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1、操作要点: 选取籽粒 饱满的稻米，去皮后用 Pearlest 精米机处理 40s 成为精米。为了抑制发芽后的发酵味，用 1% 的次氯酸钠水溶液洗 1min，用灭菌的去离子水反复冲洗 3 遍。将处理好的精米用纱布包好，恒温浸泡，转入培养皿中发芽，保持培养皿湿润，每 3h 上下翻动一次。发芽结束后将培养皿放入 55烘箱终止活性，干燥一定时间，取出粉碎。1.2.2GABA 含量测定样品准备:将粉碎后的样品过 60 目筛，称取 2g，加入 5% 三氯乙酸水溶液 5mL，30振荡 提取 2h，离心( 转速 10000r/min)10min，取上清液待测色谱条件:单泵，流速为 0.9mL/min;色谱柱为
2、 Venusil MPC18(4.6 250mm)，柱温 30;流动相为 1.6g NaAc 3H2O 溶 于 600mL 水 中，pH7.2，甲 醇 200mL，乙 氰 200mL;检测波长 338nm。衍生化:吸取硼酸缓冲液(0.4mol/L，pH10.4)1000L，样品 200L，OPA 衍生试剂 ( OPA 80mg，巯基乙醇 80L，乙腈 10mL)200L，混合均匀，暗室中室温反应 5min 后进样 20L。GABA 标准曲线的绘制:用配制好的 250mg/L的标准液分别稀释 50、40、30、20、10、6、5 倍，柱前衍生，吸取 20L 进样，重复三次，以 GABA 的浓度为
3、横坐标，峰面积为纵坐标， 绘制标准曲线。衍生试剂（邻苯二甲醛 OPA）的配制硼酸钾溶液：称取硼酸，氢氧化 钾于烧杯中，用双蒸水溶解，定容于容量瓶中，摇匀，用硝酸调节到邻苯二甲醛（）溶液：称取 ，溶解于甲醇，再溶解于硼酸钾溶液中，然后加入 巯基乙醇，混匀，避光 冰箱中保存（最多可保留周，最好现配现用）- 氨基丁酸的分离提取米糠中加入 35 倍体积 0.01mol/L 柠檬酸缓冲液(pH6.0)， 37水浴电动搅拌抽提 4h，减压抽滤，以 4000r/min 离心 30min，取出上清加入 10% 磺基水杨酸离心弃沉淀，冷冻干燥后为黄粽色固体，将其溶解于蒸馏 水中、上 SephadexG-25 层
4、析柱(1.574cm)分离，蒸馏水洗脱，收集与茚三酮溶液反应呈阳性的洗脱液， 浓缩， G A B A 定性检查，所得样品调节 pH 值约为4，上磺酸型阳离子交换柱(2.0 30cm)，冰乙酸一吡啶缓冲液进行 pH 线性梯度洗脱，收集含 G A B A 洗脱液，浓缩，硅胶 H 薄板层析鉴定。1.2.2- 氨基丁酸含量的测定比色法按 Tsushida 中的方法3略加以改进；取样液 300l，加 0.2mol/L pH10.0 硼酸盐缓冲液 200l，6% 重蒸酚 100l，混匀后再加入 0.8ml 5% NaClO 溶液，振荡。于沸水浴中加热10min 后置冰浴 5min，待溶液出现兰绿色后，加入
5、 2.0ml 60% 乙醇溶液，于波长 645nm 处比色，并以已知浓度标准 G A B A 溶液绘制标准曲线仪器测定方法；用日定-838-50 型氨基酸自动分析仪测定。硅胶 H 薄层层析，按 文献 4 方法进行4朱俭,曹凯鸣,周润崎,等.生物化学实验M.上海:上海科技出版社,1981.43-45.从米糠中提取 - 氨基丁酸条件实验米糠分别用 0.01mo/L pH5.0、pH6.0 柠檬酸缓冲液、0.01mol/L pH7.5 磷酸盐缓冲液及蒸馏水抽提， 测定比较在不同温度(25、37、50、60) 条件下，不同搅拌抽提时间(0.5、2、4、6h)，米糠提取液中 - 氨基丁酸的含量及水提取液中氨基酸的组成及含量分析。
