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1、第十七章 非发酵革兰阴性杆菌,是指一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧,无芽胞的革兰阴性杆菌。 特别提示:并非分类概念 只为认识方便 生物习性相似 已经形成习惯,革兰阴性杆菌,OX,+,葡萄糖O/F,葡萄糖O/F,不动杆菌属 窄食单胞菌属,不利用,洛非不动杆菌,F,O,肠杆菌科,假单胞菌属 无色杆菌属 金色杆菌属,不利用,产碱杆菌 布鲁菌属 产碱假单胞 无色杆菌,F,O,气单胞 邻单胞 弧菌属,对抗生素有天然的抗药性 非发酵菌对抗生素常呈现多重耐药现象。如铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、鲍曼不动杆菌、黄杆菌等对绝大多数抗生素耐药,铜绿假单胞菌对氨苄青霉素耐药率达100% ,甚至对第
2、三代头子孢菌素也呈现耐药,而且耐药率在逐年增加。,不发酵革兰阴性杆菌分类,假单胞菌属 (Pseudomonas) 产碱杆菌属 (Alcaligenes) 不动杆菌属 (Acinetobacter) 莫拉菌属 (Moraxella) 无色杆菌属 (Achromobacter) 金氏杆菌属 (Kingella),黄杆菌属 (Flavobacterium) 艾肯菌属 (Eikenella) 土壤杆菌属 (Agrobacterium) 黄单胞菌属 (Xanthomonas) 丛毛单胞菌属 (Comamonas),常见非发酵菌的鉴定双岐索引,假单菌属按rRNA同源性分为5群及未确定rRNA同源群有关的种
3、。 一群需氧、不发酵葡萄糖、无芽胞,有鞭毛、氧化酶阳性的革兰阴性杆菌。 多为条件致病菌。,第一节 假单胞菌属,临床常见假单胞菌分群,rRNA1 1.荧光假单胞菌DNA同源群 铜绿假单胞菌 荧光假单胞菌 恶臭假单胞菌 2.斯氏假单胞菌DNA同源群 斯氏假单胞菌 曼多辛假单胞菌 3.产碱假单胞菌DNA同源群 产碱假单胞菌 假产碱假单胞菌,2.临床意义,分布广泛:水、土壤、空气 。 人类感染的非发酵菌中,假单胞菌属占70% -80% ,铜绿假单胞菌占55% -65 % 。 常见的有嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。 这些细菌在医院内感染中亦常见。,3.微生物特性,革兰阴性
4、、无芽胞、专性需氧 有端鞭毛或丛鞭毛 生长温度范围广,最适生长温度为35 产生各种水溶性色素:绿脓素、脓红素、荧光素、脓褐素。 对理化因素耐受性较强,对多种抗生素耐药。,药敏试验药物选择,按CLSI(NCCLS)推荐,分为4组: A组:头孢他啶,庆大霉素,美洛西林,替卡西林,哌拉西林。 B组: 头孢吡肟,头孢哌酮,氨曲南,亚胺培南,阿米卡星,妥布霉素,环丙沙星。 C组:头孢噻肟,头孢曲松,氯霉素 D组或U 组:羧苄西林,头孢唑肟,四环素,诺氟沙星,氧氟沙星,磺胺甲基异恶唑。,在自然界分布较为广泛,适应能力强。 常引起感染:皮肤、呼吸道、泌尿道、烧伤感染等。慢性肺部感染极为常见。 菌血症、心内膜
5、炎、肺囊性纤维变。 眼部感染导致角膜穿孔而失明。,二、铜绿假单胞菌,铜绿假单胞菌的毒力因子 粘附素:粘附 结构成分 多糖似荚膜物质 毒素 内毒素:LPS 毒力因子 外毒素:A 阻止真核细胞蛋白质合成 S 干扰吞噬杀菌作用 绿脓素:具有氧化还原活性,催化超氧化物和 过氧化氢产生有毒基团 酶类 弹性蛋白酶:丝氨酸蛋白酶(Las-A) 降解弹性锌金属蛋白酶(Las-B)蛋白 磷脂酶C:分解脂质和卵磷脂,损伤组织细胞,2.生物学特性,形态与染色 为无芽胞细长的革兰氏阴性杆菌,菌体长短不一,短的呈球杆状,长的为丝状。成对排列或形成短链。无荚膜,在菌体一端有1 根鞭毛,运动活泼。革兰氏染色阴性,无抗酸性。
6、,培养特性,专性需氧菌。生长温度范围为20-42 ; 最适温度为35 ,致病性菌可在42 生长,但在4 不生长,这可与荧光假单胞菌等进行鉴别。 本菌对营养无特殊要求,在普通培养基上生长良好,在选择培养基和麦康凯琼脂、SS琼脂培养基上也能生长。,在普通琼脂平板上经18-24 小时培养,可形成圆形、边缘不整齐、扁平稍隆起、光滑温润且常呈融合状态的菌落。琼脂被染成蓝绿色或黄绿色。 在血琼脂平板上经35 培养18-24 小时,可形成大而扁平、湿润、有金属光泽、有特殊气味之灰绿色、蓝绿色的菌落,并形成透明溶血环。,生化特性,氧化酶阳性,能氧化分解葡萄糖、木糖产酸,不产气,但产生红脓素或黑脓素的菌株,以及
7、粘液型菌落的菌株可能不分解糖类。 本菌能液化明胶,分解尿素,能利用枸橼酸盐,不产生吲哚,能还原硝酸盐为亚硝盐酸,或产生氮气。,(1)分离培养与鉴定: 标本可接种于血琼脂平板培养基和选择性培养基。鉴定根据镜下特征、菌落形态、生化反应等。,3.微生物检验(检验程序),血平板上毛玻璃样,金属光泽,生姜味 可产生多种色素: 荧光素与绿脓素,(2)抗原检测:血清学分型、噬菌体分型。 (3)核酸检测:DNA内切酶分析、质粒指纹图谱分析、 PCR指纹图谱分析、脉冲场凝胶电泳分析(PFGE )、基因芯片、PCR技术、16SrDNA鉴定技术等。,检验结果报告与分析,诊断要与临床表现、标本来源相结合。 初代敏感的
8、菌株在治疗34天后可能发生耐药。因此治疗过程中,34天后重复药敏测试。 粒细胞减少的的病人铜绿假单胞菌感染,要用最大剂量的抗菌药物。 产粘液型铜绿假单胞菌所致感染治疗十分困难,应特别提示临床。,产酶:金属酶,OXA酶。 外膜蛋白的改变(为主要机制):膜孔蛋白突变,阻止药物由外膜进入胞内。 主动外排泵机制:对碳青霉烯类、喹诺酮类。,铜绿假单胞菌耐药机制,两菌均人兽共患病原菌。 (马、驴、骡、猫、狗等) 人类感染是经伤口、粘膜、呼吸道。 急性患者可有高热、衰竭等全身症状。 肺鼻疽病 、皮肤鼻疽病、内脏脓肿、菌血症、脓毒血症 。,临床意义,生物学特性,革兰阴性杆菌 无芽胞、无荚膜 伪马勒鼻伯克霍尔德
9、菌一端有丛鞭毛(14 根), 4不能生长 马勒鼻伯克霍尔德菌无鞭毛无动力,42 不生长 不产生绿脓素、荧光素。,微生物检验,分离培养与鉴定 需氧菌 生长温度35 普通培养基、血琼脂、麦康凯 生化鉴定 荧光直接法染色镜检,可快速诊断,可存在于正常人皮肤、呼吸道、泌尿道。自然界分布广泛水、土壤、灰尘等。 重要的条件致病菌。 在非发酵菌的感染中,鲍曼不动杆菌仅次于铜绿假单胞菌,位列第二。 近年呈明显上升趋势,尤其是泛耐药菌株的出现。,第二节 不动杆菌属,生物学特性,革兰阴性杆菌,多为球杆状或球状,常见成对排列染成阳性或阴阳不定,误认为球菌。 无芽胞,无鞭毛。 专性需氧菌。生长温度为35 普通培养基,
10、麦康凯、血平板均生长。 氧化酶阴性,动力阴性,硝酸盐试验阴性。,微生物检验(检验程序),血平板:菌落圆形、灰白色、光滑、边缘整齐、直径23mm,而洛菲不动杆菌菌落小,直径为11.5mm。,单凭生化反应鉴定十分困难,简易方法根据分解糖与否分为两大类。 能氧化分解葡萄糖、不溶血:鲍曼不动杆菌。 不氧化分解葡萄糖: 溶血:溶血不动杆菌。 不溶血:洛菲不动杆菌。 临床绝大多数是鲍曼不动杆菌,其余少见。,药物敏感试验及结果解释,根据CLSI规定不动杆菌可以用Kirby-Bauer法做药敏试验。 不动杆菌耐药性强。对全部氨基青霉素、一、二代头孢菌素和一代喹诺酮类抗生素天然耐药。 可选用:SXT、TZP、C
11、IP、LEV、DO、CT、MNO等。 亚胺培南敏感性好,但容易快速形成耐药。 替加环素(老虎素),嗜麦芽窄食单胞菌是重要的条件致病菌。 呼吸道、泌尿道、伤口等部位感染,菌血症及心内膜炎。 很常见:在不发酵菌引起的感染中,仅次于铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌,居临床分离阳性率的第三位。,第三节 嗜麦芽窄食单胞菌,生物学特性,革兰阴性,端鞭毛,(18)根 有动力、无芽胞、无荚膜 生长温度为35,4不生长 营养要求低,在血琼脂、普通培养基生长良好。 菌落中等大小、圆形、光滑、湿润、产生不溶血的黄色色素或草绿色。有淡淡的氨味。,在血平板上孵育48小时以上,菌落中心有变透明的趋势,称之为“猫眼”现象,生化鉴
12、定: 氧化酶阴性 有动力 液化明胶 水解七叶苷 赖氨酸脱羧酶阳性 氧化分解麦芽糖 氧化分解葡萄糖,氧化酶试验阴性、有动力的非发酵菌的生物学特性,药物敏感试验及结果解释,治疗首选磺胺类:TMP/SMZ;喹诺酮类:环丙 氟派酸;替卡西林/棒酸 亚胺培南 (泰能)天然耐药。 药敏试验纸片法仅有三种抗生素:左氧氟沙星、米诺环素、复方磺胺有折点。其他药敏试验应选用肉汤、琼脂稀释法作MIC,或采用E-TEST的方法。,军团菌属(Legionella) 属于军团菌科,常见的与人类疾病有关的军团菌: 嗜肺军团菌(Legionella pneumophila) 米克戴德军团菌(L. micdadei) 长滩军团
13、菌(L. longbeachae) 杜莫夫军团菌(L. dumoffii) 波兹曼军团菌(L. bozemanii),第四节 军团菌属,临床意义,供水系统、中央空调、溶洞、雾化吸入等引起肺炎型和非肺炎型感染。 肺炎型(重症):嗜肺军团菌(LP),LP1、LP6所致。呼吸道症状、多脏器损害、头痛、畏寒、发热、消化道神经系统症状,致死率高。 非肺炎型:病情较轻的自限性疾病。 医院感染可高达23% 。 慢性心、肺、肾病变、艾滋病或接受免疫抑制剂者 易发本病,且死亡率高达45%。,生物学特性,革兰阴性杆菌 菌体呈线状 无芽胞,无荚膜,有端 鞭毛或侧鞭毛 严格需氧 触酶阳性 可液化明胶 不分解糖类 部份
14、菌株氧化酶阳性,微生物检验,临床标本:痰、气管分泌物、胸水和血液为主。 病理组织标本:必须制成悬液,再进行涂片和分离培养。 环境污染标本:应先浓缩再接种。,微生物检验,分离培养: 营养要求苛刻,生长缓慢 生长温度为35 最适pH6.77.0 初次分离必须采用(BCYE) 35天可形成12mm直径的光泽菌落,军团菌感染诊断试验比较,药敏试验及结果解释,军团菌的最终鉴定根据其生物学特性进行综合分析,包括形态、生化形状、分子生物学检验(PCR、16srRNA)、抗体检测等。 临床首选药物为红霉素。可用利福平、氨曲南。氨基糖苷类、青霉素、头孢菌素对本细菌无效。体外实验不作为临床常规检测项目。,第七节
15、莫拉菌属,引起眼结膜炎、气管炎、肺炎、脑膜炎、脑脓肿、心包炎、心内膜炎及泌尿生殖系统炎症等。,微生物特性,革兰阴性球杆菌、球菌。不易着色。 呈双短链状排列,具有多形性。,分离培养: 营养要求较高 生长温度3235 血琼脂平板上生长良好 针尖大小的圆形凸起、光滑、半透明、边缘整齐不溶血的菌落。,微生物检验,鉴定: 氧化酶阳性 触酶阳性 无动力 不分解任何糖类 吲哚试验阴性,药物敏感试验及结果解释,对青霉素类敏感。 对头孢类、四环素类、喹诺酮类、氨基糖 甙类药物均为敏感。 脑炎或脑膜炎、脑脓肿应注意药物通过血 脑屏障的问题。,常见不发酵菌的鉴定双岐索引,OF试验:O 氧化酶:+ 精氨酸水解:+ 葡萄糖酸氧化:+ 氮气:+,假单胞菌鉴定程序,铜绿假单胞菌检验程序,不动杆菌属检验程序,