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1、最新考纲 1基因工程的诞生 2基因工程的原理及技术 3基因工程的应用 4蛋白质工程 实验：DNA的粗提取与鉴定,考纲解读 1基因工程的实质 2基因工程操作的四步曲及其操作实例 3基因工程在农业、医药生产、疾病诊断和治疗中的应用 4蛋白质工程的一般操作过程,知识点一基因工程的概念及基本工具,议一议：限制酶主要存在于原核生物中，它有什么意义？ 答案：限制酶在原核生物中主要是切割外源DNA，使之失效，从而达到保护自己的目的。,知识点二基因工程的基本操作程序,想一想：什么叫基因文库？建立基因文库有什么意义？ 答案：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体细菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种
2、生物的不同基因，称为基因文库。建立基因文库，便于随时获取目的基因。 答案：构建基因表达载体时，可能没有加入启动子。,看一看：某研究小组在利用基因工程改造棉花时，发现转入的目的基因始终不表达，其原因可能是什么？,知识点三基因工程的应用,想一想：基因治疗是针对什么样的病进行的？ 答案：基因治疗一般针对很难用一般药物进行治疗的由基因异常引起的遗传病。,知识点四蛋白质工程,质粒载体 质粒是细菌拟核DNA外的环状DNA小分子，可在细菌间转移。质粒是常用的转基因载体。,病毒载体 病毒很适合用于基因治疗。病毒的蛋白质外壳内能容纳多达7 500个碱基的DNA片段。当病毒侵染宿主细胞并在细胞内增殖时，也将重组D
3、NA带入到细胞中。病毒已经多次用于基因治疗的临床实验。这种方法存在的问题是宿主对病毒的免疫反应。,显微注射法 DNA可以通过显微注射法转入动物细胞中。下图所示的是目的基因的多份拷贝正通过玻璃微型吸管注射到受精卵中。转基因小鼠和家畜都是利用这种方法产生的，但是成功率很低；只有2%3%的受精卵发育成转基因动物，在这些动物中只有一小部分表达了转入的基因。,基因枪法 这种方法是利用压缩气体产生的动力将包裹在金属颗粒表面的外源DNA打入生物组织中。常用的金属颗粒有金粉粒子或钨粉粒子。一些细胞能像表达自身基因一样表达导入的外源DNA。,学习笔记：,1与DNA分子相关的酶 (1)几种酶的比较,基因工程的基本
4、操作工具,(2)限制酶与DNA连接酶的关系 限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 DNA连接酶起作用时不需要模板。,2载体 (1)作用 作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。 利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 (2)具备的条件 能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。 有多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。 具有特殊的标记基因，以便进行筛选。,(3)种类 质粒：一种祼露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，能够自我复制的很小的双链环状DNA分子。 噬菌体的衍生物。 动植物病毒。 提醒一般来说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此
5、人们根据不同的目的和需要，对某些天然的载体进行人工改造。 限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因之外，这样才能保证标记基因的完整性，有利于对目的基因的检测。,本部分知识多以选择题的形式出现，并且与必修内容联系密切，也可在基因工程综合题中作为某一具体问题出现。,【典例1】(2011浙江卷)将ada(腺苷酸脱氨酶基因)通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是()。 A每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 C每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada D每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子,解析将重组
6、质粒导入大肠杆菌中并成功表达，说明大肠杆菌内至少含有一个重组质粒；每个重组质粒都含有目的基因ada，则该重组质粒至少含一个能被该限制性核酸内切酶切割的位点；限制性核酸内切酶具有特异性，种类不同，识别的位点不同，切割出的黏性末端也就不同，因此并不是每个位点都能插入ada；根据题干信息，导入重组质粒的大肠杆菌成功表达出腺苷酸脱氨酶，说明插入的ada至少表达出一个腺苷酸脱氨酶分子。 答案C,【训练1】下列有关基因工程中限制性核酸内切酶的描述，错误的是()。 A一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B限制性核酸内切酶的活性受温度影响 C限制性核酸内切酶能识别和切割RNA D限制性核酸内
7、切酶可从原核生物中提取,解析考查基因工程中工具酶的有关知识。限制性核酸内切酶的化学成分是蛋白质，它的活性受到温度和pH的影响；限制性核酸内切酶的特点是能识别双链DNA中特定的核苷酸序列，可在特定的位点进行切割，但不能识别和切割RNA；限制性核酸内切酶主要是从原核生物体内分离出来的。 答案C,【训练2】如图是利用基因工程技术培育转基因植物，生产可食用疫苗的部分过程示意图，其中Pst 、Sma 、EcoR、Apa为四种限制性核酸内切酶。下列说法错误的是()。,A图示过程是基因工程的核心步骤 B表达载体构建时需要用到限制酶 Sma C抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来 D除图示组
8、成外，表达载体中还应该含有启动子和终止子等结构 解析图示过程为基因表达载体的构建过程，是基因工程中的核心步骤。构建过程中需要将目的基因完整切割下来，此时要用到限制酶Pst、EcoR。抗卡那霉素基因是标记基因，目的是便于鉴定和筛选含有目的基因的细胞。基因表达载体包括启动子、目的基因、终止子和标记基因等。 答案B,基因工程技术生产凝乳酶的过程,基因工程操作程序及与蛋白质工程的比较,1基因工程的操作程序分析 (1)目的基因的获取途径 从自然界中已有的物种中分离出来，如从基因组文库或cDNA文库中获取。 人工合成目的基因 常用的方法有反转录法和化学合成法。 利用PCR技术扩增目的基因 通过PCR技术可
9、对已获取的目的基因进行扩增，以获取大量的目的基因。,(2)基因表达载体的构建 提醒插入的目的基因的表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入基因部位之前需有启动子，之后需有终止子。 两次使用的限制酶为同一种酶，这样形成的黏性末端碱基之间互补，便于连接。,(3)将目的基因导入受体细胞(转化),(4)目的基因的检测与鉴定,2.基因工程与蛋白质工程的比较,本部分知识是高考的重点内容，特别是江苏卷年年都考，理综试题也多有涉及，各省对本部分内容考查要求不同，复习中应引起关注。,【典例2】(2011安徽)家蚕细胞具有高效表达外源基因的能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可提取干扰素用于制药。 (
10、1)进行转基因操作前，需用_酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。 (2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的_和_之间。,(3)采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含Mg2)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、_和_。 (4)利用生物反应器培养家蚕细胞时，贴壁生长的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以_，增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。,解析本题综合考查基因工程、细胞工程和PCR技术，意在考查考生对基础知识的理解。胰蛋白酶或胶原蛋白酶
11、处理可以将动物组织分解成单个细胞；基因表达载体包括启动子、目的基因、终止子、标记基因等，其中启动子和终止子有利于目的基因的表达，标记基因有利于目的基因的检测；PCR技术中需要原料(4种脱氧核苷酸)、缓冲液、模板DNA、引物和耐热DNA聚合酶等；在生物反应器中放入多孔的中空薄壁小玻璃珠的目的：一方面有利于细胞的贴壁生长，避免接触抑制；另一方面有利于气体交换。,答案(1)胰蛋白(或胶原蛋白)(2)启动子终止子 (3)对干扰素基因特异的DNA引物对TaqDNA聚合酶(4)扩大细胞贴壁生长的附着面积,【训练3】(2011南京二模)下图表示利用基因工程培育抗虫棉的过程，请据图回答下列有关问题。,(1)若
12、限制酶的识别序列和切点是GATC，限制酶识别序列和切点是GGATCC，那么在过程中，应用限制酶_切割质粒，用限制酶_切割抗虫基因。 (2)将通过过程得到的大肠杆菌涂布在含有_的培养基上，若能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入。 (3)要确定抗虫基因导入后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，则在个体水平上的鉴定过程可简述为：_。经筛选分析，该植株细胞中含有一个携带抗虫基因的DNA片段，因此可以把它看作是杂合子。理论上，该转基因植株自交产生的F1代中，仍具有抗虫特性的植株占总数的_。,(4)过程所用的现代生物技术称为_，从遗传学角度来看，据细胞通过过程，能形成棉植株
13、的根本原因是细胞具有_。 解析本题极易出错的部分有：在第(1)小题中没有看清目的基因插入的位置，从而不能确定用限制酶还是来切割质粒还是切割抗虫基因。第(3)小题检测抗虫性状在个体水平上是否表达，应该让害虫吞食转基因棉花的叶片，观察害虫的存活情况，这个地方也有出错的，主要没有看清是在哪个水平上进行检测的。,1实验原理 (1)DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同 ，其中在物质的量浓度为0.14 mol/L时最低。 (2)DNA不溶于酒精，但是细胞中的一些有机物如蛋白质则溶于酒精，可以用酒精提纯。,选修三高考必考教材实验DNA的粗提取与鉴定,(3)DNA遇二苯胺(沸水浴)会与之反应呈现蓝色，
14、可用来鉴定DNA分子。 2实验流程,1做该实验时，不能用猪血代替鸡血，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核，不能提取DNA。 2制备鸡血细胞液时，要注意向鸡血中加柠檬酸钠，防止血液凝固。 3涨破细胞的方法：向血细胞中加入蒸馏水，血细胞溶液的浓度大于蒸馏水的浓度，从而使血细胞大量吸水而涨破。不能用生理盐水：因为血细胞溶液的浓度与生理盐水的浓度相当，所以血细胞在生理盐水中不能吸收水分。 4两次加入蒸馏水，第一次是为了使血细胞吸水涨破；第二次是为了降低氯化钠的浓度，有利于DNA的析出。,5两次析出DNA的方法：第一次是加入蒸馏水，降低氯化钠的浓度，促使DNA析出；第二次是加入冷却的酒精，因为DNA不
15、溶于酒精溶液。 6鉴定DNA时要用两支试管，其中不加DNA的试管起对照作用，该试管溶液不变色，另一支加有DNA的试管溶液变蓝色。 提醒选材时注意选用细胞易破碎、DNA含量相对较高的生物组织；鉴定DNA的二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定效果。,本实验为选修教材的唯一高考必考实验，命题多出现在江苏单科考卷中，但近年理综考试中也有所涉及，应引起关注。,【典例】(2010江苏卷)某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动，具体步骤如下： 材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份，每份10 g。剪碎后分成两组，一组置于20 、另一组置于20 条件下保存24 h。 DNA粗提取： 第一步：将上述材
16、料分别放入研钵中，各加入15 mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤，取滤液备用。 第二步：先向6只小烧杯中分别注入10 mL滤液，再加入20 mL体积分数为95%的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。,第三步：取6支试管，分别加入等量的2 mol/L NaCl溶液溶解上述絮状物。 DNA检测：在上述试管中各加入4 mL二苯胺试剂，混合均匀后，置于沸水中加热5 min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如下表。,(注：“”越多表示蓝色越深),分析上述实验过程，回答下列问题： (1)该探究性实验的课题名称是_。 (2)第二步中“缓缓地”搅拌，这是为了减少_。 (3)根据实验结果，得出结论并分析。 结论1：与20 相比，相同实验材料在20 条件下保存，DNA的提取量较多。 结论2：_
