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1、地中海贫血基因,地中海贫血是一组单基因遗传性溶血性疾病,.,2,我国和地贫基因突变类型频率,Zhang J, et al. Hemoglobin. 2012 Sep 3.,.,3,地中海贫血基因携带率,Xu, et al. J Clin Pathol 2004, 57:517-22. Cai, et al. Chi J Epidemiol 2002,23:281-5. Zhao, et al.Chi J Epidemiol 2011,32:352-6.,.,4,地贫基因分子基础,缺失型：常见（约占60%）,非缺失型：少见（约占40%）,.,5,地贫基因分子基础,1 地贫（ 0地贫）： 16号染
2、色体两个基因丧失;一个缺失，另一个点突变。 - / - 或 地 / 地 ，- - / 。 2 地贫（ +地贫）： 16号染色体一个基因功能丧失。 - / 或 地 / 。,.,6,血红蛋白H病:由于基因3个缺失/突变，使过量的珠蛋白肽链形成4多聚体（ HbH） 胎儿水肿：4个基因全部缺失/突变 非缺失型地贫,地贫基因分子基础,.,7,我国非缺失型 地贫常见基因类型： 2 CD 30 GAG (Glu) Unstable Hb 2 CD 31 AGGAAG (ArgLys) Splicing mutation 2 CD 59 GGCGAC (GlyAsp) Unstable Hb Hb Westm
3、ead 2 CD 122 CACCAG (HisGln) Unstable Hb Hb QS 2 CD 125 CTGCCG (LeuPro) Unstable Hb Hb CS 2 CD 142 TAACAA (Gln) Terminator mutation,地贫基因分子基础,.,8, 地贫临床类型与基因类型的关系,临床 基因 静止型 - / 轻型 - / - 或- - / 中间型 - - / - 重型 - - / - -,.,9,地贫基因分子基础,基因缺失：少见(仅见于:41-42),点突变：常见（约占99.5%）,.,10,地贫基因分子基础,.,11, 地贫临床类型与基因类型的关系,临
4、床 基因 轻型 地/ （ 杂合子） 中间型 地/ 地（ 变异型纯合子或双重杂合子） 重型 地/ 地（ 纯合子或双重杂合子）,.,12,地中海贫血基因诊断技术,PCR：多重PCR，Gap-PCR，QR-PCR 等位基因特异性性寡核苷酸杂交（ASO） 反向点杂交 （RDB） Southern blot 限制性切酶谱分析 多重连接酶依赖探针扩增技术(MLPA) 多重引物延伸DHPLC 基因测序,.,13,Genotyping of the-SEA alleles by Gap-PCR,地贫基因诊断技术（Gap-PCR）,.,14,地贫基因诊断技术（ASO）,.,15,地贫基因诊断技术（ASO）,.,
5、16,地贫基因诊断技术（RDB）,.,17,Genotype Father CDs41-42 (CTTT) / N Mother IVS-2-654 (CT) / N Fetus CDs41-42 / IVS-2-654 Normal control N / N,地贫基因诊断技术（RDB）,.,18,地贫基因诊断技术（MLPA）,.,19,地贫基因诊断技术（DHPLC),.,20,地贫 (缺失型)的基因诊断,Southern 印迹结合 多重PCR结合 缺口PCR(Gap-PCR ) 多重连接酶依赖探针 实时荧光定量 限制性切酶谱分析 溶解曲线分析 结合片段大小分析 扩增技术(MLPA) PCR
6、(RQ-PCR) 优点 可用于分析基因的 简洁，快速，污 对仪器要求低，易推 重复性好，特异性高 确定cDNA拷贝 大片段缺失与重复 染降低，检测单 广，检测大片段缺失。 ，可同时检测已知与 数，可同时检 突变，结果可靠， 个碱基突变及小 未知大片段缺失或重 测已知和未知 稳定性高。 片段缺失。 复突变。 大片段缺失 缺点 费时、费力、需用 不能检测未知缺失及 成本高限制了其推广 放射性同位素。 非缺失突变。 应用 PCR 诊断方法的 可鉴定各种缺失 广泛用于地贫检测， 作为常见地贫基因筛 作为补充实验 补充或佐证。 类型。 可区分杂合子及纯 阴性但高度怀疑地贫 或产前筛查 合子 的补充实验。
7、,各种地贫基因诊断方法的优缺点及应用,.,21,地贫(非缺失型)的基因诊断,PCR 结合限制性内切酶酶谱分析：简便、快捷，但只限于涉及限制性内切酶位点改变的突变和小片段缺失的检测 多重扩增不应突变系统：简便、快速，同Gap-PCR一样，广泛用于地贫基因检测 聚合酶链反应结合寡核苷酸探针的反向斑点杂交:诊断效率高，广泛用于常见非缺失型基因检测 基因芯片：并行性、多样性及自动化，同时诊断及地贫 基因测序：可用于检测未知的非缺失型地贫基因,.,22,地贫基因诊断,点突变,PCR-RDB 基因测序,.,23,植入前基因诊断 （羊膜穿刺取样） 母体外周血分离胎儿细胞进行产前诊断 母体血浆或血清中胎儿DN
8、A分析,地贫基因产前诊断新技术,.,24,地贫基因诊断临床应用,.,25,评价基因诊断结果应注意的问题,不同种族/地区地贫基因突变点有差别 临床贫血的严重程度（即临床分型）与基因诊断的严重程度一致：确诊,.,26,评价基因诊断结果应注意的问题,临床贫血严重程度与基因诊断不一致 （1）临床“重”，基因“轻”： 应作家系调查，找诊断证据(举例:新疆籍的病例) ； 重视Hb电泳结果； 必要时测序,.,27,临床贫血严重程度与基因诊断不一致 （2）临床“轻”，基因“重”： 查“减轻 ”基因(合并)； 基因位点的“同源性”（双重杂合体）； 遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症 HPFH,评价基因诊断结果应注意的问题,/10/29,.,28,
