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1、结核病痰涂片检查及质量保证,一、痰涂片检查,（一）结核病细菌实验室布局原则,1、结核病细菌学检查要有独立的实验室，不得与其他实验室混用，最好为P3级实验室； 2、培养基制备、洗刷等相对洁净的操作与涂片镜检、培养前处理、药敏试验等污染操作要有独立分开的场所，最好分别在专用的房间进行；,3、基层只从事涂片镜检的实验室只拥有一间独立房舍的情况下，相对洁净区（镜检区、登记区）与污染区（涂片、染色区）要有明显区分。,（二）痰标本的收集和运送,干酪痰、血痰或粘液痰为合格标本，量应为3-5毫升。 难以获得合格标本时，也应进行细菌学检查，但应注明标本性状，以供分析结果时参考。 收集标本的容器应采用国家参比室推
2、荐的标准痰瓶，或采用直径4厘米、高2厘米的广口塑料（或蜡纸）的或密闭容器。,容器上应注明与检验单一致的病人姓名、编号及日期。 需送上一级实验室检查的痰标本应置4冰箱保存，外送前认真核对检验单与痰瓶上标注，放专用的冰盒内运送，或用纸袋、塑料袋封扎牢后顺序放入包装盒，盒外注明请勿倒置标志。,（三）痰涂片操作流程及显微镜检报告方式,直接涂片法操作流程： 1、涂痰膜（大小1020），自然干燥 2、复红加热初染5分钟 3、流水冲洗 4、盐酸酒精脱色3分钟(必要时重复脱色，但不要过度） 5、流水冲洗 6、美兰复染30秒 7、流水冲洗 8、自然干燥，镜检,显微镜检报告方式： 0条/300视野：萋-尼氏抗酸杆
3、菌阴性 1-8条/300视野：实报菌数并重检 3-9条/100视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（+） 1-9条/10视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（2+） 1-9条/1视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（3+） 10条/1视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（4+）,（四）细菌学常规检查的注意事项,选择痰标本中脓性、血样、干酪样的部分涂片阳性率较高； 一张玻片只涂一份标本，玻片一次性使用，防止交叉污染； 打开痰盒、涂抹痰膜、烧灼接种环时容易产生气溶胶，应注意正确操作和自身防护； 石炭酸复红初染时必须加温。,常见误差原因见下表,(六)废弃标本和污染物的处理,废弃标本、痰盒和污染物均须经高压蒸汽灭菌后方能丢弃或清洗； 如需焚
4、烧处理，须置于焚烧炉内彻底焚化。焚化不彻底或暴露焚烧是危险的； 专业处理： 试验操作工作面应以3%石炭酸或其他可靠的消毒液擦拭，再用紫外线灭菌灯照射30分钟。,二、痰涂片镜检的实验室质量保证,按照世界卫生组织（World Health Organization)和国家结核病防治规划(Nationaltuberculosis programme）的要求，在我国已全面推行DOTS策略或DOTS策略得到良好的贯彻执行的地区，为了持续提高结核病实验室痰涂片检查的工作效率和可靠性，必须建立我国结核病实验室质量保证系统网络。在实验室内部质量控制的基础上，应用实验室间质量检查和评估的方法，进行实验室检查系统
5、的评价，并通过采用一系列措施改进和不断提高实验室业务总体水平。,（一）室内质量控制,室内质量控制(Quality Control,QC)指实验室内部的操作规程、设备和耗材、痰标本收集、染色剂制备、涂片制备和染色、显微镜维护、显微镜镜检、结果登记和报告、以及痰片保存等整个过程的内部检查和监测。,1、痰标本的收集,（1）容器：采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰瓶，或可密封塑料盒、蜡纸盒收集痰标本（参考规格：直径4厘米，高度2厘米）。痰容器应标明病人姓名、日期、编号（初诊病人门诊序号或随访病人登记号）和容器序号1、2、3（1=当日即时痰，2=夜间痰，3=次日晨痰）。 （2）痰标本性质：干酷痰、血痰、粘
6、液痰为合格标本；唾液或口水为不合格标本，除照常进行涂片检查外，应要求患者重新送检。,（3）初诊病人应收集3份痰标本（当日即时痰、夜间痰或次日晨痰），治疗中或复诊随访病人按期每次收集2份痰标本（当日即时痰、当日痰或次日晨痰）。 （4）对当日不能进行涂片检查的痰标本，须置于4冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。,2、抗酸染色液制备,（1）有染色液制备配方和配制纪录。 （2）染色液试剂瓶须标明染色液名称、浓度和制备时间。 （3）染色液置于棕色瓶内存放，避光保存。,3、载玻片,（1）新载玻片应经95%乙醇脱脂，检查无划痕后，方可使用。 （2）一张载玻片只能涂抹1份痰标本。 （3）载玻片只允许一次性使用，
7、严禁清洗后重复使用。 （4）载玻片只允许左侧1/3处标注实验室序号。 （5）载玻片正面右侧2/3中央处均匀涂抹成面积为10 20mm的卵圆形痰膜。,4、染色,（1）肉眼观察染色后的痰膜应呈均匀亮蓝色，无红色斑块。 （2）将染色后的玻片放置在报纸上，如果透过痰膜不能分辨报纸上的文字，则表明该玻片涂抹过厚。 （3）染色后的痰膜脱落部分应小于整个涂抹面积的10%。,5、镜检要求,（1）为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油镜头直接接触涂片上的痰膜。 （2）仔细观察300视野。 （3）每个工作日，一名镜检人员的涂片阅读量不应超过25张。 （4）连续阅读10-20张涂片后，应休息20分钟左右。 （5）采用自查
8、和互查方式，至少抽查复检当日10%涂片，并填写室内质控登记表。,6、登记报告,（1）登记前应对检验单、标本盒、涂片上的标注进行反复核对。 （2）检查后的第一张涂片结果，应按规定准确记录在“结核病细菌学实验室登记本”上。 （3）镜检结果报告应及时发出，以便尽早为临床提供诊断依据。,7、痰涂片保存,（1）镜检后的涂片应及时用浸满二甲苯（分析纯）的擦镜纸揭取数次，彻底祛除涂片上的镜油。 （2）涂片脱去镜油后，必须再次核对实验室登记本与每张涂片实验序号。 （3）涂片上严禁标记镜检的阴、阳性结果。 （4）全部涂片按实验室登记本序号连续排列，存放于玻片盒中。,（5）涂片保存与实验室登记本记录应保持一致。初
9、诊病人第一张涂片存入涂片盒后需预留出两个空位置，以备第二张、第三张涂片检查后放入；随访病人每一张涂片存入涂片盒后需预留出一个空位置，以备每二张涂片检查后放入。 （6）按规定数量保存的用于室间质量评估的涂片，未经上级质控单位准许不能自行销毁。 （7）装满涂片的玻片盒，需用标签注明涂片实验序号区间和日期区间，以便日后盲法复检或现场评价时抽样。,（二）室间质控评估,室间质量评估是根据与其它网络实验室（中间级实验室和中心实验室）比较批量测试和盲法复检结果评价基层实验室能力的过程。EQA包括实验室现场评估以评价操作质量并且也包括现场对涂片的复读。EQA是国际肺病和防痨联合会描述的熟练度检测的扩大。,1、
10、现场评估,（1）要求： 国家参比室每年对省级参比室至少进行1次现场评价，同时每省至少抽查一个市及县级结核病实验室 省级参比室每年对所辖地（市）级实验室至少进行1次现场评价，同时每地（市）抽查1-2县级实验室；必要时，对同批量测试或盲法存在问题的市、县实验室，适当增加现场评价频率。 市（地）级实验室每年对所辖县（区）实验室每年至少进行2次现场评价。, 对批量测试或盲法复检存在总是的县级实验室必须尽快查找原因 ，提高涂片镜检质量。 现场督导员应由经验丰富的实验室技术人员担任，必须经高一级实验室有资格督导员培训后方可上岗。 现场评价要按本操作细则所列项目顺序进行，评价结果可结合当地结核病控制工作考核
11、评比给分。,现场督导员的主要责任是通过现场评价发现问题，提出正确的建议解决问题，提高痰涂片镜检质量。 上级实验室对下级进行督导的时候，应当核对调查表和被评估实验室实际情况，为此各级调查表应当保存五年以上。,2、检查步骤：现场评价操作步骤 试剂 供应 实验室安全 显微镜 用于室间质量保证的玻片储存 涂片、染色和镜检 现场复检 督导小组检查和/或复检印象 盲法复检痰片抽样 现场评估概述,2、盲法复检,盲法复检原则： 从各个实验室抽取的涂片样品必须是随机选出的，并能代表整个实验室的操作水平。 负责抽样的督导员，必须保证复检技术人员不知道初检结果，以确保盲法复检真实性。 严格按照随机原则抽取涂片，以保证抽取的样本在统计学上真正代表被评估实验室的整体水平。 涂片初检结果与第一复检者盲法复检结果之间的分歧，由第二复检者复检后最终确定。 督导者应及时将复检结果反馈给被督导实验室，以利于涂片技术与质量的不断提高。,盲法复检评价： 盲法复检的目的不是为了验证某个病人诊断正确与否，而是评价整个实验室操作水平。评价的内容除了涂片镜检结果存在的误差之外，还包括检查标本的质量（合格标本和不合格标本的比例）、涂抹的大不和厚度、染色质量如何等，以便采取纠正措施，提高实验室的工作质量。,谢谢！,
