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1、ABO和Rh (D) 血型鉴定操作规程（盐水法）一目的 规范ABO/Rh (D) 血型鉴定的操作流程；保证临床用血的安全性及有效性。二职责 血库技术人员负责ABO和Rh (D) 血型鉴定。三适用范围 适用于血库ABO和Rh（D）血型鉴定血标本。四所需材料和设备1.材料 抗-A、抗-B、抗-D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞、生理盐水、小试管、滴管、患者血标本。2.设备 普通离心机、显微镜、血型血清学专用离心机。五操作步骤 1.将标本2000r/分钟离心2分钟，使标本血浆/血清与红细胞分离，并吸取红细胞配制3%悬液。 2.取小试管3支，分别标明-A、抗-B、抗-D，用滴管分别加抗-A、抗-B、
2、抗-D试剂各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者3%红细胞悬液1滴，混匀。 3.另取小试管3支，分别标明A、B、O细胞，用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入3% A、B、O型试剂红细胞悬液1滴，混匀。 4.以1000r/分钟离心1分钟。5.将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以显微镜检查。6. ABO血型结果判定（见下表）：ABO血型结果判断分型试剂+受检者红细胞（正定型） 受检者血清+试剂红细胞（反定型） 抗-A 抗-B A细胞 B细胞 O细胞 血型AB注：“” 凝集；“” 不凝集7. Rh
3、（D）血型判定： 红细胞与抗-D试剂凝集为Rh (D) 阳性无凝集为Rh阴性。 8.凝集强度判断标准：4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰；2+ 红细胞凝块分散成许多小块，背景可见到游离红细胞；1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞； 镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞；混合外观凝集（Mixed Field, MF）是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布； （阴性） 镜下未见凝集，红细胞均匀分布。六注意事项 1.单克隆抗体试剂和试剂细胞（除谱细胞外）每次使用前必须与相对应的红细胞和血清做阳性、阴性对照，以检测其活性。
4、2.观察结果时既要看有无凝集或溶血现象，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或Cis（顺式）AB的发现。 3.人红细胞ABO血型检验结果是根据红细胞的抗原和血清/血浆中的抗体反应结果所决定，因此正反定型的结果应该一致。正反定型起到一个互相验证和质控的作用。只有正反定型结果相符才能正确判定ABO血型。 4.反定型对ABO亚型的发现特别有帮助。原因是亚型患者细胞上A或B 抗原很弱，通过正反定型易于发现二者结果不一致，从而引起警惕。 5.如果正反定型不一致，则需进一步鉴定。可在正定型试验中增加抗-A1、抗-AB及抗-H；反定型试验中增加A2、O及自身细胞。正定型试验中的抗-AB是用来确认弱A和
5、弱B抗原，抗-A1用来鉴定A亚型，抗-H用于鉴定亚型及孟买型；反定型试验中的A2细胞用于鉴定A2亚型，O型细胞用于鉴定是否存在ABO系统以外的同种抗体影响型，自身对照用于鉴定是否存在自身抗体影响定型。如果是O型细胞或自身对照为阳性，则定型结果不可靠，必须进一步进行血型鉴定。 6.ABO正反定型不一致的原因： （1） 新生儿尚未形成ABO同种抗体，所以三个月内的新生儿只要求做正定型确定ABO血型。（2） 漏加试剂，试剂污染或失效、血标本和试剂搞错等，均可造成假阴性、假阳性结果。（3） 器材不洁可产生假阳性结果。（4） 分型血清效价太低，亲和力不强等均可使凝集反应强度减弱，易误定血型。（5） 红细
6、胞悬液过浓或过淡，导致抗原抗体比例不适当，出现前带或后带现象，易误判为假阴性。（6） 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或某些恶性肿瘤）以及类B或CisAB等，均可使凝集反应强度减弱。（7） 受检者血清蛋白紊乱（如巨球蛋白血症）或实验温度过高，常引起细胞呈缗线状排列。（8）受检者血清中缺乏应有的抗-A或抗-B，如丙种球蛋白缺乏症，可引起正、反定型不符。（9）各种原因引起的红细胞溶血，误判为不凝集；部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体，或者患者血清中血型物质过多，中和了相应抗体，可导致假阴性结果。（10）由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定 型不符的
7、原因。近期曾输过异型血，使患者血液标本成为不同型别的红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝聚”现象。（11）嵌合体血型体内有两群红细胞，定型时显示“混合外观凝集”现象。（12）获得性类B 由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B”的活性。（13）药物等因素药物、右旋糖及静脉注射某些造影剂聚集而类似凝集。（14）血清中有意外抗体，如自身抗-I，常干扰定型。（15）老年人血清中抗体水平大幅度下降，影响反定型结果。7.如果无法找到正反定型不一致的原因，患者又需要紧急输血，则只能给患者输注Rh（D）同型的O型红细胞（O型红细胞须正反定型相符），同时可请中心血站协助鉴定患者血型。8.旧性血标本，红细胞要
8、用生理盐水洗涤2至3次，配制悬液再行鉴定。9.含有冷凝集素的患者血清，可采用37生理盐水洗涤3次，如果37还显弱凝集，再用42或45生理盐水洗涤1次，再进行血型鉴定。 10.自身免疫性温抗体产生的非特异性凝集患者，采用递增温度223745的生理盐水洗涤红细胞后作血型鉴定，或者采用放散的方法将红细胞上吸附的抗体释放后再进行血型鉴定。11.Rh（D）血型鉴定原则：对受血者常规只测Rh（D）抗原，而对献血者不仅要检查Rh（D）抗原，在初筛为阴性的情况下必须进一步确定是否为弱D，即旧称Du； Rh（D）阴性及弱D的受血者原则上应提供Rh（D）阴性血，不得使用Rh（D）阳性及弱D的血。弱D针对受血者而言为Rh（D）阴性，而对献血者而言则为Rh（D）阳性。
