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1、.,1,甘草研究状况若干问题,09药学 吴训文,.,2,第一节甘草的基本知识,一、形态特征： 甘草为多年生草本，高30100厘米。全身披有白色短柔毛和腺毛。地上茎直立，下部木质化，小枝有棱角，绿色。叶互生，为奇数现状复叶。小叶38对，卵圆形或卵状椭圆形，全缘，顶端小叶较大。总状花序，腋生，花梗极短，基部下方有一卵形小苞片，花萼钟状，绿色，花冠蝶形，紫红花或蓝紫花。果实为荚果，狭矩形，弯曲成镰刀状或半环状，褐色，密披刺状绒毛。种子58粒，卵圆形而微扁，表面平滑，褐色。,.,3,二、植物分类： 甘草：为双子叶植物豆科Leguminosae甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch
2、.，胀果甘草G. inflata Bat.， 或光果甘草G. glabra L. 三、生理生态特征： 甘草：多生长在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠边缘和黄土丘陵地带，在引黄灌区的田野和河滩地里也易于繁殖。它适应性强，抗逆性强。在我国，甘草生长在西北、华北和东北等地。喜干燥气候，耐寒，野生在干旱的钙质上，排水良好的、地下水位低的砂质壤土栽培。忌地下水位高和涝洼地酸性土壤。土壤中性或微碱性为好。 四、栽培方法： 甘草：喜阳光充沛，日照长，气温低的干燥气候。宜选土层深厚，排水良好的砂质壤土栽培。用种子或根茎繁殖，但以根茎繁殖生长快。,五、鉴定: 1、形态鉴定：,直立属，叶互生，奇数现状复叶，小叶717
3、枚，椭圆形卵状，总状花序腋生，淡紫红色，蝶形花。长圆形夹果，有时呈镰刀状或环状弯曲，密被棕色刺毛状腺毛。扁圆形种子。花期67月，果期79月。,.,4,2、显微鉴定： 横切面：木栓层为数列棕色细胞。皮层较窄。韧皮部射线宽广，多弯曲，常现裂隙；纤维多成束，非木化或微木化，周围薄壁细胞常含草酸钙方晶；筛管群常因压缩而变形。束内形成层明显。木质部射线宽35列细胞；导管较多，直径约至160m；木纤维成束，周围薄壁细胞亦含草酸钙方晶。根中心无髓；根茎中心有髓。粉末淡棕黄色。纤维成束，直径814m，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维。草酸钙方晶多见。具缘纹孔导管较大，稀有网纹导管。木栓细胞红
4、棕色，多角形，微木化。 3、理化鉴定薄层层析： 样 品 液：取本品粉末1g，加乙醚40ml加热回流1小时，过滤，药渣加甲醇30ml加热回流1小时，过滤，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，合并提取液，用水洗涤3次后，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解。 对照品液：甘草酸加甲醇制成每1ml含2mg的溶液。 展 开：硅胶G薄层板，以酯酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（30224）为展开剂。 显 色：以硫酸乙醇液喷雾，105加热，在紫外灯（365nm）下检视，供试品溶液色谱在与对照品溶液色谱的相应位置上，显相同颜色的斑点。,.,5,六、炮制方法： 取净甘草片，加入炼熟的蜂蜜与少许开水，拌匀后
5、稍闷，炒至黄色至深黄色，不粘手时取出，晾凉。每100斤用炼熟蜂蜜2530斤。 七、主要成分： 甘草酸（glycyrrhizic acid），又称甘草甜素，一种三萜衍生物，分子式C42H62O16。为甘草次酸的二葡萄糖醛苷（见苷），是甘草的甜味成份，存在于甘草属植物中，在乙酸中结成片状或棱柱状晶体。在220分解。溶于水。甘草次酸分子式C30H46O4。有两种同质异晶体。熔点分别为300304和287293，比旋光D+163。溶于乙醇。 甘草的化学组成极为复杂，目前为止从甘草中分离出的化合物有甘草甜素、甘草次酸、甘草甙、异甘草甙、新甘草甙、新异甘草甙、甘草素、异甘草素以及甘草西定、甘草醇、异甘草醇
6、、7-甲基香豆精、伞形花内酯等数十种化合物，但这些成分和数量通常会随甘草的种类、种植区域、采收时间等因素的不同而异。大量的研究表明，甘草甜素和黄酮类物质是甘草中最重要的生理活性物质，主要存在于甘草根表皮以内的部分。,.,6,八、功效： 甘草：甘，平，无毒。益气补中；缓急止痛；润肺止咳；泻火解毒；调和诸药。 主倦怠食少；肌瘦面黄；心悸气短；腹痛便溏；四肢挛急疼痛；脏躁；咳 嗽气喘；咽喉肿痛；痈疮肿痛；小儿胎毒；及药物、食物中毒。用于脾胃 虚弱，倦怠乏力，心悸短咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓 解药物毒性、烈性。 九、药理作用： 1抗肿瘤作用 赵世元等研究黄酮体内抗肿瘤作用，建立S180
7、小鼠肉瘤和H22癌腹水瘤模型，观 察甘草总黄酮对S180鼠肉瘤抑瘤率和对其胸腺和脾脏重量的影响；观察甘草总黄 酮对H22肝癌腹水瘤生命延长率的影响。结果表明，甘草总黄酮能抑制小鼠体内肿 瘤的发生和发展，能显著提高H丝腹水瘤小鼠的生命延长率，并且能增加肉瘤小鼠 的胸腺指数，降低S180小鼠肉瘤的脾指数。甘草总黄酮能抑制体内肿瘤生长，其 抑瘤机制可能是通过提高小鼠的免疫系统实现的。,.,7,2抗氧化作用 余龙江等24以过氧化值(Pov)为指标，采用Schaal烘箱法研究了甘草总黄酮对油 脂的抗氧化性能。结果表明甘草总黄酮对4种食用油脂均有良好的抗氧化效果， 且对猪油具有较强的抗氧化作用，其作用具有
8、剂量效应关系；VC、柠檬酸、酒石 酸对甘草总黄酮的抗氧化作用均有协同增效作用；甘草总黄酮与合成抗氧化剂混 合使用时，其抗氧化能力均好于只添加单一抗氧化剂的效果。 3抗衰老作用 叶怀义等口冠研究了甘草黄酮对小鼠的抗衰老作用。注射100大黄煎液 0.8mL，只8d，造成小鼠衰老模型，分别给以2.4mgkg的甘草黄酮，对照组给生 理盐水10d。给药组小鼠血清中SOD酶活力升高，而MDA量下降，小鼠抗应激能力 增强，小鼠体重增长也快于对照组。实验表明，甘草黄酮具有抗衰老的作用。 4抗心律失常作用 胡小鹰等闭利用动物实验性心律失常病理模型，观察甘草总黄酮是否具有抗心律 失常作用。实验结果表明，50一10
9、0ragkg甘草总黄酮可延长乌头碱诱发的小鼠 心律失常潜伏期、减少氯仿诱发的小鼠心室纤颤阳性率：2550mgkg甘草总黄 酮可增加哇巴因诱发豚鼠出现室性早搏、室速、室颤和心搏停止所用剂量，实验 表明甘草总黄酮具有抗心律失常的作用。,.,8,. 5美白剂及治疗黄褐斑作用 王明利等研究了特定品种甘草中提取的纯生物的天然美白剂，其主要活性成份是 glabridie，它具有以下作用：(1)抗酪氨酸酶活性；(2)过氧化脂质的抑制；(3) 抗菌作用；(4)近年来又发现甘草黄酮能抑制多巴色互变酶(，IRP22)的活性， 这是许多美白剂所没有的效能。应用富含甘草黄酮的“忘忧草”系列祛斑产品， 能有效地治疗黄褐
10、斑，配以心理疗法，能达到内外兼治、以内养外，使皮肤洁白 细腻。 6抗HIV病毒作用 日本学者从甘草鞣质活性成份研究中所得到的酚性成份(包括黄酮类成份)加强了 人体免疫缺陷病毒(HIV)对A11LIK(来源于成人T细胞性白血病患者的细胞株)的 拮抗作用。其中两种新甘草查尔酮低浓度时显示出对HIV增殖的抑制作用。渡边 和浩等(2sl发明的治疗艾滋病的药物成份主要含甘草黄酮类(甘草素、异甘草素、 甘草苷、异甘草苷)，其抗HIV活性是甘草酸的15100倍，并证明了甘草酸的存 在不影响黄酮的药理效果，引起了国内外学者的广泛注意。,.,9,十、现有剂型： 1、甘草酸铋胶囊：由甘草酸铋与选自淀粉，甘露醇，羧
11、甲基淀粉钠，羧甲基纤维素钠，微晶纤维素，交联羧甲基纤维素钠，羧基淀粉丙酸酯中的一种或几种均匀混合而成。甘草酸铋与上述辅料以重量配比计为：。 2、复方甘草酸苷片：甘草甜素25mg（甘草酸单胺盐35mg) 甘氨酸25mg 蛋氨酸25mg 3、复方甘草片：每片含甘草流浸膏粉112.5毫克、阿片粉4毫克、樟脑2毫克、八角茴香油2毫克、苯甲酸钠2毫克。祛痰止咳药。 4、复方甘草酸苷胶囊：每粒含甘草酸苷25mg、甘氨酸25mg、蛋氨酸25mg，做为辅料，还含有乳糖、碳酸钙、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、滑石粉、硬脂酸镁及聚维酮k30适量。适应于保护肝细胞，改善肝脏生化指标，预防肝衰；抗肝脏纤维化，抑制肝细胞癌
12、变，阻断肝病毒复制，双向免疫调节作用；用于治疗各种慢性肝病、肝功能异常、湿疹、皮肤炎、荨麻疹等。 5、复方甘草口服溶液：取甘草流浸膏，加甘油混匀，加水500ml稀释后，缓缓加浓氨溶液适量，调节pH值至89，再加愈创木酚甘油醚的水溶液(取愈创木酚甘油醚，加适量热水溶解制成)，随加随搅拌，最后加复方樟脑酊，再加适量的水使成1000ml，摇匀，即得。 本品中需加适量的稳定剂。用于上呼吸道感染、支气管炎和感冒时所产生的咳嗽及咳痰不爽。 6、复方甘草酸苷注射液：每20ml为：甘草酸苷40mg甘氨酸 400mg 盐酸半胱氨酸20mg辅料：无水亚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、氨水。,.,10,第二节甘草总黄酮含
13、量测定方法紫外分光光度法,1、对照品溶液配制。精密称取甘草苷对照品26. 2mg,置 于100ml量瓶中,加70%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,冰箱内 保存备用。 2、样品溶液配制。精密称取甘草样品0. 2g于25ml锥形 瓶中,加入70%乙醇10ml，密塞,摇匀称重,超声提取30min,取 出甘草并冷却,称重, 用70%乙醇补足减失量, 摇匀过滤, 续 滤液即为样品溶液。 3、显色溶液配制。精确吸取对照品溶液或样品溶液0.1 ml于10ml量瓶中, 准确加入10%KOH溶液0. 5m,l 室温放置 5min,用70%乙醇稀释至刻度, 摇匀, 即得对照品或样品的显 色溶液。,.,11,4、 检测
14、波长的选择。取70%乙醇和 10%KOH溶液分别在200600nm波长范围内扫 描, 发现两者在200600nm波长范围内几乎 无吸收。精密移取对照品溶液0.1ml2份分 别置于10ml量瓶中, 1份直接用70%乙醇定 容, 另1份按照/ 1.2.3方法制备显色溶液, 均以70%乙醇为参比,分别于200600nm波长 范围内扫。发现对照品溶液加显色10%KOH) 后,取样品溶液0.1ml 2份于10ml量瓶中,1 份直接用70%乙醇定容, 另1份加入显色剂 制得显色溶液分别于200600nm波长范围 内扫描。发现样品溶液加显色剂(10%KOH) 后在337nm处有最大吸收。可见,对照品显 色溶
15、液和样品显色溶液的最大吸收波长较 接近,故选择337nm为测定波长。,样品的紫外吸收光谱,.,12,5、线性关系考察： 分别精密吸取26.2Lg/ml的对照品溶液0.2、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml、10ml量 瓶内,准确加入10%KOH溶液0. 5m,l 室温放置5min,用70%乙醇稀释至刻度, 摇匀, 用70% 乙醇溶液为参比,在337nm处测定其吸光度, 以浓度C为横坐标, 吸光度A为纵坐标绘制 标准曲线,得回归方程: A=0.082C+0.0085, r=0.9999。 6、精密度试验。取同一份样品溶液, 按照/ 1. 2. 30方法制得显色溶液,取各显色 溶液
16、及其参比溶液于337 nm处测定其吸光值, 连续测定5次。 7、重现性试验。取甘草样品5份, 按样品测定方法制得样品溶液和显色溶液, 分别 测定总黄酮含量。 8、加样回收试验。称取已知甘草黄酮含量的甘草样品0.1g,加入甘草苷约4mg,按照 样品制备方法制得样品溶液和显色溶液,测定其吸光度,计算加样回收率。 9、样品测定。取不同产地的甘草样品, 按上述样品制备方法制备供试品溶液, 取供 试品溶液适量, 加入10%KOH溶液0. 5m,l室温放置5min, 用70%乙醇稀释至刻度, 摇匀,以 70%乙醇溶液为参比, 在337nm处测定其吸光度, 计算各样品中甘草总黄酮的含量。,.,13,第三节紫外分光光度计,一、原理： 光是一种电磁波,具有一定的波长和频率。可见光的波长范围在400-760nm，紫外光为200-400nm。可见光因波长不同呈现不同颜色，这些波长在一定范围内呈现不同颜色的光称单色光。利用棱镜可将白光分成按波长顺序排列的各种单色光，即红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等，这就是光谱。有色物质溶液可选择性地吸收一部分可见光的能量而呈现不同颜色，而某些无色
