《培养基验收作业指导书删减版[借鉴]》由会员分享，可在线阅读，更多相关《培养基验收作业指导书删减版[借鉴]（11页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、培养基质量控制作业指导书 1、目的： 为加强我微生物实验室的工作管理，保证实验室的检测质量，特制定此作业指导书； 2、范围： 本规范适用于实验室微生物检测中所使用培养基的质量控制。 3、职责： 检验人员：按照本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制，确保培养基符合相关标准的要 求。 科室负责人：负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制。 4、控制措施： 41 培养基的购置和验收 4.1.1 培养基的购置 试剂管理员在接到批准的采购信息后，从合格供应商中选择厂商采购，同时要求厂商提供 每批培养基的批号、使用前的pH值、储藏信息、有效期、性能评价记录（包括测试菌株、技术 数据清单、质控证书
2、及必要的安全危害数据）。 4.1.2 培养基的验收 购买培养基到货后，由试剂管理员和微生物检测人员共同核对生产企业提供的资料、培养 基名称、规格数量、外观特征、 批号、保质期是否符合要求。 同时应填写“培养基验收检查记录单” 验收符合要求后，交由检测人员接受保管，填写培养基入库记录和建立试剂台帐。 42 培养基的储存 干粉培养基应保存在阴凉干燥处，要避免阳光直射；开瓶后的干粉培养基易吸湿，应注意 防潮并在有效期或6 个月内用完。应每月对储存中的培养基进行常规检查，如容器密闭性复查、 首次开封日期、内容物的感官检查，如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再 使用。开封的脱水培养基，每次
3、使用前应对其质量进行检查，通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽 变化等判断培养基的质量变化。若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用。即用性培养基 按照产品标识要求进行储存。 43 培养基的使用 4.3.1 配制培养基用水和玻璃器皿 培养基制备用水应使用电阻率不小于30 万cm的蒸馏水或与其同质的水，每周检测电阻 率，每三个月检测一次重金属离子含量。制备培养基所用的玻璃器皿（如吸管、试管、烧杯等）新的 玻璃器皿（首次使用）和再次使用的玻璃器皿按规定方法洗涤、干燥 4.3.2 称量 称量时要用专用的角匙，避免交叉污染而影响检验结果；干粉培养基易吸潮，如房间环境 湿度较大时，应提高称
4、量速度，完毕后及时盖紧瓶盖。 4.3.3 复水 复水时应注意以下事项： a）不得用铜锅或铁锅，以防有离子混入培养基中，影响微生物的生长； b）容器的大小需大于复水后培养基总体积的2 倍以上，避免在加热溶解过程中， 培养基溢 出； c）加热培养基时一定要进行搅拌，特别是琼脂类培养基； d）为避免烧焦和沸腾溢出，对于少量的培养基最好使用沸水浴进行加热； e）含有琼脂粉的培养基，在加热溶解之前可以浸泡数分钟； f ） 对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热，最多只能加热两次， 第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去； g）烧糊的培养基营养物质被破坏，并可产生有毒物质，如发现焦化，或
5、未溶解均匀前培养 基有溢出，该培养基即不能使用，应重新制备。 4.3.4 灭菌 培养基采用高压蒸汽灭菌（湿热灭菌），通常是12115min，含糖或特殊培养基，按 照国家标准或生产商提供的说明灭菌。已配制好的培养基必须在15 分钟内灭菌，避免微生物 生长繁殖而消耗养分，改变培养基的酸碱度。 为避免高温破坏培养基的营养成分，降低琼脂的凝胶强度， 必须严格控制灭菌温度和时间， 不可重复灭菌。 4.3.5 pH测定 在初次使用每批培养基时，均需随同检测配制一个测试培养基，在灭菌或消毒后应在25 温度下采用精密PH 试纸测试 PH值，并判断是否符合要求；使用过程中，如果需要调整培养基 的 pH ，应用
6、1mol/LNaOH或 lmol/LHCL 调整，注意不可反复调 pH ，否则会影响培养基的渗透压。 配制好的培养基标识和保存 灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度，避免长时间保存在灭菌锅内，造成过度灭菌， 影响培养基的营养成分或选择性效果。同时填写配制记录。内容：名称、配制量、配方（比）、操作中 的重要参数（时间、压力、温度）、配制日期、配制者、截止使用日期。在每个已灭菌的培养基容器外做好 标记，注明名称、配制日期、使用期限和配制人。 培养基保存注意事项： 1）环境条件：各种培养基均应在洁净的普通冰箱内保存，以2-8左右为宜，不得冻结。 2）保存时限 : 基础培养基应在30 天内用完。鉴别培
7、养基应在21 天内用完。选择性分离鉴别培养基制成平 板后当日用完, 置保鲜膜 ( 袋) 密闭保存期限可延长至一周。从外单位购买的培养基保存时限按照产品标注的 时限执行 . 44 培养基批号的的管理 培养基的批号由6 位阿拉伯数字组成，批号为年、月、日，各取2 位，年份取后2位，月和日不足2 位时， 分别在数字前加0，表明是本日配制的批号。如2004 年 6 月 4 日配制的培养基，批号为040604。 质量检查 购置的同一批次培养基其质量检查应能通过无菌检查（制备好的培养基经3035培养 48 小时，真菌培养 基经 2025培养 72 小时候后， 应无菌生长） 、新购的不同批次的商品化培养基在
8、使用前应进行培养基性能 测试，经检查合格的该批次培养基方准许使用，否则不准使用，做好检查记录。成品培养培养基的质量控 制应包括物理指标和微生物指标的测试，根据测试结果及时填写“实验室培养基质量控制性能测试记录及评 估报告 培养基的性能测试 新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，包括物理指标和微生物指标的测试， 根据测试结果及时填写“实验室培养基质量控制性能测试记录及评估报告，菌株的选择参考SN/T 培 养基制备指南第 2 部分：培养基性能测试实用指南。 451 物理指标控制 1） 测试 20 25的 pH值 2）琼脂层厚度；色泽；透明度和（或）是否存在肉眼可见杂质； 452
9、 微生物污染的控制 从每批制备好的培养基中选取至少一个（或1% ）平板或试管，置于35-37 或按特定标准中规定的温度 培养 48h 应无菌生长，真菌培养基经2025培养 72 小时候后，应无菌生长。 45 3 微生物学指标控制 可根据要求选用定量方法、半定量方法或定性方法（详见表1- 表）对培养基性能进行测试，具体操作方 法如下： （1）生长率 将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中，每种培养基上菌株的生长率应达规 定的最低限值。 1）定量方法 生长率 PR的计算： PR = NS/NO NS：从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。 N0：从一个或多个规定的参考培养
10、基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应100cfu ） 。 要求：非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为，该类培养基应易于目标菌生长；选择性培养基上目 标菌的生长率最低应为；每平板（或每试管）的接种水平为10CFU 100CFU 。 2） 半定量方法 半定量方法采用生态测量技术在平板上划线，平板板连续划线区域得分的总和即为生长指数G ，G 值不 应超过标准规定的允许范围。 3） 定性方法 定性方法采用划线法观察。 选择性 将浓度为10 4CFU/mL 106CFU/mL的非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中，培养基 的选择性应达到规定值。 定量方法 选择因子SF： S F = D
11、O - DS DO：能在参考培养基上生长至少10 个菌落的最高稀释度 DS：能在测试培养基上显示生长的最高稀释度 要求：非目标菌在选择性培养基上的SF至少为 2 ；半定量和定量法中，非目标菌应部分或全部被抑制。 生理生化特性（选择性和特异性） 规定培养基的基本特性，使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特性（菌落形态、大 小等）和非目标菌的被抑制程度进行测试。 （2）性能评价和结果解释 按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定，则该批培养基品质优良；若只有物理指标和微生物指 标符合规定，则该批培养基可被接收。 表 1 计数用选择性培养基 培养基用途培养条件测试菌株 参考培 养基
12、控制 方法 判定标准特征反应 Baird- Parker S 生长率 37 24-48h 金 黄 色 葡 萄 球 菌 ATCC6538/25923 TSA定量PR 黑色 / 灰色菌落，周围为 一混浊带，其外有透明带 选择性3748h 大肠杆菌 ATCC25922/8739 定性全部抑制 特异性 37 24-48h 表 皮 葡 萄 球 菌 ATCC12228 定性 黑色 / 灰色菌落，周围为 一混浊带，其外无透明带 MYP S 生长率 30 24-48h 腊 样 芽 胞 杆 菌 ATCC11778 TSA定量PR具沉淀带的粉色菌落 选择性3748h 大肠杆菌 ATCC25922 定性全部抑制 特
13、异性3748h 枯 草 芽 胞 杆 菌 ATCC6633 定性不具沉淀带的粉色菌落 培养基用途培养条件测试菌株 参考培 养基 控制 方法 判定标准特征反应 VRBG（结晶 紫 中 性 红 胆 盐 葡 萄 糖琼脂） S 生长率3724h 大肠杆菌 ATCC25922/8739 TSA定量PR 带有或不带沉淀带的粉 红色或红色菌落鼠 伤 寒 沙 门 菌 ATCC14028 选择性3720h 粪链球菌 ATCC29212/19433 定性全部抑制 VRBL（紫红 胆汁乳糖） S 生长率3020h 大肠杆菌 ATCC25922/8739 TSA定量PR 带有或不带沉淀带的淡 紫色菌落 选择性3020h
14、 粪链球菌 ATCC29212/19433 定性全部抑制 特异性3020h 铜 绿 假 单 胞 菌 ATCC27853 定性-无色至浅棕色菌落 CT-SMAC （ 改 良 山 梨 醇 麦 康 凯琼脂） S 生长率3724h 大肠杆菌O157：H7 ATCC43894/43895 TSA定量PR 透明菌落，表面淡黄棕 色，菌落直径约1mm 选择性3724h 金 黄 色 葡 萄 球 菌 ATCC6538/25923 定性全部抑制 特异性3724h 大肠杆菌 ATCC11775/25922 定性粉色菌落 BGBLB （煌 绿 乳 糖 胆 盐肉汤） L 生长率 30 24-48h 大肠杆菌 ATCC2
15、5922/8739 TSA 半定 量 浊度2+， 导 管1/3 产气 产气并浑浊 弗氏柠檬酸杆菌 ATCC25922/8739 选择性 粪链球菌 ATCC29212/19433 定性不生长 EC L 生长率 44 24 48h 大肠杆菌 ATCC25922 半定 量 浊度2+， 导气管 1/3 产气 产气并浑浊 选择性 44 24 48h 铜 绿 假 单 胞 菌 ATCC27853 b 定性不生长 EC-MUG/ LS-MUG L 生长率 44 24 48h 大肠杆菌 ATCC25922 半定 量 浊度2+， 导气管 1/3 产气 产气并浑浊，产生荧光 选择性 44 24 48h 铜 绿 假
16、单 胞 菌 ATCC27853 b 定性不生长 乳 糖 胆 盐 发酵培养 L 生长率3724h 大肠杆菌 ATCC25922 半定 量 导气管 1/3 产气 产气并变黄色 选择性3724h 鼠 伤 寒 沙 门 菌 ATCC14028 定性不产气、仍为紫色 LST（月桂 生长率3724h 大肠杆菌 半定 导气管 1/3 表 2 计数用非选择性培养基 培养基用途 培 养 条 件 测试菌株 参考培 养基 控 制 方法 判定标准特征反应 PCA （平 板 计 数 琼脂） S 生长率3072h 大肠杆菌 ATCC25922/8739 TSA定量PR 金黄色葡萄球菌 ATCC6538 枯 草 芽 孢 杆 菌 ATCC6633 表 3 选择性增菌培养基 培养基用途 培 养 条 件 测试菌株 控 制 方 法 判定标准特征反应 EE L 生长率3724h 大肠杆菌 ATCC25922/8739 半定量 VRBG上 10CFU 粉 红 至 红 色 菌 落，有或没有沉 淀带 鼠 伤 寒 沙 门 菌 ATCC14028 选择性 粪肠球菌 AT
