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1、转基因生物,转黄瓜抗青枯病基因的甜椒,转黄瓜抗青枯病基因的马铃薯,不会引起过敏的转基因大豆,水母,基因工程的基本 操 作 程 序,苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 想一想需要做哪些工作？,普通棉花抗虫棉,获 取 目 的 基 因,制 备 重 组 DNA 分 子,转 化 受 体 细 胞,筛 选 重 组 细 胞,基因工程的基本操作程序,实 现 功 能 表 达,学习目标：,1、简述基因工程的五步基本操作程序 2、叙述获取目的基因的方法 3、说明基因表达载体的组成及各组件的功能。 4、说明基因表达载体构建过程。 5、说出三类
2、受体细胞的转导方法。,1、人工合成,(基因比较小，序列已知),获取目的基因,DNA合成仪,目的基因的获取方法,1）反转录法：,蛋白质,mRNA,DNA,DNA,2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ：,2、从基因文库中获取,(基因序列未知),目的基因的获取,3、利用PCR技术扩增目的基因,聚合酶链式反应,目的基因的获取,3、利用PCR技术扩增目的基因,聚合酶链式反应,目的基因的获取,作为基因表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？,制 备 重 组 DNA 分 子（基因表达载体的构建）,基因工程的核心,基因表达载体的组成：,运载体,目的基因,限制酶切,同一种,黏性末端,黏性末端,DN
3、A连接酶,重组DNA分子,基因表达载体的构建,有几种重组DNA ？,质粒,一个切口 两个黏性末端,两个切口 获得目的基因,DNA 连接酶,重组DNA分子（重组质粒）,同一种 限制酶,目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。,DNA分子,转化,目的基因进入受体细胞内，并且在 受体细胞内维持稳定和表达的过程。,转 化 受 体 细 胞,常用的受体细胞种类：,大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌、动植物细胞等,转化受体细胞,农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射技术 氯化钙法,受体细胞,植物细胞,动物细胞,原核细胞,农杆菌转化法,适用于 双子叶植物 裸子植物,适用于 单
4、子叶植物,基因枪法,花粉管通道法,适用于 被子植物,将目的基因导入动物细胞 方法：显微注射法 程序：,目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物,将目的基因导入微生物细胞 原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 方法：,用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子,实验,抗原抗体杂交法,DNA-RNA分子杂交法,DNA分子杂交法,筛 选 重 组 细 胞,实 现 功 能 表 达,(目的基因的检测与表达),个体生物学水平,抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等,归纳：基因工程的基本过程,五个步骤： 1、获取目的基因 2、制备重组DNA分子 3
5、、转化受体细胞 4、筛选重组细胞 5、实现功能表达,思维训练,1、基因工程又叫基因拼接技术。 （1）在该技术中，用人工合成方法获得目的基因的途径之一是：以目的基因转录的_为模板，_成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成_。,mRNA,双链DNA,反转录,2、在基因工程技术中，下列方法与目的基因获得无关的是 A.辐射诱变法 B.从基因文库中获取 C.反转录法 D.人工合成法,A,3、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达,C,4、
6、为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的 处，DNA连接酶作用于 处。（填“a”或“b”）,a,a,4、为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 （2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和 法。 （3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用 技术，该技术原理是 。 （4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的 _ 作探针进行分子杂交检测，又要用 _ 方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。,基因枪法（花粉管通道法）,植物组织培养,耐盐基因（目的基因）,一定浓度盐水浇灌 （移栽到盐碱地中）,植物细胞的全能性,
