抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的检测及临床意义-（最新版-已修订）

2、LAMP2)，溶菌素(LYS)，天青杀素，防御素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶。根据乙醇固定的中性粒细胞基质片中，可以区分两种不同的荧光模型：一种胞浆型（c-ANCA），是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，细胞核无荧光。在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现相同。其主要的靶抗原是蛋白酶 3(PR3)。另一种是核周型（p-ANCA），是围绕中性粒细胞细胞核周围的平滑带状荧光。由多种抗原引起，主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶 G(Cath G)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白 2

3、 (H-LAMP2)，溶菌素(LYS)等。不同抗体在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现有所不同。抗 MPO 抗体产生的 p-ANCA 因耐甲醛，其荧光模型与在乙醇固定的中性粒细胞中出现的c-ANCA类似故叫甲醛抗性的p-ANCA。而其他非 MPO 抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现，这种类型又称为甲醛敏感的 p-ANCA。故根据乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片表现，可初步判定 ANCA 的靶抗原 PR3，MPO，非 MPO 三类。二、ANCA 的检测间接荧光免疫方法是检测 ANCA 的参考方法或者标准方法，至今也是最常用的经典方法。IIF 是区分 c-ANCA

4、和 p-ANCA 的基础，有较高敏感性，可半定量，但 IIF 测定的是总 ANCA，不能准确区分靶抗原，需特异性的检测方法作为补充。由于多种免疫性疾病患者存在 ANA，用 IIF 法检测 ANCA 时，会产生干扰实验结果的判断。为避免干扰现象，采用了四基质联合的检测即：乙醇固定的粒细胞；甲醛固定的粒细胞；Hep-2（人喉癌细胞）细胞；猴肝细胞。基质片各细胞分布及意义如表一所述。ANCA 荧光模型及表现如表二所述。表一：四联基质片分布及意义表二：ANCA 荧光模型及表现甲醛抗性 p-ANCA：抗 MPO 抗体耐甲醛，其荧光与在乙醇固定的中性粒细胞中的 c-ANCA 类似区

5、分 ANA 的干扰：Hep-2 细胞有典型荧光表现， Hep-2 细胞甲醛固定粒细胞 1：判断 c- ANCA， 2：区分 p-ANCA对甲醛敏感还是耐受甲醛敏感 p-ANCA：其他非 MPO 抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现区分 ANA 与 ANCA：借助猴肝细胞和其中的肝血窦粒细胞。 ANCA 阳性，只有肝血窦粒细胞出现荧光，。如果两者同时阳性，所有肝细胞核都有荧光。猴肝细胞乙醇固定粒细胞是标准实验基质。区分两种荧光模型：c-ANCA；p-ANCA。荧光表现荧光模型乙醇固定粒细胞甲醛固定粒细胞 Hep-2 细胞猴肝细胞 c-A

6、NCA 阳性胞质呈现弥散的细颗粒荧光，胞质荧光清晰勾勒出核的轮廓，分页核之间荧光增强。胞质呈现弥散的细颗粒荧光，胞质荧光清晰勾勒出核的轮廓，分页核之间荧光增强。阴性肝细胞本身无荧光。仅肝血窦粒细胞出现荧光。甲醛耐受 p- ANC A 呈现核周胞质平滑丝状带荧光。荧光阳性的胞质主要集中在分页核周围，形成环状或不规则的块状。胞质呈现弥散的细颗粒荧光，胞质荧光清晰勾勒出核的轮廓，分页核之间荧光增强。阴性肝脏细胞本身无荧光。仅肝血窦粒细胞出现荧光。 A N A 阴性 p- ANCA 阳性甲醛敏感 p- ANC A 呈现核周胞质平滑

7、丝状带荧光。荧光阳性的胞质主要集中在分页核周围，形成环状或不规则的块状。阴性阴性肝脏细胞本身无荧光。仅肝血窦粒细胞出现荧光。 A N A 阳性 ANCA 阴性细胞核阳性，荧光强度增强阴性细胞核呈现荧光表现，如 ANA 所述肝细胞核阳性。肝血窦粒细胞未见荧光。三、注意事项为提高对疾病诊断的特异性，检测时应注意以下问题 1、检测 ANCA，一般建议同时做 IIF 初筛和确认实验，以提高 ANCA 的临床应用价值，不做单独初筛或单独确认实验，以免降低对疾病诊断的特异性。 2、不能仅检测抗 PR3 和 MPO 两种特异性抗体，而不检测，这样容易限制 ANCA

8、对疾病诊断的特异性。 3、用 IIF 检测时，仅使用乙醇固定的粒细胞片，这样不能严格排除 ANA 的干扰，容易出现假阳性。四、临床意义（一）ANCA 与原发性小血管炎韦格纳肉芽肿(WG)，显微多动脉炎(MPA)，坏死性新月体性肾小球肾炎(NCGN) 和变应性肉芽肿性血管炎(CSS)等等原发性系统性小血管炎的发病与 ANCA 密切相关，临床上已将上述疾病统称为 ANCA 相关小血管炎。ANCA,特异性 PR3 抗体和抗 MPO 抗体的检测已成为原发性小血管炎的敏感特异的血清学检测项目。 1、抗 PR3 抗体特异性 PR3 抗体为 WG 的标志性抗体，抗 PR3 抗体荧光模型以

9、 c-ANCA 为主。但以 c-ANCA 诊断 WG 特异性为 90，而以抗 PR3 抗体的特异性可超过 95。抗 PR3 抗体在其他的原发性血管炎中业可以检测出来，但阳性率较低。抗 PR3 抗体敏感度与疾病的活动性及病程有关，在疾病的早期症状不明显时，就可出现阳性。因而抗 PR3 抗体常作为 WG 的早期诊断、疗效判断、复发估计的甲醛耐受 p- ANCA 阳性细胞核阳性，荧光强度增强荧光表现如 c-ANCA 阳性，乙醇，甲醛固定粒细胞所述细胞核呈现荧光表现，如 ANA 所述。肝细胞和肝血窦粒细胞都有荧光。甲醛敏感 p- ANCA 阳性细胞核阳性，荧光强度增

10、强阴性细胞核呈现荧光表现，如 ANA 所述。肝细胞和肝血窦粒细胞都有荧光。指标，对临床治疗有重要的参考价值。 2、抗 MPO 抗体抗 MPO 抗体荧光模型以 p-ANCA 为主，主要与 MPA、NCGN、CSS 相关。还可见于其他疾病，如节结性多动脉炎，抗肾小球基底膜肾病，WG，SLE，RA，药物诱导的狼疮，Felty 综合症等。抗体滴度与疾病活动性相关，可用于早期诊断、疗效判断、复发估计的指标，对临床治疗有重要的参考价值。抗 MPO 抗体阳性高度提示坏死性血管炎或特发性 NCGN，对诊断原发性小血管炎的特异性达到 99。因而每一个不明原因的血管炎或肾小球肾炎的患者

11、，都应该检测 ANCA。表三：ANCA 与原发性小血管炎（二）ANCA 与药物诱导性血管炎近年来不断有药物治疗引起的 ANCA 阳性的病例报道，如丙基硫氧嘧啶，肼苯哒嗪，普鲁卡因酰胺，青酶胺，美满霉素，他巴唑/甲巯咪唑等。其中报道比较多的是长期使用丙基硫氧嘧啶引起的 ANCA，其特点是滴度高，抗体谱广（抗原主要是 MPO，也可同时伴有或单独出现其他靶抗原，如 PR3， LF， Cath G， BPI， LYS 等）。相关疾病荧光模型靶抗原（）韦格纳肉芽肿(WG)C ，P（少见）PR3（85），MPO（10）显微多动脉炎(MPA)C ，PPR3（45），MPO（

12、45）坏死性新月体性肾小球肾炎 (NCGN) C ，P（少见）PR3（25），MPO（65）变应性肉芽肿性血管炎(CSS)C ，P（少见）PR3（10），MPO（60）结节性多动脉炎（PAN）少见PR3（5），MPO（15）抗肾小球基底膜病（抗 GBN） PMPO 药物诱导性血管炎患者临床表现与原发性血管炎类似，停止丙基硫氧嘧啶用药后，临床症状好转，ANCA 可转阴。因此，长期使用丙基硫氧嘧啶治疗过程中，应定期检测 ANCA，及早发现药物诱导性血管炎。（三）ANCA 与其他疾病除原发性血管炎外，其他一些疾病中也可出现 ANCA，主要为 p-ANCA，其靶抗原并非 PR，

13、MPO，而是 LF，Cath G，BPI，LYS 等 1、慢性炎症性肠病(CIBD) CIBD 是一种消化系统的自身免疫性疾病，包括溃疡性结肠炎（UC），克罗恩病（CD）两种。以往的 CIBD 诊断依赖 X 线检查，内窥镜及组织学诊断，缺乏有效的试验室指标。近年来研究发现 UC 病人血清中 ANCA 阳性率为 60-80，而 CD 患者的阳性率为 10-20，多为 p-ANCA，相关靶抗原有 BPI 等。滴度与疾病的活动度和病程无关。因为 p-ANCA 在 UC 阳性率高，CD 阳性率低，故可作为两者的鉴别诊断及 UC 早期诊断指标。 2、结缔组织病在结缔组织病中， ANCA 阳

14、性主要见于 SLE 和 RA，其他结缔组织病中少见。但文献报道在 SLE 和 RA 阳性率差异特别大（16-69），这可能与使用方法，抗原基质片及工作人员水平有很大关系。 SLE 中 ANCA 阳性可能与慢性炎症反应有关，如动脉炎，浆膜炎和 CRP 增加等。有报道抗 MPO 抗体与 RA 的关节外损害及血管损害有关。 3、自身免疫性肝病在自身免疫性肝病中，也可检测到 p-ANCA。在原发性硬化性胆管炎(PSC)患者中，p-ANCA 阳性率高达 70-80，是该病重要的血清学指标。 4、其他疾病有文献报道，HIV,阿米巴，细菌感染以及不明原因的肺部慢性炎症及纤维化患者中有 p-ANCA 阳性。

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