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1、第七章 革兰阴性球菌,李向阳,奈瑟菌属（Neisseria）布兰汉菌属（Branhamella）,概述,“伯杰鉴定细菌学手册”第9版 将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群4，将奈瑟菌属、莫拉菌属、金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科 奈瑟菌属中的淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）、脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）以及莫拉菌属中的卡他莫拉菌（M.catarrhalis）是主要的致病菌。 目前对卡他莫拉菌是归属尚未定论,一、分类,淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌对人致病 寄生在人体内鼻咽腔的腐生菌 解乳糖奈瑟菌、干燥奈瑟菌、微黄奈瑟菌、粘 液奈瑟菌、浅黄奈瑟菌、灰色奈瑟菌、延长奈 瑟菌、去氮奈瑟菌
2、和多糖奈瑟菌,第一节 奈瑟菌属,二、脑膜炎奈瑟菌临床意义,寄居于人的鼻咽腔、口腔粘膜上，通过呼吸道分泌 物或空气微滴核而传播。 流行性脑脊髓膜炎 冬末春初，多为学龄儿童、青少年 感染后多为隐性感染，少数可发展为菌血症或败血症，进而累及脑、脊髓膜，形成化脓性脑膜炎 可出现严重的临床症状如发热、头痛、脑膜刺激 症阳性、甚至休克和DIC等；菌血症和细菌的损 伤作用使约半数患者出现皮下瘀斑,脑膜炎奈瑟菌临床意义,尽管可以在鼻咽部形成带菌状态，但侵袭性的脑膜炎奈瑟菌感染多为新近感染，急性发病，发病时机体内缺乏杀菌抗体。 主要致病物质是脂多糖 依据荚膜多糖的抗原成分可分为：A、B、C、等13个血清群，我国
3、A群占95.8%，其余为B、C等群。,淋病奈瑟菌临床意义,淋病的病原菌 主要通过性接触直接感染 在分娩时通过产道感染新生儿 临床表现为： 单纯性淋病 盆腔炎口咽部和肛门直肠淋病 淋菌性结膜炎 播散性淋病 致病物质包括菌毛、外膜蛋白、蛋白水解酶、脂多 糖和铁调节蛋白,1形态,革兰阴性双球菌 直径0.61.5m 形似双肾或咖啡豆样，凹面相对 无动力，无芽胞， 某些菌种形成荚膜,三、生物学特性,2培养特性,需在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏 感，在培养基中需加入可溶性淀粉。 需氧生长，初次分离需5%7%CO2和高湿度 最适生长温度为3537，低于30不生长 血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光
4、滑、湿润、 透明或半透明、直径12mm的不溶血、圆形、灰兰色菌落 卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落 在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜 脑膜炎奈瑟菌于孵育24h后在培养基上发生自溶,3生化特性,氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外） 对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶不同，常作为菌种间的鉴别依据 奈瑟菌属DNA中G+Cmol%为4654,4抵抗力,对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感 对青霉素敏感 但近年来由质粒介导的内酰胺酶所致的耐 药在淋病奈瑟菌中产生较多,四、微生物检验,脑膜炎奈瑟菌,标本采集 无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本 采集后立
5、即送往实验室 用血平板进行床边接种后置35孵育 血液标本接种在血液培养瓶中置35孵育 标本运送时需要35保温,标本直接检查,直接涂片检查 脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片 皮肤瘀点渗出液涂片 革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断 抗原检查 通常用胶乳凝集试验和其他凝集试验 包括A、C、Y、W125血清型的多价抗体和血清型B抗体 检测结果应结合涂片和培养结果，抗原检测阳性结果可作出快速、推测性诊断,分离培养鉴定,脑脊液标本 接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板 咽拭子或鼻咽拭子 接种在选择性培养基上如改良的Thay
6、er-Martin(MTM)、GC-Lect、New York City(NCY)等培养基 血液标本 经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼脂平板上 置5%7%CO2 35孵育，每隔24h观察平板,鉴定,初步确定为奈瑟菌属 直径12mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落 涂片革兰染色见阴性双球菌 氧化酶试验阳性 进一步进行葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖 类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌 用分型血清确定血清型别 平板上没有发现菌落需继续观察72h后无菌生长可报 告为阴性,（二）淋病奈瑟菌,1检验程序,2标本采集,阴道和宫颈分泌物 用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm处
7、停留1015秒时间，蘸取 采集尿道分泌物 弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本 尿液 直肠肛拭标本 废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物 新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物,3标本直接检查,标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查 男性尿道分泌物标本中可见中性多形核细胞内、外较多 革兰阴性双球菌，有助于男性淋病早期诊断 女性宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内、胞外大量革 兰阴性双球菌，由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄 居，故对涂片所见结果必须由培养结果得以证实方可报告 新生儿结膜分泌物可见胞内、胞外大量革兰阴性双球菌可初步诊断为淋球菌性结膜炎,4分离培养与鉴定,选择培养基如MTM，
8、Martin-Lewis（ML），或NYC 置于5%CO2气体条件下3537孵育 每隔24h观察平板,（1）形态和生化学鉴定,可疑菌落 直径0.51mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴状凸起的菌落 确认 将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌 氧化酶和触酶试验阳性 葡萄糖发酵试验阳性，其它糖类阴性 培养需观察72h后无菌生长可报告为阴性。,（2）免疫学鉴定,直接荧光染色 凝集试验或免疫渗滤技术,（3）分子生物学鉴定,检测靶片段的基因 隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌 胞嘧啶DNA 甲基转移酶基因、透明蛋白(opa)基 因、菌毛DNA 探针、rRNA 基因探针和porA 假 基因。 基因探针杂
9、交、核酸扩增,第二节 卡他莫拉菌,卡他莫拉菌（M.catarrhalis）又称为卡他布兰汉菌（Branhamaceae catarrhalis） 可存在于健康人群的上呼吸道 近十年来报道 导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎 在免疫抑制和ICU的患者可导致菌血症 是社区呼吸道感染的主要病原体之一。,临床分离,从中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本 呼吸道感染患者应采取合格痰标本或支气管灌洗液 口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本 痰液标本直接涂片革兰染色 如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径为0.51.5m革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染,卡他莫拉菌培养及鉴定,在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好 35 24h孵育后菌落直径13mm，灰白色、光滑，用接 种环推菌落可将整个菌落在平板表面移动 氧化酶和触酶阳性 不发酵葡萄糖和其它糖类产酸 大多数菌株还原硝酸盐和产生DNase。 三丁酸甘油酯水解（丁酸酯酶）试验阳性可与奈瑟菌属鉴别 可产生诱导型内酰胺酶,奈瑟菌属和卡他布兰汉菌的鉴定,
