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1、弧 菌 科,教学要求,掌握霍乱弧菌、副溶血弧菌的生物学特性和微生物学检验。 熟悉霍乱弧菌、副溶血弧菌的临床意义 气单胞菌、邻单胞菌（自学）,一类氧化酶阳性、菌体短小、弯曲成弧形或直杆状、具有单端鞭毛、运动活泼的革兰阴性细菌。 弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中最为多见，其中有一些种对人类致病,一、霍乱弧菌,（一）临床意义 （二）微生物学检验,（一）临床意义,1、经肠道传染，引起烈性肠道传染病霍乱，为甲类传染病 2、在自然情况下，人类是霍乱弧菌的易感者 3、正常情况下，胃液中的胃酸可消灭食物中的霍乱弧菌，但在胃酸降低时，或摄入大量的霍乱弧菌时，霍乱弧菌可以从胃进入肠道,4、进入肠道的霍乱弧菌通过
2、鞭毛运动穿过肠粘膜表面的粘液层，通过菌毛定植于肠粘膜上皮细胞表面繁殖产生对热不稳定的霍乱毒素（cholera toxin, CT）而致病 5、CT 导致小肠上皮细胞分泌功能亢进，向细胞外分泌水和电解质，使肠腔内水、钠潴留，导致呕吐和腹泻，机体陷于缺水和电解质、酸碱平衡紊乱状态 6、典型病人粪便呈“米泔水”样,“米泔水”样便及霍乱患儿,7、病程分期：典型病例病程可分3期 （1）吐泻期：以剧烈的腹泻开始，继而出现呕吐，一般不发热，仅少数有低热。 腹泻：腹泻是发病的第一个症状，其特点为无里急后重感，多数不伴腹痛，排便后自觉轻快感，少数患者有腹部隐痛，个别病例可有阵发性腹部绞痛，排出的粪便初为黄色稀便
3、，后为水样便，以黄色水样便多见，腹泻严重者排出白色混浊的“米泔水”样大便，有肠道出血者排出洗肉水样大便，出血多者则呈柏油样便，以埃尔托生物型霍乱弧菌引起者多见，腹泻次数由每天数次至数十次不等，重者则大便失禁,呕吐：一般发生在腹泻之后，不伴恶心，多为喷射性呕吐，呕吐物初为胃内食物，继而为水样，严重者亦可呕吐“米泔水”样物，与粪便性质相似，轻者可无呕吐。 （2）脱水期：由于剧烈的呕吐与腹泻，使体内大量水分和电解质丧失，因而出现脱水，电解质紊乱和代谢性酸中毒，严重者出现循环衰竭 （3）恢复期或反应期：腹泻停止，脱水纠正后多数患者症状消失，尿量增加，体力逐步恢复,8、临床类型：根据失水程度，血压和尿量
4、情况，可分为轻，中，重三型 （1）轻型：起病缓慢，腹泻不超过10次/d，为稀便或稀水样便，一般不伴呕吐，持续腹泻35天后恢复，无明显脱水表现。 （2）中型(典型)：有典型的腹泻和呕吐症状，腹泻达1020次/d，为水样或“米泔水”样便，量多，因而有明显失水体征，血压下降 （3）重型：患者除有典型腹泻和呕吐症状外，存在严重失水，因而出现循环衰竭，表现为脉搏细速或不能触及 除上述三种临床类型外，尚有一种罕见的暴发型或称中毒型，又称“干性霍乱”(cholera sicca)，本型起病急骤，尚未出现腹泻和呕吐症状，即迅速进入中毒性休克而死亡,9、抵抗力 在水中存活时间长（20天左右），对热、干燥和光敏感
5、，10012分钟即死亡，怕酸不怕碱，对常用消毒剂敏感，对庆大耐药 10、抗原结构 有O抗原与H抗原，根据O抗原的不同，现有155个血清群 O1群与O139群：霍乱 非O1群：胃肠炎,11、自1817年以来，已发生七次世界性的霍乱大流行，均由霍乱弧菌的O1群引起 前六次为霍乱弧菌的古典生物型 第七次为埃尔托生物型 12、自1992年10月起分离到新的血清群O139，现在世界各地均有流行或散发病例报告,第一次大流行：1817年，当时霍乱起于印度，传到阿拉伯地区，然后到了非洲和地中海沿岸。 第二次大流行： 1826年，它抵达阿富汗和俄罗斯，然后扩散到整个欧洲。 第三次大流行： 1832年，它漂洋过海
6、，抵达北美。20年不到，霍乱就成了“最令人害怕、最引人注目的19世纪世界病”。 1865-1875年，第四次世界性大流行是通过一艘从埃及到英国的航船流传开来的。 1883-1896年，第五次世界霍乱大流行。,历史上8次霍乱大流行,1910-1926年，第六次全球性霍乱。百余年间霍乱6次大流行，造成损失难以计算，仅印度死者就超过3800万。 1961年，霍乱又开始第7次大流行。这次起于印度尼西亚，然后传到亚洲其他国家和欧洲，迄今已波及五大洲140个以上的国家和地区，报告患者350万以上。 1992年10月，由非01群的一个血清型0139霍乱弧菌引起的新型霍乱席卷印度和孟加拉国的某些地区，至199
7、3年4月已报告十万余病人，现已波及许多国家和地区，包括我国，有取代埃尔托生物型的可能，有人将其称为霍乱的第8次世界性大流行,（二）微生物学检验,1、标本采集 （1）粪便、肛门拭子和可疑食物 （2）及时送检 （3）如不能及时送检，应将标本置于3.5% NaCl蛋白胨水或卡-布运送培养基中送检,2、检验 （1）形态与染色：弧形或逗点状，无芽孢，无荚膜，单鞭毛，运动活泼；取标本直接革兰染色，油镜下观察到“鱼群样”排列的革兰阴性弧菌（可初步报告） （2）动力观察及制动试验：取患者粪便制成悬滴（或压滴）标本，观察细菌动力，见穿梭或流星样运动，O1群霍乱弧菌多价血清制动试验阳性（可早期报告）,快速诊断：通
8、过直接荧光抗体染色和抗O1群抗原的单抗凝集试验 霍乱毒素的测定：ELISA法,（3）培养 培养特性：营养要求不高，兼性厌氧，在普通培养中生长良好，耐碱不耐酸，NaCl6%可生长， 在液体培养基中形成菌膜 碱性琼脂平板： 硫代硫酸钠-枸櫞酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）：黄色菌落 4号琼脂或庆大霉素琼脂平板：中心灰褐色的菌落,（4）生化反应,（5）血清学鉴定 确定血清群： O1、O139、非O1群 确定血清型：O1群的O抗原由A、B、C三种抗原 生物分型：古典生物型与Eltor生物型,3、检验程序,确诊报告,二、副溶血性弧菌,（一）临床意义 （二）微生物学检验,（一）临床意义,1、具有嗜盐性
9、 2、存在于近海的海水、海底的沉淀物、鱼虾类和贝壳及盐渍加工的海产品中 3、主要引起胃肠炎 是我国沿海地区及海岛食物中毒的最常见病原菌 胃肠炎临床表现有：恶心、呕吐、腹痛、低热、寒战等。腹泻呈水样便，偶尔血性，恢复较快，病程23天，通常为自限性,4、通过菌毛的粘附，产生两种致病因子：耐热直接溶血素、耐热直接溶血素相关溶血素 5、抵抗力：抵抗力弱，不耐热，90 1min即被杀死，耐碱怕酸，1%醋酸或50%食醋中1min死亡，淡水中不超过2日，但海水中能存活47天以上,（二）微生物学检验,1、标本采集 可采集患者的粪便，肛门拭子或可疑食物。应及时接种，或置碱性蛋白胨水或卡-布运送培养基中送检 2、检验 （1）形态与染色 革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭毛，无芽孢，无荚膜,（3）培养 培养特性：要求不高，需氧或兼性厌氧，具有嗜盐特性，无盐不生长，超过8%不能生长，最适NaCl浓度为3.5% 增菌培养：标本接种1%NaCl碱性胨水或4%NaCl蛋白胨水中进行选择性增菌 TCBS平板：绿色或蓝绿色菌落（不发酵蔗糖）,神奈川现象（Kanagawa phenomenon, KP） 从腹泻患者中分离到的菌株95%以上在我妻（wagatsuma）琼脂上产生溶血现象 NaCl生长试验 在不含NaCl和含10%的蛋白胨水中不生长，在3%和7%NaCl 蛋白胨水中生长,（4）生化反应,
