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1、第二章血液一般检查,临床检验教研室,血液一般检查在临床上应用最广泛 红细胞参数检查 包括 白细胞参数检查 血小板参数检查,其中 红细胞计数(RBC)血红蛋白测定(Hb)白细胞计数(WBC)白细胞分类计数(DC)等四项应用最多,旧称为血常规。,血液一般检验的方法有两种: 手工法:用显微镜单项计数; 血液分析仪法: 多项计数,WBC 白细胞计数 LYM# 淋巴细胞绝对值 LYM 淋巴细胞百分比 MID# 中间细胞绝对值 MID 中间细胞百分比 GRAN# 中性粒细胞绝对值 GRAN 中性粒细胞百分比 RBC 红细胞计数 Hb 血红蛋白测定,HCT 血细胞比容 MCV 红细胞平均体积 MCH 红细胞
2、平均血红蛋白含量 MCHC 红细胞平均血红蛋白浓度 RDW 红细胞体积分布宽度 PLT 血小板计数 MPV 血小板平均体积 PCT 血小板比容 PDW 血小板体积分布宽度,三分群血液分析仪检测指标(21项),白细胞直方图 红细胞直方图 血小板直方图,第二节 白细胞参数检查,外周血正常白细胞类型 中性粒细胞( N)70% 粒细胞 嗜酸性粒细胞( E) 嗜碱性粒细(B) 单核细胞(M) 淋巴细胞(L)30%,白细胞分三类五种,p42,第二节 白细胞参数检查,原始粒细胞 晚幼粒 早幼粒细胞 分裂池 杆状核 成熟池 中幼粒细胞 分叶核细胞 骨髓贮存池 进入外周血的粒细胞 50 50 在血循环中 粘附于
3、小静脉和毛细血管壁上 循环池粒细胞 边缘池粒细胞 它们之间可迅速地进行交换,以保持动态平衡,粒细胞发育过程,干细胞池,第二节 白细胞检查,感染、炎症、组织损伤或坏死、中毒、贫血; 结缔组织病、骨髓抑制(电离辐射、细胞毒药物、免疫抑制剂、抗甲状腺药物) 恶性肿瘤、白血病、骨髓增殖性疾病、淋巴组织增生病、,白细胞检查的选择,第二节 白细胞检查,一、白细胞计数 【显微镜法原理】 用稀醋酸溶液,将血液稀释一定倍数并破坏红细胞,混匀充入计数池,在显微镜下计数一定体积内的白细胞数,经过换算求得每升血液中的细胞数。,有二个计数池,每个计数池有9个大方格,每个大方格长、宽均是1mm,加特制盖片后高度为0.1m
4、m。故1个大方格体积为0.1mm3。,计数板的结构,实验指导p7,器材,【计算】,WBC/L=102010 6 4,四大格白细胞总数,=-109,20,四大格白细胞总数,4:算出每大格内平均白细胞数(0.1l) 10:换算为1l的容积; 20:稀释倍数 10 6 :换算成每升血中浓度,【结果报告】 WBC:109/L,第二节 白细胞参数检查,【方法学评价】 1.显微镜计数法:为血液分析仪校准的基本方法(严格规范下)。简单易行,不需昂贵仪器。但影响因素多:微量吸管、计数板、细胞分布范围、人为因素等,重复性差。 2.血液分析仪法:快速、标准化、精确性高、适合大规模人群检查。但某些人为或病理因素可干
5、扰白细胞计数。,第二节 白细胞参数检查,【质量控制】 (一)计数误差 1、技术误差:是由于操作不正规或 使用器材不准确造成的误差。 (1)器材:清洁、干燥、校准 (2)标本要求:采血迅速,避免凝血,深度适宜,不能过度挤压,稀释度要准 。 (3)盖片放置方式:推式加盖玻片法, 更能保证充液体积高度为0.1mm。,第二节 白细胞参数检查,(4)充池要求: (5)细胞分布较均匀,若每大格间细胞数相差8个时,应重新充池计数, 二次重复计数结果相差不10%。,【质量控制】 (一)计数误差 1、技术误差:,第二节 白细胞参数检查,(6) 对压线细胞的计数原则: 数上不数下 数左不数右,【质量控制】,第二节
6、 白细胞参数检查,(7)白细胞稀释液不能破坏有核红细胞,因此在病理情况下周围血出现有核红细胞时,可使白细胞数偏高, 应进行校正:,【质量控制】,WBC/L (真值) = X -,100 + Y,100,X:校正前白细胞数 Y:分类100个白细胞时,遇到的有核红细胞数,第二节 白细胞参数检查,2 、固有误差: 在每次计数时,不可避免产生的误差,包括: 计数域误差 吸管误差 固有误差 计数室误差,第二节 白细胞参数检查,2 、固有误差: 1)计数域误差: 由于每次充池后, 细胞在计数池分布不可能完全相同所造成的误差, 叫计数域误差。,一、白细胞计数,第二节 白细胞参数检查,2 、固有误差: 1)计
7、数域误差:细胞在计数室内随机分布符合Poisson分布,其细胞计数的标准差(s) 为: s =m , m为重复计数均值,细胞计数域的变异系数(CV )为: CV(%)= s /m 100% =m / m100% = 1 /m 100% 意义:CV可以通过计数细胞增多而变小。,第二节 白细胞参数检查,2 、固有误差: 1)计数域误差:,当白细胞15.010/L可适当增加稀释倍数 。,第二节 白细胞参数检查,2 、固有误差: 1)计数域误差:,2)吸管、计数室误差:由于不精密所致。 可通过计数次数越多,即使用吸管、计数室次数越多误差将减少。,第二节 白细胞参数检查,2 、固有误差: 1)计数域误差
8、: 2)吸管、计数室误差:,3) 固有误差总变异系数的数学公式:,1002 + 4.62 + 4.72 CV= nb nc np,nb 所数细胞总数 nc 计数板使用次数 np 吸管使用次数,第二节 白细胞参数检查,(二)生理状况的影响: 运动、劳动 、冷热水浴 、酷热 、严寒可出现一过性增高,一日内可差1倍; 吸烟者平均比不吸烟者高30%, 所以,最好是定时检查,一、白细胞计数 【质量控制】 (一)计数误差,【参考区间】 WBC:成人(4.010.0)109/L 新生儿(1520)109/L 6月2岁 (1112)109/L GRAN:5070 GRAN:(2.07.2)109/L (绝对值
9、),第二节 白细胞参数检查,一、白细胞计数,第二节 白细胞参数检查,白细胞是与红细胞相对而得名,是一种无色有 核细胞,呈球形,直径725 m。 【原理】 将血液制成血涂片用瑞氏染液染色 根据各种白细胞形态特征分类计数100个白细胞 即可求出各种白细胞的相对比值或百分率。,二、白细胞分类计,第二节 白细胞参数检查,【粒细胞特点】 1)这类细胞均含有特殊颗粒,故名粒细胞。 2)由于这些颗粒对染料亲和力不同,可分为中性、嗜酸性、嗜碱性三种颗粒。根椐细胞内所含特殊颗粒而对粒细胞命名。,二、白细胞分类计数,第二节 白细胞参数检查,3)粒细胞因其成熟阶段不同,核形可分杆状和分叶核。,二、白细胞分类计数【粒
10、细胞特点】,杆状核(st): 为不完全成熟细胞。数量5% 核凹陷超过假设圆直径的3/4, 核径最狭窄处大于最宽处的1/3。 呈马蹄形、S、V、W、U形等,,分叶核: 核径最狭窄处小于最宽处的1/3。,第二节 白细胞参数检查,(二)外周血正常白细胞形态 p57,二、白细胞分类计数,1.中性粒细胞(N),2. 嗜酸性粒细胞(E),3. 嗜碱性粒细胞(B),三种粒细胞的鉴别 - 鉴别要点 中性颗粒 嗜酸性颗粒 嗜碱性颗粒 - 颗粒数量 大量 大量 量少, 大小及均匀 细小,均匀 粗大,均匀 粗大,大小不等 分布排列 均匀,弥散 均匀,紧密 不均匀,排列稀疏 颗粒形状 尘土状 球状折光 不规则块状 掩
11、盖核 不 不 可掩盖核 ,致核形不清 化学性质 中性物质 碱性物质 酸性物质 瑞氏染色 粉红或 桔红或 深紫红或 颜色 淡紫红 浅咖啡色 紫黑色 -,4. 淋巴细胞(L),5. 单核细胞(M),2,4,7,5,6,3,1,五种白细胞的比较 细胞 直 径 核/浆 核 形 染色质 胞 浆 N 1015 中 杆状/分叶 粗造不均 颗粒量多、细小均匀、 染粉红色、散在分布 E 1315 小 多分2叶 粗造 粗大、均匀、紧密排列, 呈眼镜状有立体感、桔红色 1012 大 分叶不清 粗造 少量粗大、大小不均、 紫黑色、常盖于核上 6 15 大 圆形/肾形 粗造成块 透明淡蓝色,无颗粒或 少量大小不等紫红色
12、的嗜 天青颗粒 1525 中 肾形、马碲 疏松 半透明淡蓝色、淡灰, 形、有折叠 网状 有较多细小尘土样紫红 色嗜天青颗粒,散在分布 ,第二节 白细胞参数检查,(三)外周血异常白细胞形态 1、异常中性粒细胞形态:p59 中性粒细胞毒性变: 见于严重细菌感染性疾病、中毒、大面积烧伤、恶性肿瘤等。,二、白细胞分类计数,中毒颗粒,中毒颗粒,毒性指数:计数100200个中性粒细胞, 同时记录有中 毒颗粒的细胞。 有中毒颗粒的细胞数 毒性指数 - 所数中性粒细胞总数,毒性指数 = 1为极度,示病情严重 = 0.75为重度 = 0.50为中度 0.25为轻度,大小不均:,空泡变性:,杜勒体,核棘突:,鼓槌
13、状小体,退化细胞,Auer小体,皮杰核畸形:中性粒细胞核呈肾形,染色质浓缩、深染,不分叶,核固缩:核呈均匀而深紫色的块状物。,核碎裂:核碎裂 数块,(1)异型淋巴细胞:由于某种原因如病毒感染或变应原的刺激,使淋巴细胞增生,并发生了某些形态变化,称异型淋巴细胞。 异型淋巴细胞多为T淋巴细胞,其形态变异系增生亢进,甚至发生母细胞化的结果。正常2%,病毒感染(肝炎、风疹等)2%,但5%;传染性单核细胞增多症时常10%,为其诊断指标之一。,2. 淋巴细胞变异: p65,第二节 白细胞参数检查,二、白细胞分类计数,按其形态可分为三型: 型(空泡型)-浆细胞型: 型(不规则型)-单核细胞型: 型(不成熟型
14、)-幼稚型,未成熟细胞型。,浆细胞型 ,幼稚型 ,单核细胞型 ,型,型异淋,(2)具有卫星核的淋巴细胞, 即在淋巴细胞主核旁边另有一个游离的小核。 见于:接受较大剂量的电离辐射之后,或其他理化因子、抗癌药物等对细胞造成损伤时。 常作为致畸、致突变的客观指标之一。,第二节 白细胞参数检查,二、白细胞分类计数,第二节 白细胞参数检查,(四)白细胞分类计数(DC )的方法 1、血片检查的内容: (1)对周围血进行形态观察: (2)进行白细胞分类计数:求出各种白细胞的百分比, (3)有无异常细胞:高雪氏细胞,恶性网状细胞 。 (4)周围血中有无寄生虫: 原虫,黑热病小体,二、白细胞分类计数,第二节 白细胞参数检查,2、分类的操作过程: 实验指导 p32 推片 染色 低倍镜观察,选择细胞分布均匀、染色好的部位 转油镜下计数100200个白细胞,求出各种白细胞所占百分比。,二、白细胞分类计数,(四)白细胞分类计数(DC )的方法 1、血片检查的内容:,第二节 白细胞参数检查,2、分类的操作过程: 血片各部位细胞分布情况: 头体部: 以淋巴细胞较多 尾部和两侧:以中性粒、单核细胞较多, 片尾部: 异常大的细胞较多.,二、白细胞分类计数,(四)白细胞分类计数(DC )的方法 1、血片检查的内容:,% = 某白细胞的数量/计数白细胞总量100% 绝对数(10 9/L )=