《最新高考生物二轮复习专题二十三微生物的利用与酶的应用试题》由会员分享，可在线阅读，更多相关《最新高考生物二轮复习专题二十三微生物的利用与酶的应用试题（30页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、【2019最新】精选高考生物二轮复习专题二十三微生物的利用与酶的应用试题考纲要求1.大肠杆菌的培养和分离(加试)。2.分离以尿素为氮源的微生物(加试)。3.果汁中的果胶和果胶酶(加试)。4.淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测(加试)。考点一微生物的利用一、大肠杆菌的培养和分离1大肠杆菌(1)特性：大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧(代谢类型)的肠道杆菌，在肠道中一般对人无害，但若进入人的泌尿系统，就会对人体产生危害。(2)用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。2细菌的培养和分离(1)细菌的繁殖：以分裂方式繁殖，分裂速度很快，约20 min分裂一次。(2)培养的方法：需要将已有细菌的培养物转移到新
2、的培养基中，一般用接种环(工具)转移带菌的培养物。(3)细菌分离的方法与特点分离方法特点划线分离法操作简单涂布分离法操作复杂，单菌落更易分开3.消毒和灭菌的区别项目条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌4.大肠杆菌的培养和分离实验(1)实验内容：将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌，培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，随后培养基上就会形成一个个单独的菌落
3、。(2)实验步骤培养基灭菌倒平板接种划线分离培养观察50 mL LB液体培养基和50 mL LB固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌将培养基分别倒入4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养12 h用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿培养皿倒置(盖在下面)，放在37 恒温培养箱中培养1224 h后，可看到划线的末端出现不连续的单个菌落(3)大肠杆菌分离的用途：单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。二、分离以尿素为氮源的微生物1菌种特点含有脲酶，可以通过降解尿素作为
4、其生长的氮源。2培养基用以尿素为唯一氮源的培养基培养，以LB全营养培养基为对照。3实验原理(1)筛选以尿素为氮源的微生物，可使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养选择。(2)细菌合成的脲酶能将尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚红指示剂变红。4实验步骤制备培养基：将已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基分别倒入两个培养皿中，摇匀，平放至凝固制备细菌悬液：用1 g土样配制不同浓度的细菌悬液用涂布分离法分离细菌：将不同浓度的土壤稀释液分别加入到有LB培养基和尿素培养基的培养皿中，并用玻璃刮刀涂布到整个平面上培养：将培养皿倒置，在37 恒温箱中培养2448 h观察：培养基中菌落数量5反应的鉴定在配
5、制培养基时，加入指示剂酚红，培养时细菌将尿素分解产生碱性的氨，使培养基上菌落周围出现红色的环带。思考诊断1从有机废水中分离分解有机物的微生物时，接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养()提示异养微生物不需要光照。2消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害()3下图中甲为划线分离法中最重要的环节，乙为操作的结果：(1)每一次划线后都要将接种环灼烧()(2)除第一次划线外，每一次划线的起点都是第一次划线的末端()提示平板划线时除第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的末端，而不是第一次。4筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源()5分解尿素的细菌在分解尿素时
6、，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低()提示应为升高。1培养基的配制及划线分离操作的注意事项(1)配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项倒平板的适宜温度是60 左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(2)划线分离操作的注意事项第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。2几种消毒和灭菌方法及其适用范围类型适用范围操作方法消毒方法煮沸消毒法日常生活100 煮沸
7、56 min巴氏消毒法不耐高温的液体7075煮30 min或80 煮15 min化学药剂生活活体、水源等擦拭如用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源等紫外线房间、仪器设备紫外线照射30 min灭菌方法灼烧接种工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱，160170 加热12 h高压蒸汽灭菌培养基、培养皿等，生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内，100 kPa，温度121 ，1530 min3.接种微生物的两种常用方法比较比较划线分离法涂布分离法工具接种环玻璃刮刀原理通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，
8、将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体，即菌落将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落4.分离以尿素为氮源的微生物的注意事项(1)培养基中的酸碱指示剂产生颜色变化(变红)，标志着存在脲酶分解尿素的作用，从而证明这一菌株能以尿素为氮源。红色环状区域的大小代表脲酶活性的强弱和含量的多少。红色区域越大，表明菌株利用尿素的能力越强。(2)本实验中配制固体培养基时应选用琼脂糖而不能选用琼脂作凝固剂
9、。这是由于琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养基上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选。(3)由于尿素在高温下会分解，所以对尿素溶液的灭菌要采用G6玻璃漏斗过滤的方法。并且应在基本培养基经高压蒸汽灭菌后，冷却至60 时再加入。(4)土样应从有哺乳动物排泄物的地方取得，这是由于动物排泄物中有一定量的尿素，在这些土壤中一般含有较多的分解尿素的细菌。题型一大肠杆菌的培养和分离1下图为“大肠杆菌的培养和分离”实验的基本流程，请回答下列问题(1)A过程配制的是通用细菌培养基，称为_培养基。配制
10、时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持_。对培养基酸碱度的调节，应该在B过程的_(填“前面”或“后面”)。(2)D过程与C过程相比，培养基中增加的物质是_，E过程所需的温度是_。(3)D过程后，一个菌体便会形成一个_，这种分离方法是_的通用方法，也是筛选特定菌株的最简便方法之一。(4)植物组织培养时，先配制MS培养基，再加入一定比例的植物激素，当生长素相对较多时，可促进_。(5)植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是()A接种环和镊子B三角瓶和广口瓶C发芽培养基和生根培养基D用于培养的幼茎和幼芽答案(1)LB液体渗透压前面(2)琼脂4 (3)
11、(单)菌落消除污染杂菌(或纯化菌种)(4)生根(5)D解析(1)LB液体培养基是通用的细菌培养基，LB固体平面培养基则用于划线分离形成单菌落。氯化钠的作用是维持培养基的渗透压。调节好酸碱度后才能进行灭菌，若灭菌后再进行酸碱度调节，又会产生新的污染。(2)在液体培养基的基础上加入一定量的琼脂可形成固体培养基。菌种应置于4 C冰箱中保存。(3)通过划线分离后，一个菌体就会繁殖出一个菌落。(4)植物组织培养中生长素相对较多时，有利于生根，而细胞分裂素相对较多时，则有利于生芽。(5)高压蒸汽灭菌常用于培养基、培养器材等的灭菌，而用于培养的幼茎和幼芽则不能进行任何灭菌操作，否则会导致细胞死亡。2检验饮用
12、水的细菌含量是有效监控疾病发生的必要措施。请回答下列与检验饮用水有关的问题：(1)要测定饮用水中大肠杆菌的数量，常采用_法，通常将水样进行一系列的梯度_，然后将上述的水样用玻璃刮刀分别涂布到_的表面进行培养，记录菌落数量。用该方法统计样本菌落数时_(填“是”或“否”)需要对照组。原因是：_。(2)下面所示的四种菌落分布图中，不可能由上述方法得到的是_。(3)大肠杆菌的培养条件是无菌，培养基配制时需加入氯化钠，以维持_。配制培养基时先_后_。A调节pH B. 灭菌C消毒 D调节温度答案(1)涂布分离稀释LB固体培养基是需要判断培养基使用之前是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格)(2)D(3)渗透压
13、AB题型二分离以尿素为氮源的微生物3请回答微生物培养和分离的有关问题：(1)欲从土壤中分离出能利用尿素的细菌：以_为唯一氮源且加入了_指示剂的培养基，用_法分离细菌。若培养基平板上有菌落存活且颜色变_，则说明分离成功。(2)分离以尿素为氮源的细菌和分离大肠杆菌都使用了LB培养基，其成分_。A前者含琼脂，后者不含琼脂和琼脂糖B两者都含有琼脂C前者含有琼脂糖，后者不含琼脂糖但含琼脂D两者都不含琼脂和琼脂糖答案(1)尿素酚红涂布分离(或涂布)红(2)C解析(1)分离能利用尿素的细菌，只需以尿素为唯一氮源，加酚红作指示剂，采用涂布分离法分离细菌，只要培养基中的指示剂变红，标志着存在脲酶水解尿素的反应，证明菌株可以以尿素为氮源。(2)分离以尿素为氮源的细菌所用培养基应含有琼脂糖，而分离大肠杆菌所用培养基则不含琼脂糖而含琼脂。4要获得能够分泌脲酶的细菌的菌种，某生物兴趣小组的同学设计了以下培养和筛选的途径：(1)获得菌种：要获得较多的能够分泌脲酶的细菌，最好取525 cm处的浅层土样，说明这类细菌的细胞呼吸方式为_，在生态系统中属于_(成分)。(2)将土样加入无菌水中配制成悬液，并配制如图所示的培养基，其中尿素在培养基中必须是作为保证微生物生长的唯一_。向培养基中添加尿素的方法是待其他成分灭菌冷却后，加入尿素溶液，而该尿素溶液要事先用_
