Agilent 1260 Infinity Ⅱ高效液相色谱仪操作规程

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1、 操作规程 第 1/32 页 文件编号：XXX 版本号：00 Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱仪操作规程 颁发部门：质量保证部 分发部门：质量保证部 质量控制部 验证部 储运部 注射剂部 固体制剂部 原料生产部 工艺设备部 设备部 物资供应科 技术中心 人力资源部 企划运营管理部 营销中心 行政部 财务部 IT 管理科 部门/职务 姓名 签名 日期 部门/职务 姓名 签名 日期 执行日期 年 月 日 一、目的 建立仪器使用的标准操作规程，规范仪器的使用，保证检验结果的可靠性。 二、范围 适用于 Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱仪的使用、维护保养。

2、 三、职责 质量控制部： 1、负责起草/修订、审核该操作规程。 操作规程 第 2/32 页 文件编号：XXX 版本号：00 Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱仪操作规程 2、负责执行此操作规程。 四、依据 1、 Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱仪说明书 五、内容 1.仪器组成 1.1 原理 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离 测定的色谱方法。 注入的供试品， 由流动相带入柱内， 各组分在柱内被分离， 并进入检测器检测， 由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。 1.2 结构 高效液相色谱仪由输液泵

3、（脱气机一体式） 、自动进样器、柱温箱、检测器以及数据处理系统组成。 输液泵 （脱气机一体式） 自动进样器 柱温箱 检测器 溶剂柜 电源 操作规程 第 3/32 页 文件编号：XXX 版本号：00 Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱仪操作规程 2.操作方法 2.1 使用前准备 （1） 每天更换水性溶剂，避免藻类生长，可能会堵住脱气机或过滤器。选择使用缓冲液或水 相的低通道（A 和/或 D） ，选择使用有机相（B 和/或 C 通道） 。使用前以 2.53ml/min 的 流速使用溶剂清洗每个通道 5min。使用应用程序组合将系统平衡 15min。 （2）换流动相：须将滤头用

4、使用的流动相冲洗一下后放入溶剂瓶中。A、D 瓶放水相，B、C 瓶 放有机相。玻璃滤头应轻拿轻放，可用稀硝酸浸泡清洁，禁止超声清洗。 （3）安装色谱柱：根据需要，选定所需型号的色谱柱，更换至柱温箱。安装时注意系统流动相 的流向和柱子所标示的流动相的流向应保持一致，本系统的流向是从左向右；在连接接口 时尽量将接头插入后再旋螺丝，以免滑丝漏液。 2.2 开机/使用/关机 （1）打开电脑主机和显示器电源，待电脑启动完毕后，从下往上依次打开 Agilent 1260 infinity各模块电源（输液泵（脱气机一体式） 、自动进样器、柱温箱、检测器） 。关机 时由上往下关闭各模块电源。 （2）电脑开机 5

5、 分钟后双击【CP 控制面板】图标，输入登录名和密码，仪器自检，进入控制 面板。控制面板左侧由【仪器】 、 【项目】和【管理】三个模块组成，每个模块上方有相关 的菜单栏。当出现下图警告时应重启计算机，等待 5 分钟后（其数据库加载时间）再登录 【CP 控制面板】即可解除警告。 （3）仪器模块：模块上方有菜单栏，分别是【仪器和位置】 、 【属性】 、 【操作】及【选定行】 。 选择 【仪器】 Agilent1260 并点击 【启动】 ， 将自动启动工作站 【Acquisition OpenLAB CDS】 。 关闭仪器时，选择【仪器】Agilent 1260 并点击【关闭连接】 。 操作规程 第

6、 4/32 页 文件编号：XXX 版本号：00 Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱仪操作规程 （4）项目模块：模块上方有菜单栏，分别是【项目和组】 、 【属性】及【Data Analysis】 。选择 【项目】创建项目，并对填写所创建的项目属性（名称、文件夹路径及描述）及 CDS 设置 （文件位置、项目选项、审计跟踪设置等信息） 。其中审计跟踪设置下一旦启用自动启用 审计跟踪项，将无法关闭。 （5）管理模块：模块左边有菜单栏，分别是【我的设置】 、 【本地配置】 、 【系统配置】 、 【安全策 略】 、【用户】 、【组】 、【角色】 、【系统活动日志】 、【许可证】 、【

7、仪器控制器】 、【诊断】 、【Content Management】 、 【仪器选项及管理报告】 。 操作规程 第 5/32 页 文件编号：XXX 版本号：00 Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱仪操作规程 点击相应的项目时，上方将出现不同的子菜单供用户设置，此权限供仪器管理员编辑。 （6）选择Agilent 1260点击【启动】后将自动跳转至工作站【Acquisition OpenLAB CDS】 页面，如下图所示： （7）最上方是菜单栏， 【状态】 、 【方法】 、 【单个样品】及【序列】四大模块。 A. 【状态】模块 1) 最左边为仪器（Agilent 1260）的

8、色标状态（具体颜色释义见下图） ，中间含有【运行队 列】 、 【仪器状态】窗口，下方含有【在线信号】窗口。色标状态为绿色才能正常使用。 操作规程 第 6/32 页 文件编号：XXX 版本号：00 Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱仪操作规程 2) 【运行队列】将显示序列状态等信息。 3) 【仪器状态】窗含有进样器、四元泵、柱温箱和VWD四个图像窗口，并有相关色 标状态。状态窗口能实时监测仪器各模块、方法的详细参数等。 4) 【在线信号】显示在线模块下的状态。 B. 【方法】模块 此模块含有常规项和仪器设置项，仪器设置项是我们常用于新建/修改方法，仪器设置 包含【四元泵】

9、、 【进样器】 、 【柱温箱】和【VWD】 。根据需要在仪器设置项下设置相应的 检验方法。 1) 【四元泵】的设置 在流量中输入流量。 在溶剂中输入各流动相的比例。默认 A 通道为 100%，如需用到两个通道或以上的，只 要设置除 A 通道外的比例即可。如需用到梯度洗脱，选择对应通道后在右侧窗口点击添 操作规程 第 7/32 页 文件编号：XXX 版本号：00 Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱仪操作规程 加行并编辑所需的方法。通道 A、D 为缓冲液或水相，B、C 为有机相通道。 在压力限值中输入仪器的压力上下限（0bar600bar） ，其中压力的上限不能高于柱 子的最

10、大承受压力，以保护柱子。我们一般选择 400bar。 在停止时间中输入仪器停止采集数据的时间。后运行时间中根据需要设置，一般设 置为关闭。 2) 进样器的设置 在进样中输入进样体积（进样量范围 0L100L） 。 在针清洗中选择启用洗针，可选择冲洗端口或清洗瓶。选择冲洗端口洗针，时 间可设置，一般为 3s。选择清洗瓶洗针，需输入位置和重复次数。位置填写应遵循 （P-的格式指定孔位置， 例如 P1-A1。 和 的值取决于多孔板类型）。重复次数最多可以指定 10 个重复清洗。 在停止时间中选择与泵一致/无限制。 后运行时间中根据需要设置， 一般设置为关 闭。 在右边窗口辅助功能及高通量模块根据实际

11、需要设置相关参数，一般设置默认值。 操作规程 第 8/32 页 文件编号：XXX 版本号：00 Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱仪操作规程 3) 柱温箱的设置 在温度-左侧：选择需要的温度，右侧:选择组合，即表示左右两侧温度一致。 在阀位置/色谱柱中选择使用当前色谱柱/位置，其他可不选择。 在停止时间中选择与泵/进样器一致，在后运行时间中选择关闭。 在右侧窗口中的高级设置一般选择默认值。 4) VWD 的设置 在信号中选择需要的参数编辑，本机含有双波长功能，按需选择。 单波长：可以将用于分析的波长设置在 190 和 600 nm 之间。设置新波长时，检测器的 操作规程

12、第 9/32 页 文件编号：XXX 版本号：00 Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱仪操作规程 基线将自动调整。 双波长： 可以将用于分析的“信号 A”和“信号 B” 波长设置在 190 和 600 nm 之间。 “信号 A” 和“信号 B” 相差不得超过 150 nm。 在峰宽中选择需要的频率，此参数影响色谱图的数据采集频率，采集频率越高噪音可 能会越大，反之则小。 在停止时间中选择与泵/进样器一致，在后运行时间中选择关闭。 以上四个模块（ 【四元泵】 、 【进样器】 、 【柱温箱】和【VWD】 ）设置完毕后须保存或另存 方法，在菜单栏里点击保存或另存，选择路径后保存，

13、随后弹出更改原因， 输入原因后按确定，完成方法创建/修改。 C. 【单个样品】模块 在单个样品分析模块中输入样品名称，选择采集方法、处理方法、结果路径， 操作规程 第 10/32 页 文件编号：XXX 版本号：00 Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱仪操作规程 输入结果名称。 在自动进样器-进样源选择进样位置。如果有多个自动进样器，会在该下拉菜单中列出。 根据不同的仪器配置，会有不同的进样源。当进样源不受 OpenLAB CDS 控制时，请选择外部。 需要空白运行（通过自动进样器）时，请选择无进样/仪器空白。 在进样量中输入要进样的量（微升） 。 在样品瓶中输入将要进样的

14、样品瓶位置 （样品位置格式按进样器设置要求） 。 此项仅在用 户将自动进样器选为其进样源时有效。 样品准备方法用于定量分析,一般我们不设置。 样品含量：用于进样的样品典型含量。 ISTD 含量：使用内标报告计算时添加到样品中的内标含量。 乘积因子：比例因子用于在报告结果前计算结果。样品准备期间补偿样品体积更改时经 常使用乘积因子。 稀释因子：比例因子用于在报告结果前计算结果。样品准备期间补偿样品体积更改时经 常使用稀释因子。 目标：用于指定样品纯度计算的目标分子量的公式或分子量（仅限质谱） 。 校正级别： 用于在校正曲线上绘制校正。 如要将单个样品标记为校正样品， 请选择校正。 输入一个数字来

15、为校正样品提供级别。 操作规程 第 11/32 页 文件编号：XXX 版本号：00 Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱仪操作规程 以上单个样品信息填写完后即可点击【运行】 ，此单个样品将运行至右侧窗口运行队列 中，左下方窗口为在线信号，右下方为谱图。 D. 【序列】模块 此模块含有常规项和进样项，我们常用到进样项。 在序列表中根据需要输入相应的信息。其中样品瓶、样品类型、采集方法、进样 次数、体积、进样源、样品名称为必须填写的内容。当需要多个样品时，可点击 添加行，同理按要求填写相关信息。当输入的信息与方法参数有偏差时，以当前序 列参数运行，故建立序列时应当仔细检查相关重要参数是否与方法一致。 在结果路径中选择结果存放的路径。 在结果名称中输入结果名称。 当以上序列完成编辑后，应点击保存，弹出保存序列窗口，输入序列名称后保存， 操作规程 第 12/32 页 文件编号：XXX 版本号：00 Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱仪操作规程 并填写审计追踪的更改原因确定后即可完成新建序列。 保存后的序列可点击右下角的 【运行】 ， 此序列将被运行， 并在状态栏中显示 “正在采集”