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1、基因工程核心内容复习,考情分析,命题重点：基因工程的工具与操作程序 基因工程的原理和应用 考查频度：高考高频考点,5年19考 如2016年全国1卷和3卷 考查方向：多以最新基因工程成果为载体，结合其他工程技术进行综合考查,基因工程复习目标,一、基因工程的操作工具和具体步骤（熟悉掌握） 二、明确解题思路,基因工程的操作工具,下列关于限制性核酸内切酶的叙述，错误的是( ) A限制性核酸内切酶可从原核生物中提取 B 同一种限制酶切割不同的DNA分子产生的末端能够进行碱基互补配对 C 限制酶能任意切割DNA分子，从而产生大量的DNA片段 D每一种限制性核酸内切酶只能识别特定的核苷酸序列,限制性核酸内切
2、酶,1. 来源：原核细胞 2.简称限制酶（没有其他简称） 3.是酶就具有酶的特性（受温度、PH影响） 4.能识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列（不能识别RNA序列） 5.作用部位：磷酸二酯键 6.DNA切割的结果：产生黏性末端或平末端 7.相同限制酶切出的末端一定相同，不 同限制酶切出的末端也可能相同,已知限制酶I的识别序列和切点是G GATCC限制酶的识别序列和切点是 GATC。请问这两种酶切出的黏性末端能否相连？,DNA连接酶,作用部位：磷酸二酯键 E.coliDNA连接酶只能连黏性末端 T4 DNA连接酶既能连黏性末端也能连平末端 比较： 限制酶 ECOR1切出的是黏性末端 Sma
3、1切出的是平末端,运载体,作为运载体必备的条件 1.在受体细胞中能复制并稳定保存（让目的基因能一起复制 2.有一 个至多个限制酶切割位点(供外源基因插入) 3.具有标记基因(鉴别受体细胞中是否含有目的基因) -最常用的载体质粒（大肠杆菌Ti质粒含T-DNA） 噬菌体的衍生物 动植物病毒,基因工程的基本操作程序,1、目的基因的获取,2、基因表达载体的构建,3、将目的基因导入受体细胞,4、目的基因的检测与鉴定,步骤一 获取目的基因,1、人工合成,2、从基因文库中获取,3、利用PCR技术扩增,(基因比较小，序列已知),原理:双链DNA分子复制 条件：模板、 引物 热稳定DNA聚合酶 四种脱氧核苷酸
4、能量,组成部分,复制原点（复制起点） 启动子（RNA聚合酶识别 和结合的部位） 目的基因（位于启动子和 终止子之间） 终止子（终止转录） 标记基因（如抗生素的抗性基因或荧光基因。构建时至少有一个）,第二步： 基因表达载体的构建(核心),第三步：将目的基因导入受体细胞,将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法、基因枪法，花粉管通道法 将目的基因导入动物细胞 显微注射法 将目的基因导入微生物细胞 感受态细胞法（ Ca2+处理）,-转化的过程,步骤四 目的基因的检测和鉴定,接种实验,抗原抗体杂交法,分子杂交法,DNA分子杂交法,当转基因技术和其他技术综合考查时 解题思路： 一.明确目的，要获得什么 ？是
5、基因产品、转基因植物还是转基因动物 找到目的基因和受体细胞 二.细化过程,1.获得基因产品：获得含目的基因微生物细胞(一般)-培养微生物-获得产品 2.获得转基因植物：将目的基因导入植物细胞-进行植物组织培养-获得转基因植物 3.获得转基因动物：将目的基因导入动物受精卵（或通过核移植获得）-早期胚胎培养-胚胎移植-获取转基因动物,重度呼吸综合征是有 一 种新型冠状病毒（MERS-CoV）引起的病毒性呼吸道疾病，科学家利用大肠杆菌大量生产病毒蛋白，以探究其作为MERS疫苗的可能性，结合所学知识回答下列相关问题： （1）研究初期，科学家首先分离出病毒RNA分子，在_酶的作用下，以_为原料，获得DNA分子。 （2）在构建表达载体的过程所使用的限制酶一般来自_生物体内，构建好的表达载体包括_、_、启动子和终止子。其中启动子是_酶的结合位点 （3）基因工程获得细胞产品的时候经常采用大肠杆菌、枯草杆菌等微生物作受体细胞其好处是_ (4)为了验证大肠杆菌是否产生病毒蛋白质，常采用的方法是_,谢谢大家！,
