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1、1,CHO细胞培养流程简介,2,一 悬浮培养特点（suspension culture),非贴壁依赖型细胞的一种培养方式 细胞悬浮于培养基中生长或者维持 某些贴壁依赖型细胞经过适应和选择后也可用此方法培养 使用振荡或者转动装置使细胞始终处于悬浮状态,3,二 CHO细胞大规模悬浮培养工艺流程,细胞株 摇瓶 WAVE或者种子罐 收货细胞液 反应器培养,4,1 细胞复苏,将水浴锅温度调至37 从液氮罐中取出冻存管，用镊子夹住迅速放入水浴锅中晃动，直至完全溶解后将冻存管表面消毒转移至超净工作台内进行操作 将细胞悬液转移至15ml离心管内，加入约10ml培养液，轻轻吹打混匀 将细胞悬液经800-1000
2、rpm离心5分钟，弃去上清液 向细胞沉淀加入10ml培养液，吹打均匀后将细胞悬液转移至摇瓶内，加入适量培养液，开始培养,5,细胞复苏注意事项,注意全程无菌操作 溶解冻存细胞时速度一定要快，避免缓慢升温细胞内形成冰晶，对细胞造成损伤 计算合适的接种密度，一般CHO细胞培养的接种密度范围在3.0-6.0*10E5个/ml 注意安全：取出冻存管时防止冻伤，同时注意有无液氮渗透进入冻存管，防止液氮迅速气化导致冻存管爆炸造成人员危险,6,2 摇瓶细胞传代,摇瓶细胞培养2-3天后，细胞密度增高，营养物逐渐耗尽，需要对细胞进行扩培 根据细胞密度计算扩培体积 当达到反应器扩培接种细胞数量要求后，停止摇瓶培养，
3、接种至反应器进行扩培,7,3 反应器扩培,在超净台内将摇瓶细胞合并至接种瓶内 用无菌焊接机将接种瓶管路与反应器管路无菌焊接，将细胞液打入反应器进行扩培 当反应器内细胞密度达到要求后，接种至下一级反应器开始生产阶段培养,8,4 反应器生产阶段培养,取样 补碱 补料 补糖 收获,9,取样,取样瓶灭菌 将取样瓶连接至反应器取样口，开始管路灭菌 灭菌完成后等待管路冷却 开始取样 取样完成后用纯蒸汽冲洗取样管路 将所取细胞液测定细胞密度、活力、pH值等参数,10,补碱、补糖、补料,当反应器内pH值低于6.8左右时，需要进行补碱 当反应器内糖含量低于2g/L时，需要进行补糖 当反应器内营养物逐渐耗尽，需要根据工艺进行补料,11,收获细胞液,在培养末期，细胞密度及活力都开始下降，此时应该进行细胞液的收获，收获时保证细胞活力高于60% 预先准备好深层过滤膜包及管路的安装和保压 将反应器降温至18左右，连接深层过滤夹具进口，开始截留细胞，收获细胞液 将细胞液转入收集罐内或者与纯化进行交接,12,谢谢,
