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1、临床微生物标本的采集与送检,主要内容,1、标本采集的意义和原则 2、标本的运送与拒收原则 3、各种标本的采集 血液、骨髓标本 尿液 粪便 痰及上呼吸道标本 穿刺液标本(脑脊液、胆汁、胸腹水等) 脓液及创伤感染分泌物标本 生殖道标本,标本采集是指采集患者体内的一小部分血液、体液、排泄物、分泌物以及组织细胞等标本进行检验,以反映机体正常的生理现象和病理改变。,标 本 采 集,标 本 采 集,60%以上的实验误差发生在分析前!标本采集正确与否与检验结果的准确性有密切的关系! 因此,我们应掌握正确的标本采集方法。,标本采集的意义,正确的微生物标本采集和运送是准确的病原学诊断的前提,掌握正确的标本采集方
2、法,为保证标本的质量,获得阳性结果,应掌握正确的标本采集方法、采集量和采集时间并应及时送检,特殊标本还需注明采集时间。,基本原则,1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.采样后立即送检 5.混有正常菌群标本,不可置肉汤培养 6.标本容器须灭菌处理,但不得使用消毒剂。 7.送检标本应注明来源和检验目的,标本的运送原则,1、所有的标本都必须立即送往实验室,最好在2h内,保存时间不应超过24h. 2、最佳的临床标本送检首先取决于所获取标本的量.量少的标本应在采集后15-30min内送检. 3、对环境敏感的微生物如志贺菌、奈瑟氏菌和流感嗜血杆菌
3、(对低温敏感)应立即处理,禁止冷藏脊髓液和生殖道、眼部、内耳道标本。,标本的拒收原则,无标签、无检验单不检测,并与送检的医生和护士联系。 送检延误不接收,提醒送检者,要求重新采集。 送检容器不当或渗漏不接收,告知送检者,要求重新采集。 标本不符合要求不接收,联系送检者,指出不符合要求之处,要求重新采集符合试验要求的标本.,临床微生物检验常见标本,血液、骨髓标本 尿液 粪便 痰及上呼吸道标本 穿刺液标本(脑脊液、胆汁、胸腹水等) 脓液及创伤感染分泌物标本 生殖道标本,一、血培养标本采集,血培养送检指征,病人出现以下临床表现,或同时具备以下几种临床表现时应采集血培养。 1 、发热(38)或低温(3
4、6) 2 、寒战 3 、白细胞增多(10109/L,特别有“核左移”时) 4 、粒细胞减少(成熟的多形核白细胞1109/L) 5 、血小板减少 6 、皮肤、粘膜出血 7 、昏迷 8 、多器官衰竭 9 、血压降低 10 、呼吸加快 11、特殊情况:可疑新生儿败血症时,除发热或低温外,很少培养出细 菌,应增加尿液和脑脊液培养。,血培养采集须知,应在抗生素应用前或停药一周后采集标本,如不能停用抗生素,应于下次抗生素应用前采集 ! 对怀疑菌血症、真菌血症的患者,在考虑使用抗菌药物之前,应立即采集血培养标本。 必须同时或间隔短时间内采集套以上血培养标本。,血培养采集容器,法国梅里埃公司血培养仪配套血培养
5、瓶或安图公司血培养瓶,血培养标本采集方法,1、皮肤消毒 2、培养瓶消毒 :(1) 用75酒精消毒血培养瓶橡皮塞子。(2) 酒精作用60s。(3) 在血液注入血培养瓶之前,用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精,然后注入血液。 3、血液注入血培养瓶中,轻轻颠倒混匀,以防血液凝固 。,血培养采集次数,成年患者:推荐同时采集套(不同部位)血培养标本(即双瓶双臂同时采集血培养标本)。 婴幼儿患者:推荐同时采集次(不同部位)血培养标本。 原因: 血培养做1套的检出率为65%。 做2套和3套检出率的检出率分别为80%和90%。 单瓶的血培养检出率不高,而且结果很难临床解释。 在采取血培养后的2至5天内
6、,无需重复采取血培养。 两个例外:细菌性心内膜炎和金黄色葡萄球菌菌血症。,血培养采血量,成年患者:推荐采血量每瓶不少于5ml。 婴幼儿患者:儿童3-5ml,婴儿为1-2ml,推荐采血量每瓶不少于2ml。(少于病人总血容量的1%),注意事项,1、严禁在输液、输血的针头处抽取标本,以免影响检验结果。(最好在对侧采集) 2、若同时抽取几个项目的血标本,一般注入容器的顺序为:血培养瓶抗凝管干燥试管. 动作要迅速准确,避免溶血。注入标本后的血培养瓶务必立即送至检验科细菌室 3、每次领培养瓶不宜过多,以防过期,未使用的培养瓶亦应室温保存(15-30),切勿放冰箱保存。,骨髓标本的微生物学检查,采集部位:骨
7、髓穿刺法从髂骨采集标本。 采集时间:在用药前、发热初期或高热期 当骨髓炎时或长期使用抗菌药物患者,抽取骨髓培养阳性率远高于血液培养,二、尿液标本的采集,尿液标本的送检指征,1 有典型的尿路感染症状; 2 肉眼脓尿或血尿; 3 尿常规检查表现为白细胞和/或亚硝酸盐阳性; 4 不明原因的发热,无其他局部症状; 5 留置导尿管的病人出现发热; 6 膀胱排空功能受损; 7 泌尿系统疾病手术前。,尿液标本采集容器,无菌试管或无菌尿液标本留取容器,尿液标本采集方法,1、 清洁中段尿标本,嘱咐患者睡前少饮水,清晨起床后用肥皂水清洗会阴部,女性应用手分开大阴唇,男性应翻上包皮,仔细清洗,再用清水冲洗尿道口周围
8、,开始排尿,将前段尿排去,插入性接取中段尿约10ml于无菌容器中,立即送检,于一小时内接种。该方法简单、易行,是最常用的尿培养标本收集方法,但很容易受到会阴部细菌污染,应由医护人员采集或在医护人员指导下由患者正确留取。,尿液标本采集方法,2 、耻骨上膀胱穿刺:使用无菌注射器直接从耻骨上经皮穿入膀胱吸取尿液,是评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法,但有一定的痛苦,病人难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本的采集,尿液标本采集方法,3 、直接导尿:按常规方法对会阴部进行清洗消毒后,用导尿管直接经尿道插入膀胱,获取膀胱尿液。可减少尿液标本的污染,准确地反映膀胱感染情况。但有可能将下尿道
9、的细菌引入膀胱,导致继发感染,一般不提倡使用。,尿液标本采集方法,4 、小儿收集包:对于无控制能力的小儿可应用收集包收集尿液,这种装置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性,所以只有在检验结果为阴性时才有意义。如果检验结果为阳性,应结合临床进行分析,必要时可使用耻骨上膀胱穿刺或导尿法留取尿液进行复查。,尿液标本采集方法,5、 留置导尿管收集尿液:利用留置导尿管采集标本时,应先消毒导尿管外部,按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液,操作时应防止混入消毒剂,不能从收集袋中采集尿液。长期留置导尿患者,应在更换新尿管时留取尿标本。,注意事项,严格进行无菌操作,因为尿液标本的采集和培养中最大的问题是污染
10、杂菌 通常应取晨起第一次尿液送检 多数药物均通过尿液排泄,因此采集尿液应在用药前进行,三、粪便标本的采集,粪便标本的送检指征,1 急性腹泻:大便次数明显增多,腹痛,里急后重,往往伴有发热,大便性状为粘液便或脓血便。 2 慢性腹泻:大便次数多,多为稀便,伴有全身乏力等症状。 3 无痛性大量水样便或米泔样稀便。 4 先吐后泻:恶心、呕吐、腹痛、腹泻。有集体发病史,多为细菌性食物中毒所致。 5 抗生素治疗后腹泻:常发生于长期抗生素治疗后,糊状便,排便次数增加。 6 高热惊厥:通常为中毒性痢疾,多见于婴幼儿和小儿。,粪便标本的采集容器,一次性无菌便盒,粪便标本采集时间,1采样原则 腹泻病人应在急性期采
11、集(3天以内),以提高检出率,亦最好在用药之前。 2沙门菌感染 肠热症在2周以后;胃肠炎病人在急性期,早期采集新鲜粪便,粪便标本采集方法,自然排便采集法 自然排便后,挑取其脓血、粘液部分2-3g,液状粪便取絮状物2-3ml,盛于灭菌容器内或保存液中送检 直肠拭子方法 如不易获得粪便时,或排泄困难的患者及婴儿,可用直肠拭子采取,即以无菌棉拭子用生理盐水湿润后,插入肛门内4-5cm(幼儿2-3cm)轻轻转动取出,插入无菌试管内送检。,注意事项,虽粪便含有多种杂菌,但应尽量采用无菌容器(一次性无菌平皿)。 为提高检出率,要采集新鲜粪便作培养,且应挑取其脓血、粘液部分。,四、痰及上呼吸道标本的采集,痰
12、标本送检指征,1 咳嗽、咳痰:痰液可为脓性、血性、铁锈色或红棕色胶胨样痰。 2 咯血:肺结核病人常痰中带血。 3 呼吸困难 4 发热 5 胸痛:当炎症病变累及壁层胸膜时,会发生胸痛。 *肺部感染的患者有2550可能发生菌血症,应同时作血培养。,上呼吸道标本送检指征,1病毒性普通感冒伴有明显咽痛时,怀疑为咽部链球菌感染,应做细菌培养。 2细菌性咽扁桃体炎:明显咽痛、畏寒、发热,体温可达39以上。 3 上呼吸道感染易并发鼻窦炎、中耳炎、气管支气管炎,需送相应部位分泌物或痰液进行细菌培养。,痰标本和上呼吸道标本采集容器,一次性无菌留痰盒 咽拭子或鼻咽拭子,痰及上呼吸道标本 采集时间,痰:一般以晨痰为
13、好;支气管扩张症患者,清晨起床后进行体位引流,可采集大量痰标本。 咽拭标本:时间上虽无严格限制,但应于抗菌药物治疗前为好。咽部又是呼吸和食物的通路,因此亦以晨起后采集为宜,痰标本采集方法:,自然咳痰法:患者清晨起床后,先用漱口水漱口,再以开水或生理盐水漱口,以减少口腔常居菌群的污染,然后用力自气管深部咳出第一口痰于无菌痰怀内送检 小儿取痰法:用压舌板向后压舌,用棉拭子伸入咽部,小儿经压舌刺激咳嗽时,可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上,送检,上呼吸道标本(咽拭子)采集方法:,采集上呼吸道标本通常采用无菌棉拭子。采集前患者应用开水或生理盐水反复漱口,由检查者将舌向外拉,使腭垂尽可能向外牵引,将棉拭子
14、通过舌根到咽后壁或腭垂的后侧,涂抹数次,但拭子要避免接触口腔和舌粘膜,注意事项,1 采集标本以清晨为佳,以减少口腔正常菌群的污染,采集前先用漱口液充分漱口。 2 做结核分枝杆菌和真菌培养的标本若不能及时送检,应放4冰箱保存,以免杂菌生长。 3 作结核分枝杆菌检查,痰量要多或留取24小时痰液,以提高阳性检出率。,五、穿刺液标本,穿刺液标本,采集时间:当怀疑感染存在,应尽早采集标本,一般在患者使用抗菌药物之前或停止用药后1-2日采集 采集容器:无菌容器 采集方法:采用无菌方法用注射器抽取体内可疑感染部位的液体,注入无菌试管立即送检,注意事项:,如果用于检测细菌,收集脑脊液后,最好能在常温下15-3
15、0分钟内接种培养皿。脑脊液标本不可置冰箱保存,否则会使病原菌死亡,尤其是脑膜炎奈瑟菌(能产生自溶素迅速自溶)、肺炎链球菌和嗜血杆菌 。,注意事项:,如果只采集了一管脑脊液,应先送细菌室做细菌培养,再做脑脊液生化、常规等检查 穿刺时应严格无菌操作 作脑脊液培养时,建议同时作血培养,注意事项:,为了防止穿刺液的凝固,最好在无菌试管中预先加入灭菌肝素,再注入穿刺液 尽可能采集更多的液体,至少1ml,六、脓液及创伤感染分泌物标本,脓液及创伤感染分泌物标本采集,开放性脓肿和脓性分泌物 先以无菌盐水冲洗溃疡表面,用2支无菌棉拭子拭取溃疡深处的分泌物后插入无菌试管送检。一支为涂片检查用,另一支作培养用 大面
16、积烧伤的创面分泌物 用无菌棉拭子取多部位创面的脓液或分泌物,置无菌试管内送检 封闭性脓肿 消毒局部皮肤或粘膜表面后,用注射器抽取,将脓液注入无菌试管内送检,注意事项:,不能立即送检的标本,应放4保存;培养淋球菌、脑膜炎奈瑟菌的标本除外 用药前采集标本,严格无菌采样,七、生殖道标本,生殖道标本检验,生殖道标本的细菌培养、真菌培养、结核菌培养;解脲支原体、沙眼衣原体、淋菌的培养;淋菌涂片;细菌性阴道病相关检测、真菌涂片,生殖道标本送检指征,1 皮肤黏膜损害:原发损害可有斑疹、丘疹、结节、水疱、囊肿、糜烂、溃疡等。继发损害由原发损害演变而来,有萎缩或斑痕等,患者可出现疼痛或瘙痒症状。 2 全身症状:多数无全身症状。偶有发热、乏力、食欲不振等。 3 男性生殖系统表现 4 女性生殖系统表现 5 疑为下列疾病时需送检标本:前庭大腺脓肿、外阴阴道念珠菌病、细菌性阴道病、急性子宫颈炎、急性盆腔炎、急性尿道炎、急性膀胱炎、羊膜腔感染、产褥期感染。,生殖道标本采集容器,无菌试管、男性拭子、女性拭子,生殖道标本采集方法,1 尿道分泌物 男性:清洗尿道口,用灭菌纱布或棉球擦拭,采取从尿道口溢