《饲料中喹乙醇氰乙基2亚甲基肼喹噁啉基NN二氧化物喹赛多卡巴氧的测定液相色谱串联质谱法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《饲料中喹乙醇氰乙基2亚甲基肼喹噁啉基NN二氧化物喹赛多卡巴氧的测定液相色谱串联质谱法（8页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、DB43/T 891 20141饲 料 中 喹 乙 醇 、 氰 乙 基 -（ 2-亚 甲 基 肼 喹 噁 啉 基 ） -N,N-二 氧 化 物（ 喹 赛 多 ） 、 卡 巴 氧 的 测 定 液 相 色 谱 -串 联 质 谱 法1 范 围本 标 准 规 定 了 饲 料 中 喹 乙 醇 （ Olaquindox)、 氰 乙 基 -（ 2-亚 甲 基 肼 喹 噁 啉 基 ） -N,N-二 氧 化 物 （ 喹赛 多 ,Cyadox） 、 卡 巴 氧 （ Carbadox)的 液 相 色 谱 -串 联 质 谱 测 定 方 法 。本 标 准 适 用 于 配 合 饲 料 、 浓 缩 饲 料 和 添 加 剂
2、预 混 合 饲 料 中 喹 乙 醇 、 喹 赛 多 、 卡 巴 氧 的 测 定 ， 其 定 量限 分 别 为 50 g/kg、 100 g/kg、 25 g/kg。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文 件 。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。GB/T 6682 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法GB/T 14699.1
3、 饲 料 采 样GB/T 20195 动 物 饲 料 试 样 的 制 备3 方 法 原 理试 样 中 的 喹 乙 醇 、 喹 赛 多 、 卡 巴 氧 经 提 取 液 提 取 ， C18固 相 萃 取 小 柱 净 化 ， 用 带 有 电 喷 雾 离 子 源 的液 相 色 谱 串 联 质 谱 仪 测 定 ， 外 标 法 定 量 。4 试 剂 与 材 料本 方 法 所 用 试 剂 除 另 有 说 明 外 ， 均 为 分 析 纯 ； 实 验 用 水 应 符 合 GB/T 6682 规 定 的 一 级 水 。4.1 乙 腈 ： 色 谱 纯 。4.2 甲 醇 ： 色 谱 纯 。4.3 0.1 mol/L
4、磷 酸 二 氢 钾 溶 液 ： 称 取 6.80 g无 水 磷 酸 二 氢 钾 ， 加 水 溶 解 ， 定 容 至 500 mL。4.4 提 取 液 ： 乙 腈 +甲 醇 +水 =35+35+30（ V+V+V） 。4.5 0.1%甲 酸 溶 液 ： 取 甲 酸 1.0 mL， 加 水 稀 释 至 1000 mL。4.6 溶 解 液 ： 0.1%甲 酸 溶 液 +甲 醇 =90+10 （ V+V)。4.7 对 照 品 : 喹 乙 醇 、 喹 赛 多 、 卡 巴 氧 纯 度 均 应 大 于 98.0%。4.8 标 准 储 备 液 （ 200 g/mL） :分 别 准 确 称 取 适 量 的 对
5、照 品 ， 用 甲 醇 分 别 配 制 成 浓 度 为 200 g/mL的标 准 储 备 液 ， 4 避 光 保 存 。 保 存 期 不 应 超 过 1个 月 。4.9 混 合 标 准 中 间 溶 液 ： 分 别 准 确 吸 取 0.50 mL喹 乙 醇 、 1.00mL 喹 赛 多 、 0.25mL卡 巴 氧 标 准 储 备 液 ，于 10 mL 棕 色 容 量 瓶 中 ， 甲 醇 定 容 ， 4 避 光 保 存 。4.10 混 合 标 准 工 作 溶 液 ： 准 确 吸 取 适 量 的 混 合 标 准 中 间 溶 液 ， 用 溶 解 液 稀 释 成 系 列 混 合 标 准 工 作 溶 液
6、，喹 乙 醇 、 喹 赛 多 、 卡 巴 氧 的 浓 度 分 别 为 （ 2.0 ng/mL、 4.0 ng/mL、 1.0 ng/mL） 、 （ 5.0 ng/mL、 10 ng/mL、DB43/T 891 201422.5 ng/mL） 、 （ 10 ng/mL、 20 ng/mL、 5.0 ng/mL） 、 （ 50 ng/mL、 100 ng/mL、 25 ng/mL） 、 （ 100 ng/mL、200 ng/mL、 50 ng/mL） 。 使 用 前 配 制 。4.11 有 机 过 滤 膜 ： 0.22 m。5 仪 器 与 设 备5.1 分 析 天 平 ： 感 量 0.01 g 和
7、 0.01 mg。5.2 离 心 管 ： 50 mL。5.3 水 浴 超 声 波 清 洗 器 。5.4 高 速 离 心 机 ： 转 速 8000 r/min。5.5 氮 吹 仪 。5.6 涡 旋 混 合 器 。5.7 电 热 恒 温 水 平 振 荡 水 槽 。5.8 固 相 萃 取 装 置 。5.9 液 相 色 谱 -串 联 质 谱 仪 ： 配 有 电 喷 雾 离 子 源 。5.10 固 相 萃 取 小 柱 ： C18， 60 mg/3 mL,使 用 前 活 化 。6 采 样 与 试 样 制 备6.1 采 样 按 GB/T 14699.1 的 规 定 执 行 。6.2 试 样 制 备 按 GB
8、/T 20195 的 规 定 执 行 。7 分 析 测 定7.1 提 取称 取 试 样 （ 配 合 饲 料 2 g、 浓 缩 饲 料 2 g、 添 加 剂 预 混 合 饲 料 0.5 g） ， 精 确 到 0.01 g， 置 于 50 mL离 心 管 中 。 加 入 提 取 液 10.0 mL， 涡 旋 30 s， 超 声 提 取 20 min， 8000 r/min离 心 10 min， 移 取 上 清 液1.00 mL 于 玻 璃 试 管 中 ， 40 氮 气 吹 至 近 干 ， 3 mL 0.1 mol/L 磷 酸 二 氢 钾 溶 液 溶 解 ， 备 用 。7.2 净 化依 次 用 3
9、mL甲 醇 ， 3 mL水 活 化 固 相 萃 取 小 柱 ， 备 用 液 上 柱 。 2 mL 0.1 mol/L 磷 酸 二 氢 钾 溶 液 淋 洗 ，抽 干 ， 3 mL 甲 醇 洗 脱 ， 收 集 洗 脱 液 ， 40 氮 气 吹 干 。 用 1.00mL 溶 解 液 溶 解 ， 涡 旋 后 过 有 机 过 滤 膜 ，待 测 。7.3 液 相 色 谱 -串 联 质 谱 测 定7.3.1 液 相 色 谱 条 件色 谱 柱 ： C18 （ 50 2.1 mm,粒 径 1.7 m)， 或 等 效 柱 。流 动 相 : A 相 ： 甲 醇 ； B 相 ： 0.1 甲 酸 水 溶 液 （ V/V
10、） 。 流 动 相 梯 度 洗 脱 程 序 参 见 表 1。流 速 ： 0.2 mL/min。柱 温 ： 35 。进 样 量 ： 4 L。DB43/T 891 20143表 1 流 动 相 梯 度 洗 脱 程 序时 间 （ min） A (%) B (%)0 10 901.5 10 901.6 30 705.5 30 705.6 10 906.0 10 907.3.2 质 谱 条 件离 子 源 ： 电 喷 雾 离 子 源 。扫 描 方 式 ： 正 离 子 扫 描 。监 测 方 式 ： 多 反 应 监 测 （ MRM） 。电 离 电 压 ： 3.0 kV。离 子 源 温 度 ： 120 。雾 化
11、 温 度 ： 350 。喹 乙 醇 、 喹 赛 多 、 卡 巴 氧 保 留 时 间 、 定 性 定 量 离 子 对 参 见 表 2。表 2 喹 乙 醇 、 喹 赛 多 、 卡 巴 氧 保 留 时 间 、 定 性 定 量 离 子 对化 合 物 保 留 时 间（ min） 定 性 离 子 对(m/z) 定 量 离 子 对(m/z)喹 乙 醇 1.93 264.2177.1264.2212.1 264.2212.1喹 赛 多 3.00 272.2188.1272.2143.3 272.2188.1卡 巴 氧 3.56 263.2231.1263.290.1 263.2231.17.3.3 测 定取
12、适 量 标 准 工 作 溶 液 及 试 样 溶 液 注 入 液 相 色 谱 -串 联 质 谱 联 用 仪 ， 各 化 合 物 的 响 应 值 均 应 在 仪 器 检测 的 线 性 范 围 内 。7.3.3.1 定 性试 样 中 待 测 化 合 物 色 谱 峰 的 保 留 时 间 与 相 应 浓 度 对 照 品 溶 液 色 谱 峰 的 保 留 时 间 偏 差 2.5%。 在 相 同实 验 条 件 下 ， 试 样 中 待 测 化 合 物 定 性 离 子 对 的 相 对 丰 度 与 浓 度 接 近 的 对 照 品 溶 液 中 对 应 定 性 离 子 对 的 相对 丰 度 比 较 ， 相 对 离 子
13、丰 度 的 最 大 允 许 偏 差 参 见 表 3。DB43/T 891 20144表 3 相 对 离 子 丰 度 的 最 大 允 许 偏 差相 对 离 子 丰 度 （ K） K50% 20% K 50% 10%K20% K 10%允 许 的 相 对 偏 差 20% 25% 30% 50%7.3.3.2 定 量以 各 化 合 物 色 谱 峰 峰 面 积 积 分 值 ， 按 外 标 法 进 行 单 点 或 多 点 校 准 。 喹 乙 醇 （ OLA） 、 喹 赛 多 （ CYX）卡 巴 氧 （ CBX） 反 应 监 测 色 谱 图 参 见 附 录 A； 喹 乙 醇 （ OLA） 、 喹 赛 多
14、（ CYX） 、 卡 巴 氧 （ CBX） 对 照 品 多 反应 监 测 色 谱 图 参 见 附 录 A图 A.1； 空 白 添 加 剂 预 混 合 饲 料 添 加 喹 乙 醇 （ OLA） 50 g/kg、 喹 赛 多 （ CYX）100 g/kg、 卡 巴 氧 （ CBX ） 25 g/kg多 反 应 监 测 色 谱 图 参 见 附 录 A 图 A.2； 空 白 配 合 饲 料 添 加 喹 乙 醇（ OLA） 50 g/kg、 喹 赛 多 （ CYX） 100g/kg、 卡 巴 氧 （ CBX） 25g/kg多 反 应 监 测 色 谱 图 参 见 附 录 A 图 A.3;空 白 浓 缩 饲
15、 料 添 加 喹 乙 醇 （ OLA） 50 g/kg、 喹 赛 多 （ CYX） 100 g/kg、 卡 巴 氧 （ CBX） 25 g/kg多 反 应 监测 色 谱 图 参 见 附 录 A 图 A.4。7.3.4 空 白 试 验取 空 白 试 样 ， 采 用 完 全 相 同 的 分 析 测 定 步 骤 进 行 测 定 。7.4 结 果 计 算试 样 中 待 测 化 合 物 的 含 量 按 下 式 计 算 ： m= 2 31 sS AV AVVCXX 试 样 中 待 测 化 合 物 的 含 量 ， 单 位 为 微 克 每 千 克 （ g/kg） ；A 试 样 中 待 测 化 合 物 的 峰
16、面 积 ；As 标 准 工 作 溶 液 中 待 测 化 合 物 的 峰 面 积 ；Cs 标 准 工 作 溶 液 中 待 测 化 合 物 的 浓 度 ， 单 位 为 纳 克 每 毫 升 （ ng/mL） ；V1 提 取 试 样 所 用 提 取 液 的 总 体 积 ， 单 位 为 毫 升 （ mL） ；V2 提 取 时 分 取 溶 液 的 体 积 ， 单 位 为 毫 升 （ mL） ；V3 过 柱 后 定 容 体 积 ， 单 位 为 毫 升 （ mL） ；m 试 样 的 质 量 ， 单 位 为 克 （ g） 。结 果 扣 除 空 白 值 后 ， 用 算 术 平 均 值 表 示 ， 保 留 3 位 有 效 数 字 。8 准 确 度 与 精 密 度8.1 准 确 度添 加 浓 度 为 喹 乙 醇 （ 50 500） g/kg、 喹 赛 多 （ 100 1000 ） g/kg、 卡 巴 氧
