作流程：标本采集 血清分离 编号 保存或检测 应在四个测定区域之外的地方或区域内接收 接收的标本应收集在原始容器中 在核酸提取时带入至标本制备区,什么样的临床基因扩增检验实验室是最标准的？,理想的PCR实验室设置1,理想的PCR实验室设置2,临床基因扩增实验室设置的一般原则,各区独立 注意风向 人员流向 物品流向,二.实验室质量管理体系的建立,质量手册 质量体系程序文件 标准操作程序
2、 (相关记录表格),质量管理体系的建立,质量手册 程序文件 标准操作程序（SOP）,质量手册,定义：阐明一个实验室的质量方针，并描述其质量体系的文件。 其主要内容包括目录、批准页、前言、质量方针、组织结构、人员职责、实验室设施环境、仪器设备、溯源性、检验方法、标本管理、记录、报告等，是对上述各方面质量管理的一般性描述。,程序文件,程序文件则是对通用于整个实验室的某些方面工作的文件化描述。 主要包括实验室文件和档案等的管理、内审、管理评审、人员培训、投诉处理、保密、计算机安全、新项目开展、量值溯源、试剂仪器及实验用品的购买、标本管理、废物处理等方面。,标准操作程序,SOP最为具体，最具有可操作性
3、，也是使用频率最高的文件，与实验室的日常工作密切相关。常用SOP文件：仪器设备SOP文件，试验项目操作SOP文件，质量、管理SOP文件等。如某个具体的项目临床标本的收集、处理、保存、检测等，具体仪器的操作使用、校准及维护等。 SOP文件与程序文件之间的区别在于后者的原则性要强一些，针对的是一个系列或一个方面的工作。,临床基因扩增检验实验室的技术验收文件要求,临床基因扩增检验实验室的技术验收申请表后提出来的实验室所必须具有的程序文件，大部分是SOP ，少部分是程序文件，对实验室的质量手册没作要求。,怎样来编写SOP 文件,这一点目前大部分实验室都觉得不知从何写起，希望有一个标准模式。其实细细思考
4、一下，你某一项检验应该怎样做才能保证质量，然后就将这些过程写下来就可以了。其实这些SOP 文件究竟采用何种格式编写并不重要，关键的是要具体，要具有可操作性，要让既使是第一次接触该SOP 的人也能按其完成相关操作。一定要有这样一种观念，即SOP 文件不是拿来给别人看的，而是拿来给自己实验室技术人员用的，一定要从实际出发，做得到的才写进去，做不到的就不要写进去。,质量管理,质量管理不是表面文章，其精髓就是所有与实验室检验质量有关的环节全部要有章可循，并按章进行。这即是对实验室实际操作技术人员的约束，同时也是对实验室负责人的约束，不能随心所欲，比如说仪器、试剂、消耗品的购买，都必须按程序进行。这是与
5、我们传统的平常只查考勤、查卫生等到出现问题时再处罚个人的经验管理模式所完全不同的，这个观念和意识的转变首先应是实验室负责人，然后才是具体的实验操作人员。,临床PCR 实验室质量管理的特点,（一）“无基因”概念 （二）实验室要有严格的人员进入限制和程序 （三）使用合格的试剂和消耗品,临床基因扩增检验实验室相关记录,临床基因扩增检验实验室需要记录的有临床标本接收中的患者个人有关资料（如姓名、性别、年龄等）、标本接收日期、标本特性、标本的状态、标本的编号等；检测前的仪器设备和试剂的准备等；检测中的试剂生产厂家、试剂批号、检测日期、检测结果、质控结果及分析、检测人（签字）、质检人（签字）等、检测后的实
6、验台面、仪器设备等的消毒和清洁、紫外线照射等。记录要持之以恒。,质量管理的内涵,写你所做的 做你所写的 记录你已做的 分析你已做的 质量持续改进,怎样编写SOP？,1.检验项目SOP,应根据申华人民共和国卫生行业标准 编号WS/T 227-2002 “临床检验操作规程编写要求”编写项目的SOP文件 原则上，每一收费的检验项目都应有与之相应的SOP文件，尽管某些项目SOP文件可以简单一些,编写中应特别注意，要书写： 1 拒收标本的规定 2 质控品使用水平和频率，允许限的纠正措施 3 操作性能的概要。如：精密度、病人结果可报告范围、方法学比较等。 4 对检验结果为病危报警值的处理,手册必须由主任批
7、准，签字和注明日期。 如果实验室改变领导，手册须由现领导再批准，签字和注明日期。,实验室必须保存停止使用的操作手册副本，并保存到停止使用两年后才能销毁。,2.仪器设备的维护和校准SOP,责任人 维护和校准的基本方面：光路、滤光片、波长、加热模块的清洁、具体的校准点选择（如加样器的校准体积点选择、温度计的校准温度点选择等）、维护和校准的具体方法包括用具 校准合格的判断标准 维护和校准的间隔时间,仪器设备的操作 SOP,按照每台仪器设备的使用说明书，将其详细操作步骤包括开机关机次序、编程、调试、运行、计算等按实际使用中的先后顺序逐项列出，最后还应有使用的注意事项。,仪器SOP文件,应根据厂家提供的
8、操作说明书编写适合实验室实际简明扼要操作程序，大致有： 开关机程序. 常规操作程序 特殊(急诊、复测、)操作程序 仪器维护程序 其它,仪器每日保养记录表,月保养记录表,项目校准程序和计划,校准对于检验结果在规定的报告范围内的准确和可靠是必要的。 校准是一个测试和调整仪器或者检验系统，试剂盒的过程，以提供检验反应和所测物质之间的准确关系。 用配套校准品进行校准是量值溯源开始，厂家应保证校准品的最终溯源,校准计划,校准计划是指检验项目的校准频度。 每次校准数据记录表 对校准数据变化的评估 根据美国CLIA 88规定、还要对校准结果进行验证（Verification）。用一己知浓度样品，稀释成不同浓
9、度，检测后观察所测浓度是否准确，是否成线性。,仪器校准记录表,仪器校准记录表（2）,仪器工作的最基本的环境条件,保证仪器能准确进行工作的最基本的环境、客观条件。如：温度、湿度、UPS、光照度等。,实验室SOP要点,1.SOP文件基本格式,2.实验室清洁SOP要点,目的:为了使实验室台面、地面和仪器设备在实用后，处于洁净和无污染性状态，以防止出现因仪器设备不洁影响检测结果或仪器使用寿命；防止因实验室台面、地面和仪器设备的生物传染危险性造成实验室人员感染，以及防止实验室交叉污染而出现假阳性结果等。 适用范围应包括实验室地面、台面和仪器设备等的清洁。 按实验室台面、地面和仪器设备分开来写各自的具体清
10、洁方法，要具体而又有可操作性 应规定工作人员在清洁时，必须按试剂准备区标本制备区扩增(及产物分析)区方向进行，不得逆行 规定每一工作区域的清洁必须使用专用的清洁用具，不得混用 规定有潜在生物传染危险性材料溅出时的消毒清洁方法,3.生物安全防护SOP要点,明确规定实验室工作人员在进行哪一类接触到有潜在生物传染危险性的物品和材料时，应使用哪类个体生物安全防护设备和用具 制定实验室内锐器物品的使用规则 制定发生意外如手指划破、血清溅入眼内等情况下的处理程序 明确有潜在生物传染危险性的废弃物（包括废弃临床标本）拿出实验室前的消毒方法如高压或化学消毒,4.临床标本的采集、运送、接收和保存 SOP要点,特
11、定标本采集的具体方法步骤 明确规定标本的采集容器要求 明确标本的采集量 明确标本采集后送到实验室检测所能容许的最大时间间隔，亦即标本采集后，应在多长时间内送至实验室 明确标本采集后，在送至实验室检测前的保存方式和条件 明确标本从采集处运送至实验室过程中所要求的运送条件 明确标本接收时，签收的程序、拒收的标准和标本唯一编号的规则 规定标本在实验室内的短期（应有具体时间）和长期（应有具体时间）保存条件和要求 制定保证标本安全存放措施,即如何防止标本丢失、掉换、变质的措施,5.试剂和消耗品的质检 SOP,试剂质检的基本方面，如试剂的抗干扰能力（主要是针对提取试剂），即对溶血、脂血标本扩增抑制作用的了
12、解。可通过自行制备含已知量病毒核酸的不同程度溶血或脂血的标本进行质检。如为定量检测试剂，还应包括检测的重复性、线性范围等的质检，通常使用2-3份样本进行检测即可。如为定性检测试剂，则应重点考察测定下限，可用系列稀释的含已知量靶核酸的血清标本进行 核酸提取用离心管质检的基本方面 带滤心吸头的质检主要是滤心的密封性,6.项目检测、结果判断、解释和报告 SOP,标本进入实验程序后的操作编号方式 根据所用试剂盒确定的详细操作流程 仪器编程及文件名的编写规则 结果判读的流程和规则 结果分析解释的流程 结果报告流程,7.实验记录及其管理 SOP,日常检验过程中应记录的基本内容的规定，如仪器设备操作、维护和
13、校准过程及有关数据；检验试剂来源和批号；检验标本的来源和唯一编号；试剂的配制；实验环境条件的控制记录；实验室清洁的记录；质控的记录；原始检测数据及其推导记录等 对实验记录者的签名方式的规定和要求 实验记录管理的基本方面：指定专门的管理人；有专门的保存处如柜子等；记录的登记归档方法；记录的借阅及销毁记录；记录保存的时间；电子记录的备份保存具体方法及保存时间等,8.室内质量控制 SOP,明确室内质控物的来源及浓度 明确所选用的质控方法 明确失控的判断标准或所采用的失控规则 明确失控后的分析及处理措施,9.参加室间质量评价 SOP,明确规定室间质评样本的接收记录方式、保存条件及实验编号规则 明确室间
14、质评样本的检测流程，要强调的是，室间质评样本应以与临床标本相同的方式处理和检测 明确室间质评样本的报告流程，即填写、复核和签发如何进行，由谁负责 明确对返回结果的分析流程和责任人 明确室间质评检测失败的原因分析流程 明确如果测定准确性出现问题后，如何针对性采取措施的流程,10.投诉处理 SOP,明确投拆第一接触人对投拆的处理流程，即如何记录、如何针对相关投诉的进一步处理程序、是否需要报告和如何报告、以及如何向投拆人返回处理意见等。可将投拆分为不同类如对检验结果正确性、服务态度、报告单填写错误等分别编写处理流程 投拆有效时的如何改进和采取何种措施的具体流程。应非常具体并具有可操作性,临床PCR检
15、验流程记录表,临床PCR检验流程记录表 检验日期 检验项目： 扩增仪中保存文件名： 使用说明： 1本记录表须严格遵循试剂准备区标本制备区扩增区（产物分析区）单一流向移动，严禁逆向移动。 2各项工作执行后，在相应叙述前的“”内打“”。 3本记录表最后与相应的标本接收记录等归档保存于扩增区的专用文件柜内，以备查找。,实验前准备 试剂在有效期内 扩增仪、加样器和温度计在校准的有效期内 生物安全柜的滤膜在使用有效期内 消毒溶液在有效期内 冲眼器内无菌生理盐水在有效期内 离心管、带滤心吸头已经过质检合 操作者：,试剂准备区（1区） 实验前 ： 打开通风设备 实验台面清洁（水或70%酒精擦拭） 冰箱温度：
16、冷藏室（28） ； 冷冻室（201） 实验室温度： （允许范围：1030）；相对湿度： （允许范围：30%70%） PCR试剂来源： （可直接列出有关厂家名称） 批号： 检验项目： 本次实验用量： 人份，剩余量： 人份。 其他有关试剂配制： 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制1%含氯消毒液 毫升； 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制4NaOH溶液 毫升； 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯 毫升； 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制 毫升； 其他： 仪器设备使用： 离心机： 正常 不正常 振荡器： 正常 不正常 实验后： 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机，并进行紫外照射30分钟以上。 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。 操作者：,
