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1、微生物基础知识及洁净区微生物控制(2013.01.24),一、微生物简介 二、微生物的分布 三、微生物的作用及危害 四、微生物的形态结构 五、微生物污染及消毒灭菌 六、洁净区微生物的控制,一、微生物简介,1、微生物的定义（microorganism, microbe）: 微生物是存在于自然界中的个体微小，结构简单、肉眼看不见，必须借助于显微镜才能看清它们外形的一群低等的、原始的微小生物，如细菌。 2、微生物的分类 按其结构、化学组成可分为: 原核类:仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器很不完善。如细菌、放线菌、支原体、立克次氏体。 真核类:细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完整。
2、如真菌（酵母菌和霉菌）、 原生动物、藻类 非细胞类:体积微小，能通过除菌过滤器。如病毒和朊病毒,按其致病性可分为: 病原性微生物：有致病性 非病原性微生物：无致病性 3.微生物的五大特点： 个体小，面积大：小于0.1mm。肉眼不可见。 分布广,种类多（10万多种） ：自然界中到处都有，如水、空气、土壤等, 土壤中的数量最多。 代谢强，转化快：发酵乳糖的细菌在1小时内可分解其自重100010000倍的乳糖；产朊假丝酵母合成蛋白质的能力比食用公牛强10万倍 生长旺，繁殖快：微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代 适应性强，易变异（耐药性产生的原因）,二、微生物的分布,1.微生
3、物在自然界的分布： 土壤：是微生物生活的最适环境，土壤中的微生物又可分为如下几类： 细菌：占土壤微生物总数的70%90%。 放线菌：占土壤中微生物含量的5%30%。 霉菌：主要生活在靠近地面的土壤中，在通气良好的土壤中，霉菌数量很多。 酵母菌：普通土壤中酵母菌含量很少。 水：仅次于土壤的微生物分布、定居的第二场所，90%为革兰氏阴性菌，主要有假单胞菌、黄杆菌等。,空气：空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及孢子的灰尘（这类微生物大多数是腐生性的，）还来源于人和动物，它们大多数是通过呼吸道排出的，其中也包含有病原微生物，悬浮在大气中。 2.微生物在人体中的分布： 在正常人体皮肤、粘膜及外界相通
4、的各种腔道（如口腔、鼻咽腔、肠道和泌尿道）等部位，存在着对人体无害的微生物群.,部位 常见菌种 皮肤 表皮葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌、耻垢杆菌等 口腔 链球菌（甲型或乙型）、乳酸杆菌、螺旋体、梭形杆菌、 白色念球菌、（真菌）表皮葡萄球菌、肺炎球菌、奈瑟氏 球菌、类白喉杆菌 胃 正常一般无菌 肠道 类杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌、厌氧性链球菌、粪链球 菌、 葡萄球菌、白色念球菌、乳酸杆菌、变形杆菌、破 伤风杆菌、产气荚膜杆菌等 鼻咽腔 甲型链球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感杆菌、乙型链 球菌、葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等 眼结膜 皮表葡萄球菌、结膜干燥杆菌、类白喉杆菌等,人体中的微生物
5、,三、微生物的作用及危害,1. 微生物的作用 绝大多数微生物对人和动物是有益的。 微生物已广泛应用于农业、食品、医药、酿造、化工、制革、石油等行业，发挥了越来越重要的作用。例如与我们日常生活密切相关的如酸奶、酒类、抗生素、疫苗等。 2. 微生物的危害 微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害，如人类的许多传染病，如伤寒、结核、病毒性肝炎，鼠疫等。 从药品生产的而言，微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格的重要因素。,四、微生物的形态结构,（一）、细菌 细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性繁殖的原核微生物，分布广泛。 细菌的形态与结构 （1
6、） 球菌 多数球菌直径在1微米左右，外观呈球形或近似球形。常见的有双球菌、链球菌、葡萄球菌等。 （2） 杆菌 形态多数呈直杆状，也有的菌体稍弯，多数呈分散存在，也有的呈链状排列，分为棒状杆菌、链状杆菌、球杆菌等。 （3） 螺形菌 菌体弯曲，呈弧形或螺旋形。如幽门螺杆菌。 细菌虽小，仍具有一定的细胞结构和功能。细胞壁、细胞膜、细胞质和核质是细菌的基本结构。,大肠菌群,大肠菌群为人和动物肠道中的常居菌，在一定条件下可引起肠道外感染。 生存环境 大肠菌群在自然界中分布广泛，在1546均可生长，最适生长温度为37。在水和土壤中大量存在，对自然环境有较强的抵抗力。主要污染的食品是肉类、水产品、蔬菜等。
7、85热水13分钟灭菌。 300ppm次氯酸纳溶液 13分钟内杀灭本菌。,金黄色葡萄球菌在自然界中分布广泛，空气、水、地面、物体表面、人和动物的体表、粘膜等处均有存在。 食品药品中生长有金黄色葡萄球菌，是食品药品卫生的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌可以产生肠毒素，食后能引起食品中毒。,金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌,繁殖条件 金黄色葡萄球菌能在1245生长繁殖，最适生长温度为37， 特征 伤口化脓的地方、口、鼻子等处繁殖； 污染来源于手指的可能性很高 ； 产生的毒素，非常耐热； 预防： 手指处有伤口、化脓口的人，不要直接接触产品； 彻底对手指进行洗净消毒，佩戴手套，要戴帽子、戴口罩； 杀灭条件
8、 加热8030分钟才能杀死，煮沸可迅速使它死亡,沙门氏菌,沙门氏菌常在动物中广泛传播，人的沙门氏菌感染也非常普遍。世界上沙门氏菌的食物中毒占首位，因此，检查食品药品中的沙门氏菌非常重要。 生存环境 沙门氏菌在水中不易繁殖，但可生存23周，冰箱中可生存34个月，在25可存活10个月，在自然环境的粪便中可存活12个月。 繁殖条件 沙门氏菌最适繁殖温度为37，在20以上即能大量繁殖，因此，低温储存食品是一项重要预防措施 。,污染渠道 沙门氏菌的来源主要是患病的人和动物，及人和动物的带菌者，其中在肉类中最为多见。 杀灭条件 沙门氏菌对热及外界环境的抵抗力属于中等， 60 2030分钟 75 5分钟即被
9、杀死， 100 立即被杀死。,沙门氏菌,（二）、真菌,真菌是一类有细胞壁，无叶绿素，以寄生或腐生方式生存，少数为单细胞，多数为多细胞，能进行无性或有性繁殖的一类真核细胞型微生物。 真菌包括单细胞与多细胞两类。单细胞真菌呈圆形或卵圆形，称为酵母菌；多细胞真菌由菌丝和孢子组成，并交织成团，称丝状菌或霉菌。 真菌生长的最适的温度为2228，最适的pH值为46。其繁殖能力强，但生长速度比细菌慢，常需1-4周才形成菌落。真菌对热的抵抗力不强，一般加热6070 1小时即被杀死，但对干燥、日光、紫外线和一些化学消毒剂有抵抗力，但对2.5碘酒、10甲醛则较敏感。,（三）、病毒,病毒属非细胞型微生物，在自然界分
10、布非常广泛，可在人、动物、植物、真菌和细菌中寄居并引起感染。病毒是体积最小、结构最简单的微生物，它仅有一种核酸（DNA或RNA）作其遗传物质。病毒必须在宿主活细胞内寄生，依靠细胞提供的能量、营养物质及生物大分子合成机制，完成病毒的复制过程。 病毒与人类的关系极为密切，人类的传染病约75是由病毒引起的。有些病毒传染性强，可引起世界大流行（如流感、艾滋病等）。,（四）、热原与内毒素,热原：是微量即可引起恒温动物体温异常升高的物质的总称。 内毒素：是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖和微量蛋白的复合物，具有多种生物活性。 热原包括内毒素 ，内毒素是主要的热原物质。 在产品检测中，细菌内毒素是检测热原的
11、方法之一。 我公司产品， 更昔洛韦葡萄糖注射液-鲎试剂法。 聚明胶肽注射液检测热原-动物试验法（家兔法）。,消除细菌内毒素的方法 高温破坏法：可用180干烤34h或250干烤 至少60min。 吸附法：一般选用活性炭。 化学酸碱和氧化法。 离子交换法。 反渗透法。 凝胶过滤法。 注：在产品微检中，无菌生长，不代表无内毒素，细菌死亡后会产生大量内毒素。,五、微生物污染及消毒灭菌,1.药品微生物污染： 药品微生物污染：微生物的产生、附着而给药品带来不良影响。药品的微生物污染也称染菌。 污染药品的细菌：常见污染药品的细菌是一些生命力较强的细菌，如：葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌及一些霉菌，抵
12、抗力弱的细菌一般不易造成污染。 药品的微生物污染源：空气、水、厂房与设备、药品生产用原辅料、包装材料、昆虫、生产操作人员等,2.消毒与灭菌 消毒：杀死物体上病源微生物的方法，并不一定能杀死细菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。 灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。 抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。 防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常为防腐剂。 无菌：不存在活的细菌。防止细菌进入人体或其他物品的操作技术，为无菌操作。
13、,3、常用的消毒灭菌法： 物理灭菌法和化学消毒法 物理灭菌方法 热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 超声波杀菌法 干燥与低温抑菌法,热力灭菌法：使蛋白质、酶及核酸永久性破环，细胞膜溶解，导致细胞发生不可逆转的死亡。 干热灭菌法：采用灼烧或干热空气灭菌。常用方式是把待灭菌的物品均匀的放入烘箱，升温至160，恒温1h。此方法适合玻璃皿，金属用具的灭菌。 湿热灭菌法利用热蒸汽杀死微生物。相同条件下，湿热灭菌效果比干热灭菌效果好。这是因为一方面细胞内蛋白质含水量高，容易变性，另一方面高温水蒸气对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性，死亡。 高压蒸汽灭菌：湿热灭菌法的一种。高压蒸汽灭菌是最可靠、最适
14、用、最广泛的灭菌方法。,辐射灭菌法：是采用辐射进行灭菌消毒。包括可见光、红外线、紫外线、X射线和射线等。 紫外线：波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用，265266nm波段杀菌能力最前。紫外线穿透物质的能力差，一般用于空气及物体表面消毒。 电离辐射：高速电子、X射线、射线，适用于不耐热物品的灭菌，常用于药品和医疗用品的灭菌。 微波：波长1mm1m。,滤过除菌法 用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去,以达到除菌目的。 滤菌器含有微细小孔0.22微米,只允许液体或气体通过,而大于孔径的细菌等颗粒不能通过 。 适用范围：血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。,化学消毒法法：一般化学药剂无法杀
15、死所有的微生物，而只能杀死其中的病原微生物，所以是消毒的作用，而不是灭菌的作用。 消毒剂：能迅速杀灭病原微生物的药物。 防腐剂：能抑制或阻止微生物生长繁殖的药物。 消毒剂、防腐剂没有选择性，对一切活细胞都有毒性，不仅能杀死或抑制病原微生物，而且对人体组织细胞也有损伤作用，所以常用于器械，体表、环境的消毒。 常用的化学消毒剂有：来苏水、碘酒、酒精等,化学灭菌法常用消毒剂种类和用途：,洁净区的主要污染源：空气、制药用水、操作人员、设备，原辅料等，其中操作人员是主要的污染源。药品生产质量管理规范中明确规定：洁净区内的人员应严格控制，其工作人员应定期进行卫生和微生物学基础知识、洁净区作业等方面的培训和
16、考核；进进入洁净区的临时外来人员因进行指导和监督。 防止微生物污染的措施： 了解污染源、杜绝污染途径 洁净区洁净技术的的应用及卫生管理 制药用水的质量控制 进行微生物限度检查，控制药品质量 洁净区防污染必须以尘埃粒子和微生物为环境监控对象。,六、洁净区微生物的控制,六、洁净区微生物的控制,洁净区的污染源：尘埃及细菌污染 来自人的尘粒污染占洁净室污染的80% 生产工具和设备引起的污染占15% 洁净区本身和过滤器的缺陷引起的污染占5% 1.1操作人员带来的尘埃粒子： a. 成年人产生的皮屑：10万1000万粒子/min； b. 操作人员身穿工作服，剧烈活动：产生 100万个粒径0.1 m的微粒 20万个粒径0.5 m的微粒 c. 交谈1min ，产生1.52.0万粒子 d. 咳嗽:70万个粒子，喷嚏：140万个粒子,1.2人体微生物分布情况 ：,在洁净区内的人员数量应尽量少，应严格按照SOP要求操作以减少尘埃粒
