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1、教师田芒配套课件万基磴速查清单“一“春明芊力技标伯林、标目玟8全洁详国洁月的、一一基因工程的基本工具1.“分子手术刀“一一限制性核酸内切酶(限制酶)(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。(2)功能:能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酬键断开,因此具有专一性。沥B、,3)切割方式:GAAITIC_GAATTCCCCIGGG“CCCGGGBeoRLCTTAAG_CTTAAGSalGGGlCCC“GGGCCC标5仝(在G与C之间切剂)助传未端之间切制)平未中挺缘中轶线维切剂DNA分子时产生的两种不同未竭莲头表示腺的打制位置(4)结果:
2、经限制酶切割产生的DNA片段未端通常有两种形式,即黏性未端和平未端。2.“分子缝合针“一DNA连接酶(分类,E,coliDNA连接醛和工DNA连接酶。(2)作用,缝合两个DNA片段之间的磷酸二酬键。(3)作用示意图:月AATTC|DNAi拱酶仁GAATTCCTTAAGCTTAAG(4)结果:将两个DNA片段连接起来。3.“分子运输车“一一载体(L)作为载体的必备条件;D有一个或多个限制酮切割位点,供外源DNA片段插入;具备自我复制能力,且能在受体细胞中复制并稳定保存;G)带有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择;必须是安全的,不会对受体细胞有害;G大小适巾的DNA分子。2)作用:D作为运载工具将
3、日的基囚转移到宿主细胞丨。)利用它在宿主细胞内对目的基团进行大量复制。3)常用的载体是质粒x喜菌体的衍生物和动植物病毒等。(质粒的本质:质粒是细菌拟核DNA外的能白我复制的小型双链环状DNA分二。二基因工程的基本操作程序1.目的基因的获取(目的基四:人们所需要的编码特定蛋白质的基因。直接分离法(2)我取目的基因的方法反转录法化学合成法人T合成法2.基因表达载体的构建(L)目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用。(2)组成:复制原点十目的基囚十启动子十终止子十标记基图基因表达载体模式囹对上图具体解读如下:复制原点原核生物只有一个复制原点真核生物有多个复制原点肽动子:位于基囚首端一段有特殊结构的DNA片段,是RNA聚合酶识别和结合的部位,作用是驱动基囚转录出mRNA。G终止于:位于基因尾端一段有特殊结构的DNA短片段,作用是止mRNA的转录。标记基因:用来检测载体是否进人了受体细胞。(3)过程图解,限制性核酸内切酶载体(质粗)DNA分子|一尔标口脱两个黏性未端获得|切口的基固DNA连接酶重组DNA分孔(重组质粒)
