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1、From,福建省临床基因扩增检验实验室 规范化培训暨技术人员培训班 卫生部临床检验中心 李金明,Contents,PCR技术介绍； 质量管理体系的建立； 质量保证； 质控规则；,PCR技术,高温,Target Sequence,Target Sequence,较低温度,Target Sequence,最适温度,1,2,3,实时荧光定量PCR,模板起始浓度越高，荧光信号强度达到域值所需的循环数越少，即Ct值越小。,模板起始浓度的常用对数与Ct值呈负线性关系。,无基因无核酸的重要性,严格分区（一区二区三区）； 开窗通风； 用次氯酸钠擦洗地面和台面，甚至墙面； 增长紫外照射的时间； 用75%乙醇空中
2、喷雾； 实验前的处理程序和实验后的处理程序；,核酸污染的来源,临床标本中存在的大量待测微生物 科研中得到的质粒克隆 以前分析研究的特定微生物 大量存在于实验环境中的特定微生物 以前扩增产物的残留污染。这也是PCR实验室最容易产生的，将造成假阳性的“污染”。,Next,质量体系文件的编写,基本原则：最有效+符合实际； 三大特性： 法规性：一旦批准必须认真执行； 唯一性：一个检验活动只能有唯一的操作程序； 适用性：要符合实际，具有可操作性； SOP包含的内容：5W+1H； SOP呈现方式：图片+文字；,PCR实验室的质量体系文件,检测项目的性能验证； 项目检测的SOP; 仪器和设备的操作SOP；
3、仪器和设备的维护SOP； 人员的技术档案； 各种记录表格；,表格记录,仪器设备的维护校准SOP,日维护 周维护 定期维护 剂量单位校准 厂家校准,人员的技术档案记录,一人一个档案； 个人基本情况； 培训证和上岗证； 论文、著作、成果等； 培训考核记录等；,仪器设备的技术档案,一台仪器一个档案； 仪器的基本情况； 仪器的使用说明书； 仪器校准的记录； 维修维护的记录等；,Next,室内质量控制,由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度；旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本实验室常规工作中批内和批间样本检验的一致性，以确定测定工作的结果是否可靠、可否发出报告的一
4、项工作； 改善测定精密度的措施必须首先着重在最不精密的步骤上，即对试剂准备、标本采集、核酸提取、测定方法和仪器操作写出并严格执行“标准操作程序（SOP）”。,室内质量控制,标本采集、运送和保存中的关键点: 容器密闭、一次性、无菌、无核酸酶及扩增抑制物； 采集方法人员训练有素、防污染、保存时间和温度； 合格标本容器完整、量够、时间符合要求、外观符合要求、要猜到病原体等；,第49-51页,为客观比较一个实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构，采取一定的办法，连续和客观地评价实验室的测定结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性，这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来决
5、定在实时的测定结果的可接受性。,室间质量评价,室间质评的档案袋,申请表； 接收记录； 保存记录； 实验记录； 结果上报表； 结果汇报表； 分析和改进内容；,Next,质控规则,质控规则的功能：判断测定批的失控还是在控； 失控处理： 查出原因； 采取措施； 保证消除； 不再出现； 纳入标准；,防止同样的问题出现第二次是质量管理的“精髓”。,符 号 定 义 12S 一个质控测定值超出2s控制限。 13S 一个质控测定值超出3s控制限。 22S 两个连续的质控测定值同时超出+2s或2s控制限。 R4S 同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间的 差值超出4s控制限。 41S 四个连续的质控测定值
6、同时超出+1s或1s控制限。 7T 七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变 化。 10X 十个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧。,质控规则的符号及其定义,“即刻法”和Levey-Jennings质控图法 “即刻法” 的实质是一种统计学方法，即Grubs异常值取舍法 ；只要有3个以上的数据即可决定是否有异常值的存在。 Levey-Jennings质控图法：稳定条件下，20个室内质控结果不应有多于1个结果超过2SD限度；在1000个测定结果中超过3SD的结果不多于3个。,质控方法,“即刻法”,在刚开始进行质控时，可以采用“即刻法”进行质控，当日常有效测定次数超过20次时，转入使用Levey-Jennings 质控图结合Westgard多规则质控的方法进行质控。,Levey-Jennings质控图,Thank you！,The end.,
