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1、1,融合PCR,2,（一）融合PCR的定义,融合PCR技术( fusion PCR)采用具有互补末端的引物, 形成具有重叠链的PCR产物, 通过PCR产物重叠链的延伸, 从而将不同来源的任意DNA 片段连接起来, 此技术在不需要内切酶消化和连接酶处理的条件下实现DNA片段的体外连接, 为同源重组片段的构建提供了快速简捷的途径。,（The definition of fusion PCR）,3,（二）融合PCR的原理,（The experiment principles ）,P2、P4为具有末端互补的引物,P1、P4为两端引物,4,5,6,引物设计对连接片段进行扩增并回收将连接片段混合进行PCR
2、扩增验证,7,图（a）1：Marker、24：未融合片段、5：融合后片段 图（b）1：Marker、25：未融合片段、6：融合后片段,8,（三）融合PCR的其他应用,（The other application of fusion PCR）,基因片段的缺失,目标片段的缺失,在片段的左右两端设计末端互补的引物,进行融合,9,总结,融合PCR是一种高效体外连接目的片段和定点缺失目的基因的有效方法之一。,10,参考文献：,1李敏，杨谦.一种高效构建同源重组DNA片段的方法融合PCRJ中国生物工程杂志. 2007, 27( 8): 53 58.,11,引物设计原则1、长度：1530bp，其有效长度Ln
3、=2(G十C)十(A十T)一般不大于38，否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度)，从而降低产物的特异性。2、G十c含量：应在40%一60%之间，PCR扩增中的复性温度一般是较低Tm值引物的Tm值减去510度。引物长度小于20时，其Tm恒等于4(G十C)十2(A十T)。3、碱基分布的随机性：应避免连续出现4个以上的单一碱基。尤其是不应在其3端出现超过3个的连续G或C，否则会使引物在G十C富集序列区错误引发。4、引物自身：不能含有自身互补序列，否则会形成发夹样二级结构。5、引物之间：两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体，尤应避免3端的互补重叠。6、上下游引物的互补性：一个引物的3末端序列不允许结合到另一个引物的任何位点上。7、3末端：如果可能的话，每个引物的3末端碱基应为G或C。8、引物应当超出限制性内切酶识别位点至少3个核苷酸。,
