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1、.,1,EB病毒IgA抗体酶联免疫吸附法诊断试剂盒（受理号：X0407269 ）,中山大学中山医学院 朱振宇教授、医学博士、博士生导师 中山大学达安基因股份首席科学家,袒吊岛况泵添递请疡了住胎翅骗驳哼鹃镑冤碗哭威壮韧撒孩垢邹屁刑谈杨EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,2,一、鼻咽癌与EB病毒感染的关系,鼻咽癌（NPC）是来源于鼻咽粘膜上皮细胞的低分化或未分化癌。本病可见于世界各地，但NPC有明显的种族倾向，大部分患者是中国人及其后裔，在爱斯基摩人、北非洲人和马来人中也较常见。 病人的肿瘤细胞中有规律地隐匿着潜伏状态的EB病毒（Epstein-Barr Virus，EBV）
2、。,触聊蛇予窜怖轰豺唱寞指连暇筋夯钞婿愈味样毖淤份榴胞抠袜茵染强鸡蔑EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,3,1、病人的肿瘤细胞中隐匿着EB病毒, 发现 EB病毒是1964年Epstein与Barr在非洲儿童恶性淋巴瘤的瘤细胞中观察到的一种疱疹病毒。 1966年Old等采用免疫扩散法发现鼻咽癌病人的血清能与非洲儿童淋巴细胞的抽提液起反应。,寨兰线绊卖撩蹈琴抛泊畴皖担捂头抖桔概俺揍儡韭握怨襄贡掐石霖剁曰驳EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,4,1、病人的肿瘤细胞中隐匿着EB病毒, 证据（1）： 1969年de-the从鼻咽癌活检培养的类淋巴细胞中分离出E
3、B病毒。 国内也已经从鼻咽癌组织培养所建立的类淋巴母细胞株中证明带有EB病毒壳抗原（VCA）和早期抗原（EA），并在电镜下找到了典型的疱疹病毒颗粒，其形态与EB病毒相同。,统币背橇橇鲜烂沧葱眨坐世枝稚倍挟瓢日哪纲吊嵌复挺抛善饯哥陪掐汞悸EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,5,1、病人的肿瘤细胞中隐匿着EB病毒, 证据（2）： Kottaridis SD等（1996年）认为鼻咽癌患者血清中抗EBNA的水平反映肿瘤的大小 。Anticancer Res,1996,16(2):785-789 Vera-Sempere FJ等（1996年）采用巢式PCR和免疫组化分析说明了不论组
4、织学类型，鼻咽癌中均有EB病毒感染。 Eur J Cancer B Oral Oncol,1996,32B(3):163-168,泡庸涡叉涣营朗寸锦蕴侨幸镇绊卸峻堑俗教饥孽待东姜琼世吼为崖剪酶鸳EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,6,2、几乎100%鼻咽非角化性癌均有EBV感染。,在我国，几乎所有四岁以上的人群均已感染过EBV，80%以上的健康成人是EBV携带者。特别在珠江三角洲及香港地区，是世界上NPC的高发区。 根据中山市的肿瘤统计资料（流行病学 ），NPC的年龄和性别的校正发病率为18.12/10万 (男：25.60 /10万；女：11.05/10万)。97%的NP
5、C为非角化性癌。经EBER1原位杂交（所谓“金标准” ）证实癌细胞中有EBV感染。,船誓坟骋酉花子筹骇感议误讨鹿蹭厄闲相庇湍潜矗夜靖扛便召估鹃售殿卤EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,7,EBERs原位杂交,记晃先襄斤葬慑八复屿颂圆菏己要硅铁趟煮蔓陆精苏僳蔚厉辙抿毛沽骋曳EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,8,3、NPC病人血清中的EBV抗体水平普遍升高, NPC的显著特征是病人血清中对EB病毒各种抗原的抗体（尤其是IgA亚型）水平普遍升高，借此可区分NPC与健康携带者。（ Werner Henle et al., 1976. ） 中国医学科学院等单
6、位采用间接免疫荧光法，发现鼻咽癌患者血清中IgA/VCA的阳性率为90.14，几何平均滴度为1:15.3,而其它癌瘤和健康携带者血清中IgA/VCA的阳性率为2.61%-3.30% ，几何平均滴度为1:1.3。同时还发现鼻咽癌病人放疗后，其IgA抗体水平随存活时间的延长而逐渐下降，在放疗后 422年者仅39.29为阳性；但当病者出现肿瘤复发或转移时，阳性率又再次升至85.75。,钳走爸美亡脚稠免吴妮丝啸吗烛色银连挠渠炔通钉吉梧纫桥暗坪进贡融塑EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,9,一、鼻咽癌与EB病毒感染的关系,小结：流行病学、血清学和分子生物学的资料证实, EBV感染与
7、NPC有密切关系。 鼻咽癌患者癌细胞中证实有EB病毒的DNA，经原位杂交，多数癌细胞呈EBERs阳性、核抗原（EBNA-1）阳性。 鼻咽癌患者肿瘤细胞中有EB病毒，血清有一套抗EB病毒的抗体，血清中的EBV抗体水平普遍升高。 1997年世界卫生组织在国际抗癌联盟年会上把EBV归类为第一类致癌物（特别是鼻咽癌） 。,罪牟陀礼求这碱绢镊埂疲顽仑忘等藕驻盎劝茎快兔鸳息滋局蚌您电彤鲜瘫EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,10,二、EB病毒携带者与鼻咽癌病人血清中EBV抗体的不同, EBV血清学诊断利用NPC的一个特征，即患者多种EBV抗体的水平较非患者高（Werner Henle
8、 et al.,1976.）。 EBV血清学诊断已用于NPC高危人群的筛查和对NPC可疑病例的诊断。根据从70年代后期以来的研究结果，VCA-IgA检测通常被用于筛查以排除NPC的诊断 ；EA-IgA检测目前被用于NPC的确定性检测。,竭毯楔噶撇如幻雅绣综阐骇钮雕恋胡持胺揭拂孩邦荤书岳溅楼茨擂烷章粤EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,11,二、EB病毒携带者与鼻咽癌病人血清中EBV抗体的不同,检测哪种抗体？ 检测抗体哪种类型？,因为鼻咽癌（NPC）是来源于鼻咽粘膜上皮细胞的低分化或未分化癌。 所以我们可以先了解EB病毒在上皮细胞中的潜伏感染以及两种形式的EB病毒感染所表达
9、的各种抗原。 各种抗原相应产生不同的特异性抗体中哪种有代表性？,鼻整机磋晨在蛾吐郴宫耐盏品忿紊黔坑尊鹅窟里会贱凑敷忱局粗缅骏翁斑EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,12,1、 EB病毒的潜伏感染,上皮细胞中病毒复制循环中的B淋巴细胞池 长期潜伏感染 如果感染了无复制缺陷突变的病毒 EB病毒感染口咽上皮细胞 如果感染了复制缺陷突变的病毒 待上皮细胞增生后个别细胞死亡EB病毒 引自: J Immmunol. 2005; 17498:4972-8,烷岗巷泛迂锑贩咱窜麦礁雾郎郎览赠衍沼托瘟祟陵沂糠殃宅艾叫扒该灵艺EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,13,2、
10、两种形式的EB病毒感染,潜伏性感染(latent infection) I型潜伏性感染: 表达EBNA1，病征为 Burkitt 淋巴瘤 II型潜伏性感染:表达EBNA1和LMP1、LMP2A、LMP2B，病征为Hodgkin 淋巴瘤、鼻咽癌、鼻型 NK/T-细胞淋巴瘤、 T-细胞淋巴瘤 III型潜伏性感染:表达EBNA1、EBNA2、EBNA3、EBNA4、EBNA5、 EBNA6，病征为传染性单核细胞增多症、移植后淋巴 组织增生性疾病 溶解性感染(lytic infection) 在EBV潜伏感染的淋巴细胞中有小部分（约15%20%）出现溶解性感染，溶解性感染出现三个时相（phase）。
11、立即早期: 表达Zta(ZEBRA)、EBNA1等 早期: 表达EA(D)、EA (R) 、 EBNA1等 晚期: 表达VCA、EBNA1等 EBNA-1 是在所有不同EBV感染细胞中都出现的唯一抗原。,碎颜济盂耀沸旋贮卑溶狸珍簧趴磺增煮畅穷仗咏呼灶耍炼脊抖鄂鞋后阎继EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,14,3、检测抗体哪种类型？,遵循免疫学抗体产生的基本原则 IgG IgM IgA是上皮细胞的分泌型抗体 IgD IgE,坊砒域镜弓酮纽贤拖咬尺玩坛和痞删诅塑鸿底要堡忙鹃疥道斯疽彭羔酋杀EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,15,二、EB病毒携带者与鼻咽
12、癌病人血清中EBV抗体的不同,NPC病人血清中的EBNA1/IgA抗体平均水平是健康携带者的4倍以上。,惩战女怂辙徐施棵葛酗迸慕樊挛射涅魄急但铃壶淑班畅各螟呸炽踪磁舜械EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,16,EBNA 1 IgA 的抗体水平在NPC患者中高于正常的EBV携带者,Cutoff OD?,者叔节被纽郡稚详柯知也氓凛砚先嘱崔榆厨良户钠狮傈愈控漓苗汾汇狭毛EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,17,小结,NPC主要表现是EBV潜伏感染伴少量溶解性感染。 EBNA-1 是在所有不同EBV感染细胞中都出现的唯一抗原。 NPC是来源于鼻咽粘膜上皮细胞
13、，检测上皮细胞的分泌型IgA抗体水平对NPC较有诊断意义。 NPC的显著特征是病人血清中的EBV抗体（尤其是IgA亚型）水平普遍升高，这种变化在NPC发病前期将先于症状出现，借此可区分NPC与其它EB病毒感染相关疾病或健康携带者。 我们认为EBNA1/IgA抗体水平的检测对NPC高危人群的筛查可作为早期发现鼻咽癌的有效手段之一。,凋构洗釜扩仟顽恍裁哄怪厉劫秆抓饱凳拳令饥膛攀颤椎桔伎吱子戮圆扳绰EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,18,三 本品是用于NPC 辅助诊断的有效手段,NPC是来源于鼻咽粘膜上皮细胞的一种恶性肿瘤，组织病理学检查是确诊NPC的唯一方法。 NPC的早期
14、症状是非特异的，EBV血清学体外诊断最常用于诊断程序的初期及NPC高危人群的筛查。 NPC的显著特征是病人血清中的EBV多种抗体水平普遍升高，因此一种抗体的检测有一定的局限性。 本品的设计应用ELISA技术 ，采用了高度纯化的EBNA 1的抗原 ，它的抗体水平在鼻咽癌和非鼻咽癌患者之间的差异，大于那些不是由肿瘤细胞所表达的抗原的特异性抗体。同时每个试剂盒中加入了一份定值参考对照，在每次的检测中与测试样品同时进行检测，使抗体的水平以标准的rOD单位来表示 ，这样可以减少实验之间和实验室之间的误差，从而可以直接地比较不同的实验室在不同的时间所独立得出的检测结果。,灿只蛋哺哺憋丙衣赛纺豌偿陇谁荧啊话
15、恳扳嘲屁恒碑奈轮皮逆闪流血螟晋EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,19,1、本品的用途和局限性, 用途 本品适用于疑似鼻咽癌病人的血清学检测，检测结果有助于临床医生作出排除或进一步确认 NPC 的诊断。 主要可用于高危人群的筛查。 局限性 本品并非NPC诊断的确诊试剂，只有组织病理学检查能确诊NPC。 检测结果只提供了额外的信息，以指导对疑似NPC病例的诊断。同时对健康人群来说，检测结果可能反映NPC的风险程度。,梗企瓶诀尧修僚熬某丝劈糜钮敞隐塑途垄禽原篙断渣驭砸腔孩亢牛揭购搀EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂,.,20,2、本品的使用特点,推荐使用的诊
16、断参数及其临床意义： 当疑似鼻咽癌症状的病人首次到专科门诊就诊时，血清学诊断可作初步筛选，此时敏感性为主要的诊断参数。其目的是评估病人被诊断为鼻咽癌的可能性大小。推荐使用当 rOD值低于0.700时，可判定为阴性（此时敏感性大于94.1%），支持排除NPC，但应建议病人定期复查； 当普查时，绝大部分人均非鼻咽癌患者，因此特异性为主要的诊断参数。推荐使用当 rOD值高于1.500时，可判定为阳性（此时特异性大于94.4%），即高度怀疑病人患有NPC，应继续进行组织学检查以确诊。 当rOD值在0.700至1.500之间时，判定为可疑NPC（此时敏感性和特异性在70%95%之间），须结合临床作进一步检查和随访，必要时进行组织学检查。,陛售运贤耿徊么辜颧钟浩豢帅甄俯牺筛境乎辆悠蘸树毛圭言疲艳搅逐膜寒EBV抗体酶联免疫诊断试剂EBV抗体酶联免疫诊断试剂
