病理的经典培训很实用教学材料

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1、,Part 1 - 代理商基础培训,培训日程,Dako公司介绍,近半个世纪的癌症诊断经验,1980s发布二抗试剂盒,1966 Niels Harboe博士 在丹麦成立Dako,Dako中国成立,Dako 全球领先的癌症诊断产品供应商,研发与制造 美国，加利福尼亚,研发与制造 丹麦,全球1200多名雇员 在20多个国家设有分公司 产品销往超过100个国家,领先的试剂平台 配合全自动诊断仪器 试剂 仪器 软件,临床病理诊断,.,.,Dako是国际大药厂的优先选择,Dako与合作伙伴建立了长期的合作关系We fight cancer！,合作伙伴（大型药企）数量,产品线全面覆盖临床病理诊断领域,I,信

2、息流和工作流整体解决方案,快速壮大的Dako中国业务,2012年新发癌症近312万例（全国） 5万例（上海） 最常见五大癌症(上海)：乳腺癌、肺癌、大肠癌、胃癌、肝癌。 乳腺、淋巴、肺占了60%的IHC测试量，乳腺癌是病理科的最重要检测项目 Dako在2012年推出了9种新抗体, Dako 2013年即将要发布的近20种新抗体,生意在哪里？ 涵盖病理科主要测试肿瘤Dako抗体覆盖率高,2011年中国高发肿瘤比例,中国高发肿瘤区域分布情况,病理基础介绍 - 病理科人员组成 重要专有名词 常规病理实验室流程 H&E, IHC染色流程,病理科室主要人员职责,病理科主任,管理病理科日常运作 病理科经费

3、管理 确定科室相应疾病的诊断指标,病理科医生,大体观察、取材 阅片，为临床提供诊断结果 染色质量的判定者,病理科技术主管,承担难度较多的技术工作和新技术项目 技术管理工作 订购试剂,病理科技术员,专人负责IHC实验 可能由技术主管兼任,IHC 技术主管,病理科实验操作 病理实验资料整理与保存,协调整个医院的仪器、试剂、药品等采购、管理,药剂管理科/设备科,重要专有名词 1,固定：用福尔马林固定液将手术组织标本浸泡12-24小时。 目的是防止组织腐败 包埋：将处理好的组织块浸入液体石蜡内， 冷却后形成石蜡组织块。 目的是为了得到蜡块（才可以保存） ，方便切片 切片：用切片机处理蜡块，获得极薄的石

4、蜡切片。 石蜡切片：有组织粘附的玻片，进行H&E染色， IHC染色及特殊染色的基础 烤片：石蜡切片放到烘箱里面烘烤，使切片贴合在载玻片上 目的是防止染色过程中脱片。,包埋 :,切片 :,烤片:,重要专有名词 2,H&E染色：苏木素 伊红染色法 ( Hematoxylin-Eosin staining ) ，简称H&E染色法 ，病理科里常用的染色法之一 。运用化学染色原理， 苏木素使细胞核着紫蓝色 ；伊红使细胞质着红色。 免疫组化染色（ImmunoHistoChemistry，IHC）： 是应用抗原抗体反应原理，用显色结果表示组织内待测的抗原指标。 原位杂交（In Situ Hybridizat

5、ion，ISH）： DNA水平检测疾病基因的技术，通过荧光显微镜或者其他显微镜观察发光或者显色的基因指标。 包含FISH(Dako, 雅培), CISH (Dako), SISH(罗氏),H&E :,IHC :,ISH :,病理实验室常规流程,Dako专注于此,染色步骤是非常复杂的,IHC染色步骤：,H&E染色步骤：,常规染色(H&E)介绍 重要专有名词,H&E 染色 病理科的基础染色,H&E 染色是病理医生诊断疾病所使用 的第一种且最广。量最大的方法 H&E=苏木素+伊红染色 100年历史 绝大多数送到病理实验室的组织样本 会做H&E染色 上海肿瘤医院 300,000切片/年 四川华西医院

6、250,000切片/年,常规染色重要专有名词,为什么需要做H&E染色：为了使细胞结构着色以便观察组织结构 苏木素：一种天然染料，用来做细胞核染色 (将细胞核染成蓝色) 伊红：化学试剂，用来做细胞浆染色 (将细胞浆染成粉红色),Dako常规染色(H&E)产品 H&E市场概况 Coverstainer工作原理 Coverstainer竞争优势,H&E主要厂商,从2010年9月起，Coverstainer在全世界安装了超过100台。,Coverstainer仪器构造- 封闭式系统,播放仪器操作视频,Dako CoverStainer 工作原理上载切片，设置程序,上载1-4 架 切片(最多 40 张片

7、子) 设置 H&E染色流程 (1个切片架仅能设置1个染色流程) (4个切片架最多可设置4个染色流程) 可连续上载,可以设定20个不同染色流程 每个流程40个染色步骤 可以同时运行4个不同染色流程,1,2,Dako CoverStainer 工作原理烤片,步骤： 切片架被转移至烤片单元 (10 minutes, 65C) 烤片的作用为粘附组织到切片 （防脱片） 开始融蜡 特点： 同时承载12个切片架（120张切片） 烤片温度可达5070度,3,Dako CoverStainer 工作原理脱蜡、H&E染色、脱水,步骤 (18个染色缸)： 脱蜡 浸在溶剂中 (Xylene或HistoclearII)

8、 水化 浸入 一系列不同浓度的酒精 苏木素染色 浸染苏木素 伊红染色 浸染伊红 脱水 浸入一系列的酒精 透明 浸入HistoclearII (二甲苯替代物),4,Dako CoverStainer 工作原理封片,步骤： 封片单元拾取盖玻片进行封片 扫描所有的切片，开始封片，从最后一张开始 特点： 可应用于IHC、特殊染色封片 一次最多可封片120张,5,Dako CoverStainer 工作原理干燥,步骤： 切片架被转移到干燥单元 (干燥10 minutes) 特点： 当切片架可以取出时，会给予提示音 干燥单元可单独使用 干燥单元最多可放12个切片架,6,组织粘附切片,用二甲苯取出蜡,盖玻片

9、封片,用酒精将组织脱水,细胞核及胞浆染色,干燥封片胶,样本切片不间断输入，连续上载功能 烤片、封片功能可以任意选择,Coverstainer竞争优势 1 完全自动化，一体式设计,Coverstainer竞争优势 2 运行速度最快，运行效最高,一小时可做240张切片 可连续上载切片 可过夜处理 日输出量最大2000张,独立的染色和试剂装载单元，最小化工作人员接触试剂和暴露在污染环境中 静音，运转过程仅产生 38.5 (dB)声音 安全性 专设外部的排气设备，排出了设备内的有毒气体 有毒无毒废液分开 无毒的Histoclear代替二甲苯,Coverstainer竞争优势 3 安全环保的工作环境,C

10、overstainer竞争优势 4 高质量的试剂和耗材,已使用5天, 不论染了多少片 必须更换试剂 or 若5天内已染3000张切片 必须更换试剂,每天至少更换2升HistoclearII 可根据医院蜡质状况使用二甲苯,Coverstainer为封闭式系统, 必须使用Dako原装试剂,染色结果一致性的保证 ：,Coverstainer竞争优势 5 确保染色结果一致性,第一片 (第一天),第3000片 (第五天),3000 张切片或5天内达到一致性染色结果,试剂循环减少沉淀和片段 最小的试剂挂壁量 封闭试剂容器和封闭试剂排流系统减少蒸发 特殊设计的切片架减少试剂携带量,满足客户的不同需求： 20

11、 种染色程序 每个程序40个染色步骤 个性化染色结果 同时运行4个染色流程 每个染色流程可以调节封片剂加样量,Coverstainer竞争优势 6 灵活性及易用性,不同的工作流程 连续装载切片 过夜处理选择功能 单独使用封片功能 IHC或SS slides,Coverstainer的先进理念, 必须灌输给客户的概念,LIS 连网 标签化管理,高速、全程无手工,H&E质量控制,即用型、环保试剂,=必然趋势,优质、一致的染色结果,免疫组化(IHC)介绍 重要专有名词 常用一抗,一抗(Primary Antibody)：与检测的抗原结合的抗体。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。 克隆号（Clone）：

12、同一种一抗因生产厂商不同会有不同的克隆。,二抗(Secondary Antibody)：能与一抗相结合的抗体，同时进行显色。可以将一抗信号放大。 实验步骤：一抗 二抗，即：先一抗后加二抗，二抗作用是结合一抗并显色,抗体（Antibody）：可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗体一般命名是和抗原的名字一样，即如果这个抗原是Ki67，相应的抗体也叫Ki67抗体，简称就是Ki67.,免疫组化重要专有名词 1,+,即用型： 开瓶即用 即用即滴,浓缩液： 稀释后使用 稀释范围1:501:200,免疫组化重要专有名词 2,阴性染色：指所需要检测的抗原无染色结果。 假阴性染色：是指本应该染色阳性，但染

13、色结果为阴性，是一种错误的染色结果。 阳性染色：指所需要检测的抗原显示出染色结果。 假阳性染色：指本不应该要有颜色反应的部位，出现了显色。 白片：没有任何染色结果，也可指未经染色的切片,抗原修复：帮助免疫组化染色的一种处理方法，常见方式为加热修复。 复染（衬染）：用苏木素将细胞核染成紫蓝色，形成蓝色的背景。 目的是染色定位 孵育：抗体加好以后，在室温下进行反应的过程。 室温下进行反应为Dako独有 (罗氏及莱卡因试剂质量不佳, 因此需加温处理) 常见IHC染色结果 : 蓝色即为复染，褐色为阳性结果,免疫组化重要专有名词 3,HER 2,CD 10, 56C6,ER, EP1,常见疾病与常用指标

14、,约占60%免疫组化测试量,患者、医生要求更高的诊断质量和速度 日益增加的财政负担,标准化的必要性,IHC市场宏观发展趋势加速标准化进程,国际三大知名病理外部质控机构,美国病理学家协会（CAP）：非盈利的临床实验室认可机构，全球最大的病理学家组织 目前，中国大陆已经有16家医学实验室（包含5家医院）通过了CAP认可。,欧州免疫组化质量控制机构（NordiQC） 北京协和医院、北京肿瘤医院与Dako合作，参与NordiQC测评，优秀测评结果会在网站公布,英国IHC室间质控组织（UK NEQAS），致力于临床病理实验室的标准化和改进，为病理领域的标准化做出了重要贡献。 目前，UK NEQAS拥有全

15、球超过600家机构参与了测评。,外部质控：通过外部质控测评帮助实验室人员不断提高和改进其诊断质量。 获得国际名病理外部质控结构的认可，是实验室体现国际化水平的标志。,这三家质控结构评出的优秀结果，被认为是行业的“金标准”,Dako免疫组化(IHC)产品 全套解决方案 仪器 试剂 软件（DakoLink）,国家食品药品监督管理局权威认证（SFDA） Dako全自动免疫组化染色标准化解决方案,IHC染色步骤,抗原修复,复染,脱蜡,二抗,显色,封片,一抗,水化,脱水,烤片,预处理 由PT Link“三合一”一步完成,由AutoStainer Link48完成,一抗开放，二抗封闭,Autostainer Link48工作流程,放置试剂,插切片,预处理,打印标签,运行程序,放置切片,设置程序,干燥,封片,手工步骤,可同时进行高pH和低pH抗原修复 （蓝瓶）（蓝瓶）,1.5 L水浴修复系统，修复充分、稳定 48张切片,PT Link | 全自动免疫组化预处理系统,IHC标准化仪器,降低脱片几率 减少组织损伤,实时温度监控功能，标准温控曲线 完好保留实验数据,脱蜡、水化、抗原修复一次完成 安全环保,所需试剂：三合一修复液,高通量,48张切片/42种试剂,标准化流程,Dako Link内置常用试剂标准染色流程， 无需编辑设定 可连接LIS,良好保湿,特制缓冲体系，自动形成特定保护膜层 快速覆