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1、血液细胞分析仪基础知识讲座,血液细胞分析仪原理与关键技术讲座大纲,血液检验的地位。 血液的常识。 血细胞分析仪的知识。 BC3000血液细胞分析仪。,医学检验包括：临床生物化学、临床微生物学、临床免疫学、临床血液学和临床基础检验学（临床检验）。 临床检验学着重对人体血液、尿液、粪便及其它体液和分泌物进行检查。 血液检验是临床检验中最常用、最有效的基本内容。,血液检验的作用,对各种系统疾病的诊断和鉴别。 是诊断各种血液病的主要依据。,血液的基本知识,血液的概况,血液是由血细胞和血浆组成，血细胞包括红细胞、血小板和白细胞。血浆中包括各种蛋白（抗体、酶类等）、无机盐、激素、维生素和代谢产物。水分占9
2、1%92%。 理化特征：含量占体重的7-9%，约5000ml。Ph为7.357.45，比密为1.0501.060，相对粘度为45，渗透压为290310mOsm/kg。,血液的功能,通过循环系统与全身各个组织器官密切联系。 参与机体呼吸：携氧和排出二氧化碳。 运输：将营养物质运送到器官组织，将体内代谢废物运往肾、肺等器官排出体外。 防御：血液中白细胞和抗体参与机体抗感染和其他免疫反应。 调节：调节体液渗透压、酸碱平衡和体温平衡。,将正常血液抗凝离心后得到沉淀的血液。 抗凝血与非抗凝血的差异,液体的血浆占50-60% 血细胞占40-60%（白细胞、血小板、红细胞）。,血液的基本组成,血浆 白细胞和
3、血小板 红细胞,血细胞的分类和形态,寿命：7天 120天 8天 直径：20um 6.77.7um 230fl 功能：抗感染，免疫 携氧，代谢产物凝血功能,白细胞 红细胞 血小板,白细胞的分类,粒细胞（75%） 单核细胞（5%） 淋巴细胞（25%） 中性粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 经过瑞氏染色后的各种白细胞,血细胞的发育过程,共同的母细胞：造血多能干细胞 单核细胞,原单核细胞,幼单核细胞,单核细胞,白细胞的发育,原始粒细胞,早幼粒细胞,嗜酸性中 幼粒细胞,嗜酸性晚 幼粒细胞,嗜酸性杆 状核,嗜酸性分叶核,嗜碱性中 幼粒细胞,嗜碱性晚 幼粒细胞,嗜碱性杆状核,嗜碱性分叶核,中性中 幼粒细胞
4、,中性晚 幼粒细胞,中性杆状核,中性份叶核,红细胞的发育,原红细胞 早幼红细胞 中幼红细胞 晚幼红细胞 成熟红细胞,血细胞分析仪的知识,血细胞分析仪的发展过程,手工法:经典的显微镜检查。用显微镜对细胞进行计数及分析,手工法检验的过程,1、细胞计数（红细胞、白细胞、血小板等血细胞的镜下计数） 2、定量血红蛋白 3、白细胞分类（瑞氏染色） 4、其它：血细胞比积、红细胞形态、嗜酸球计数等,血细胞分析仪的发展,50年代，库尔特发明电阻抗法 库尔特原理（电阻抗法）：根据血细胞是不良导体的性质，它通过微孔时就引起电阻的变化，电信号的变化被检测出来。,血细胞分析仪的现况,国内：二级医院以上，全自动三分类二级
5、医院以下，二分类或三分类或没有 国外：全自动五分类，应用其它新技术，可检测幼稚血细胞。,手工法 血细胞分析仪,手工法操作过程的随机误差，实验器材的系统误差及检测方法本身的固有误差，计数不但费时费力，实验结果的精确性、准确性差。,血细胞分析仪测量水平不断提高，测量参数不断增加，快速、高效。为临床提供更多有用的实验数据。,工作原理,细胞分析原理：阻抗法 血红蛋白测量氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法，国际血液学标准化委员会、临床化学联合会和世界病理学会推荐。 其它参数：通过计算机内换算,白细胞分析原理,加溶血素后，白细胞大小分布如下： 第一群：小细胞区（3085fl） 淋巴细胞 第二群：中间细胞（
6、85135fl） 单核、嗜酸性、嗜碱性 第三群：大细胞区（135fl以上） 中性粒细胞,红细胞分析原理血小板分析原理,阻抗法,电阻阻抗法计数原理： 这种血细胞分析仪是利用小孔换能装置实现的，如下图： 下图是一个用阻抗法计数的核心部件-阻抗法测试传感器示意图，管内充满导电液体，两电极接上恒流电源，中部为一小孔，小孔孔经与细胞成比列，在负压的作用下，细胞通过小孔瞬间，排开等体积的电解液，使电解液的等效电阻瞬间变大，这个变大的电阻在恒流源作用下引起一个等比例增大的电压。细胞离开小孔电解液的等效电阻又恢复正常，直到下一个细胞到达小孔，这样细胞连续的通过小孔，就在电极两端产生一连串的电压脉冲。脉冲的个数
7、与通过小孔的细胞数相当，脉冲的幅度与细胞的体积成正比。将这些脉冲经过整形、放大，计算、储存、处理，就得到了细胞分类、计数的原始数据。,WBC直方图,*各种报警符号,RBC直方图,PLT直方图,氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法,红细胞溶解后，血红蛋白被氧化成高铁血红蛋白（Hi），再与CN根结合生成稳定棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。HiCN在540nm有最大吸收峰。 HiCN法具有操作简单，显色快且稳定，直接定值等优点。 缺点：氰化物有剧毒(氰化钾）,血细胞分析的过程,标本的采集和运输。 稀释标本或用全血上机分析。 检验者对结果的判断和分析。 编辑或修改病人报告。 打印报告。,注意事项,保
8、证采样的规范性。 试剂对实验的影响。（应尽量采用原装试剂和溶血素） 操作的影响,仪器的标定和质量控制,定标：维持仪器的准确性,质控：检测可能存在的系统误差，保证重复性。对操作者的理论及操作水平有较高要求。,定标,1、准备：标定液 （质控液） 本底测试通过 确认重复性好（最少3次） 2、标定过程：设好进血模式手工法： 新系数=目前系数标定液参考值/ 测量平均值自动定标：仪器自动换算新的系数。,市场主流机型XC-3000的性能,检测参数:19项+3直方图 主要优点:1、三分类，全自动，主流产品。2、仪器、耗材、维护价格便宜。3、体贴用户，中文、大彩屏、浮动界标等。4、公司有严格的质量体系，完善的服
9、务体系。,血细胞分析仪测试参数,WBC白细胞数目：4.0-10.0 X109/L RBC 红细胞数目：3.5-5.50 X1012/L PLT 血小板数目：100-300 X109/L HGB 血红蛋白：110-160 g/L Lymph# 淋巴细胞数目：0.6-4.1 X109/L Mid# 中间细胞数目：0.1-1.8 X109/L Gran# 粒细胞数目：2.0-7.8 X109/L Lymph% 淋巴细胞百分比：20.0-40.0% Mid% 中间细胞百分比：1.0-15.0%,Gran% 粒细胞百分比：50.0-70.0% MCHC 平均红细胞血红蛋白浓度：320-360 g/L M
10、CV 平均红细胞体积：80.0-99.0fL MCH 平均红细胞血红蛋白：26.0-32.0pg RDW-CV 红细胞分布宽度变异系数：11.5-14.5% RDW-SD 红细胞分布宽度标准差：35.0-56.0fL HCT 红细胞压积：36.0-48.0 % MPV 平均血小板体积：7.4-10.4 fL PDW 血小板分布宽度：15.0-17.0% PCT 血小板压积：0.108-0.282 %,血细胞参数的临床意义,红细胞计数： 1. 生理变异：随年龄和性别不同有差异。 新生婴儿、位处高原、情绪激动可使红细胞增加。 2. 病理意义：先天性心脏病、慢性肺疾患、慢性一氧化碳中毒、高原病等慢性
11、缺氧可刺激红细胞生成引起红细胞增加。严重呕吐、腹泻等引起脱水时，血液浓缩，红细胞相对增多。反之，慢急性失血缺乏造血原料，骨髓造血障碍等引起的贫血时，红细胞数减少。 白细胞计数： 1. 生理变异：随年龄不同时间不同，季节不同，变异较大。早上低、下午高，饭前较饭后低，冬季较夏季高，激烈运动及体力劳动都可使白细胞数增多。 2.病理意义：急性化脓性感染，如脓肿、扁桃体炎、肺炎、阑尾炎 、脑膜炎、败血症等白细胞数增多。外烧伤，手术后，尿毒症等也会增高。 障碍性贫血，部分急性白血病等造血干细胞疾病，某些传染性疾病如伤寒、黑热病、流感、传染性肝炎等白细胞数减少。,血小板计数： 1. 生理变异：健康人血小板数
12、较稳定，无性别、年龄差别。 2. 病理意义：血小板减少见于脾功能亢进、尿毒症、肿瘤骨髓转移等。白血病、败血症、障碍性贫血、溶血性贫血、骨髓增生综合症均可伴有血小板减少。 血小板增多见于原发性血小板增多症，慢性粒细胞白血病，增多症，脾切除手术后等。骨折、出血也可引起血小板 中性粒细胞增多，急性化脓性感染，粒细胞白血病，急性出血，溶血，尿、酸、汞、铅中毒。减少，伤寒，流感严重感染等。 嗜酸细胞增多，慢性粒细胞白血病、癌转移、铅、铋中毒。减少，伤寒、副伤寒等。 淋巴细胞增多，百日咳、传染性单核细胞增多症、慢性淋巴细胞白血病、麻疹、腮腺炎、结核、传染性肝炎等。减少，传染病急性期、放射病、细胞免疫缺陷等
13、。,血液细胞分析仪发展现状,1. 产品品种多样化： 2. 控制智能化： 3. 测试自动化： 4. 检测项目增多： 5. 系统网络化： 6. 先进测试技术在血液细胞分析仪中的应用：,血液细胞分析仪中的先进技术,鞘流技术： 灼烧技术： 扫流技术： 射频技术： 防返流技术： 微孔显影技术： 多次计数： 激光测试技术： 自动进样： 旋转阀： 全自动血样处理及分析系统： 流式细胞术：,特殊技术在血液分析仪的应用,计数周期的控制：时间控制；容量测定方法。 标本处理技术：预稀释、静脉血双进样；自动进样及清洗；旋转阀；自动涂片及染片；全自动血液处理及分析系统。 细胞计数准确性控制：重叠校正；脉冲编辑技术；三次
14、计数表决；扫流技术；防返流技术；鞘流技术等。,新的方法,容量、电导、光散射（VCS）测导法 阻抗与射频技术联合检测分类法 光散射与细胞化学技术联合应用 其它：多角度偏振光散射白细胞分类技术（MAPSS）,血细胞分析仪的基本工作原理,血细胞分析仪的类型 电学型 电阻型：利用血细胞通过微孔时瞬间的电阻变化产生脉冲电流而计数。 电容型：利用电极间加高频，血细胞通过时，静电容量发生变化而计数 光学型 血细胞固定型：利用光散射计数。 血细胞流动型：利用流体力学原理计数,微孔显影技术,美国库尔特公司生产的血球分析仪将微孔图像投影到操作屏上，给操作者提供直观了解测试小孔工作情况的价值，这是库尔特独家采用的技
15、术，现将工作原理介绍如下： 为克服堵孔现象发生，在样液进入测试小孔前采用了鞘流技术，为配合显影它的鞘流室作成扁平结构，利于光的通过和接收，并将样品输送管、鞘液室、小孔、扫流室、接收光平面的中心线做在一条直线上，距离越短越好，扁平结构是最理想的。（见图一）,图一： 鞘流室、小孔、扫流室、接收图象面示意图,测试样品进入样品入口，通过样品帽进入鞘流室，鞘液将样品带入测试小孔进入扫流室（后池）被扫流液带走，流入废液桶，正对小孔是接收图象面，接收到的图象通过一透镜组，进行聚焦、放大，成像，图象传到后反射镜，后反射镜以900角反射到上反射镜，上反射镜以900角反射到图象观察孔，人们从观察孔看到小孔清晰的图
16、象，帮助人们了解小孔工作情况。见图二。,对微孔显影技术的特殊要求，透光性要求，以上部分的材质均要求具有良好的透光性，能将小孔的图象清晰的投射在接收光平面上。鞘流室，为适应投影需要鞘流室做成扁圆型，鞘流盘左侧压在样品室，样品从中心流出，鞘流从盘的右圆表面高速流向鞘流盘右出口端，由测试孔入口端锥型缩小完成鞘流聚焦，通过测试孔时正是鞘流聚焦的焦点，见图一。扫流技术，由于扫流室适应投影需要在小孔出口与投影面之间是距离很小的圆型结构，扫流从上端入口进入平行扫过小孔出口，将测试样品和鞘液带入下端出口被负压吸入废液桶见图一。,测试回路，样品室中为一电极，扫流室中为另一电极，测试信号通过样品液鞘流室测试孔扫流面扫流室测试回路。小孔成像，从图二看出，投影接收端面将小孔图像传递到镜片组，进行
