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1、第三章 药物的杂质检查,药 物的杂质是指药物中存在的无治疗作用、或影响药物稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质。对药物所含杂质进行检查可保证用药的安全、有效，同时也为生产、流通过程的质量保证和企业考核提供参考。,一、 概述 二、 一般杂质的检查方法 三、 特殊杂质检查方法,第一节 概述,一、药物的纯度及要求： 即药物的纯净程度及要求 杂质是影响药物纯度的主要因素，如超过质量标准规定的纯度要求，就可能使药物活性降低，毒副作用增加。 对杂质的认识：是在防治疾病的实践中逐渐积累起来的,并随分离检测技术的提高进一步发现药物中新的杂质。 药物的纯度是质量标准中“检查”项下杂质检查来控制，内容：杂质名称
2、、检查项目、 检查方法、允许的限量.,药用规格纯度与化学试剂纯度,药用规格：符合纯度要求的药品，考虑的是对生物体引起的生理和毒副作用的杂质 化学试剂：对化学使用的目的考虑，对生物体引起的生理和毒副作用不考虑。,二、杂质的来源与种类,（一）来源： 1.生产过程引入的杂质： 合成药生产过程中：原料不纯、未反应的原料药、反应中间体和副产物在精制时未完全除去；所用试剂、溶剂、还原剂等的残留。 药物制成制剂过程中：可能产生新的杂质（盐酸普鲁卡因注射剂在灭菌过程中，可能水解为对氨基苯甲酸） 2.储藏过程引入的杂质：外界条件（温度、湿度、日光、空气、微生物等）可导致药品水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚
3、合、潮解、发霉产生杂质,（二）杂质的种类,按来源可分为 1.一般杂质：自然界分布广泛、在多种药物的生产和储藏过程中容易引入的杂质。（如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属等） 2.特殊杂质：特定药物的生产和储藏过程中容易引入的杂质。（如阿司匹林中游离的水杨酸）,按毒性可分为： 1. 信号杂质:（如氯化物、硫酸盐）本身无害，但其含量反映药物的纯度水平，如含量过多，提示药物的生产工艺不合理或生产控制存在问题。 2. 有害杂质：（如重金属、砷盐、氟化物）对人体有害，在质量标准中应严格控制，以保证用药安全。,三、杂质的限量,1.杂质的限量：药物中的杂质不可能也没必要完全除去。在不影响药物疗效和不
4、发生毒性的前提下，允许药物中有一定量的杂质。药物中所含杂质的最大允许量，叫做杂质限量。其检查多数为限量检查。 2 .杂质的限量表示：百分之几（%）、 百万分之几（ppm） 杂质的最大允许量 杂质限量（%）= 100% 供试品量,3.杂质限量的控制方法 限量检查： 不要求测定杂质的含量，而只检查其是否超过限量，常采用对照法，此外还可采用灵敏度法和比较法。 定量测定：测出杂质的准确含量,药物杂质限量的计算式,标准溶液浓度标准溶液体积 杂质限量（%）= 100% 供试品量 C V L= 100% S,例题 1. 对乙酰氨基酚中氯化物的检查 取对乙酰氨基酚2.0g，加水100ml,加热溶解后冷却，滤过
5、，取滤液25ml, 检查氯化物，所发生的混浊与标准氯化纳溶液5.0ml（每1ml相当于10g的Cl-）制成的对照液比较，不得更浓。问氯化物的限量是多少。,C V L= 100% S 0.015 = = 0.01% 2 103 25/100,2. 葡萄糖中重金属检查 取葡萄糖4.0g,加水23ml溶解后，加醋酸盐 缓冲液(pH3.5)2ml,检查重金属含量，含重金属 不得过百万分之五。问应取标准铅溶液多少 毫升（每1ml相当于 10g的Pb）?,L S 5 10-6 4.0 V = = C 10 10-6 = 2.0(ml),第二节 一般杂质的检查方法,一、氯化物检查法 (作为信号杂质，反映 纯
6、净程度和生产过程是否正常) 1.原理：利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银浑浊液，与一定量标准氯化钠在相同条件下生成的浑浊比较，不得更大。 2.方法：,供试 50ml纳氏比色管 （规定量供试品依法溶解+10ml稀硝 酸+水使成40ml）+硝酸银试液1ml+水使成50ml 标准 50ml纳氏比色管 （规定量的标准氯化钠溶液+ 10ml稀硝 酸+使成40ml）+硝酸银试液1ml+水使成50ml 5min后比较两者浊度，供试不得超过标准。,3.讨论：,(1). 酸性：（硝酸酸性可以避免弱酸银盐如碳酸盐、磷酸盐沉淀而干扰检查）硝酸、酸度：加稀硝酸10ml (2). 标准氯化钠：每ml
7、相当10ug的CL-、浓度以50ml中含50ug-80ug的CL-（所显示梯度明显，便于比较）. (3). 观察前在暗处放置5min（避免单质银析出），黑色背景从上向下观察、比较。,4.供试品处理：,(1). 供试液如不澄清：需过滤。滤纸先用含稀硝酸的水洗涤出去氯化物。 (2). 供试液如带颜色：按药典规定的方法处理（常用内消色法）。 (3). 不溶于水的药物：加水振摇使氯化物溶解滤去不溶物、或加热溶解供试品、也可加稀乙醇、丙酮溶解,二、硫酸盐检查法,1.原理：药物中存在的微量硫酸盐与氯化钡在盐酸酸性介质中生成硫酸钡白色沉淀，与一定量的标准硫酸钾溶液在相同条件下生成的混浊比较，浊度不得更大,2
8、.方法：（药典规定）,供试 50ml纳氏比色管 供试溶液（规定量供试品依法溶解使成40ml+稀盐酸2ml）+25%氯化钡溶液5ml+水使成50ml 标准 50ml纳氏比色管 对照溶液（规定量的标准硫酸钾溶液使成40ml +稀盐酸2ml）+ 25%氯化钡溶液5ml +水使成50ml 10min后比较两者浊度，供试不得超过标准。,3.讨论： 酸度为50ml中含稀盐酸2ml（酸性条件可防止碳酸钡或磷酸钡沉淀生成，但酸度不能过大会导致硫酸钡溶解）； 标准硫酸钾溶液相当于100 ugSO4/ml 4.供试品的处理 (1). 供试品需要过滤：滤纸先用盐酸的稀溶液洗涤。 (2). 供试品如有色：可采用内消色
9、法处理,三、铁盐检查法,铁盐可能会加速药物的氧化和降解，因此要控制其含量 硫氰酸盐法（Ch.P及USP采用，BP采用巯基醋酸法，这里只讲硫氰酸盐法） 1.原理：铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，再与一定标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色进行比较，颜色不得更深。 Fe3+ + 6SCN- Fe(SCN)6 3-,H+,2.方法：,供试 50ml纳氏比色管 供试溶液（规定量供试品依法溶解使成25ml+稀盐酸4ml及过硫酸铵50mg，使成35ml+30%硫氰酸铵3ml并使成50ml） 标准 50ml纳氏比色管 对照溶液（规定量标准铁溶液使成25ml+稀盐酸4ml及过硫酸铵5
10、0mg，使成35ml+30%硫氰酸铵3ml并使成50ml） 比较两者颜色，供试不得超过标准。,3.讨论 （1）标准铁溶液是硫酸铁铵配制、需加入硫酸防止铁盐水解。 （2）铁溶液每1ml相当于10gFe （3）酸性：稀盐酸、50ml溶液中含4ml为宜(防止铁离子水解)。 （4）加入过硫酸铵的目的： 氧化供试品中的二价铁为三价 防止硫氰酸铁分解腿色。,4.供试品处理,(1). 两管色调不一致：移至分液漏斗，加正丁醇或异戊醇提取，分取醇层比色（硫氰酸铁配位离子在醇中溶解度大，可增加颜色深度；同时可排除某些干扰物质的影响） (2). 具环状结构的有机药物：需炽灼破坏，使铁盐转变为三氧化二铁留于残渣再依法
11、检查。,四、重金属检查法,重金属：实验条件下能与硫离子作用显色的金属离子。如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等。 （影响药物的稳定性与安全性） 中国药典对重金属的检查共收载四种方法。 第一法 硫代乙铣胺法 1.原理：硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5）条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物均匀混悬液，与标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，不得更深。,CH3CSNH2+H2O CH3CONH2+H2S H2S + Pb2+ PbS + 2H +,pH3.5,2.方法： 除另有规定外，取25ml纳氏比色管两只，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml后，加水或
12、各药品项下规定的溶剂稀释使成25ml，乙管加入按各药品项下按规定方法制成的供试液25ml；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2min，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显示的颜色与甲管比较，不得更深。,3.讨论,(1). 适宜目视比色浓度：25ml溶液相当加入标 准铅溶液1-2ml（ 每1ml相当 于10 gPb2+ ）。 (2). 弱酸性：PH 3.0-3.5醋酸盐缓冲液（硫化铅 沉淀较完全）。 (3).供试品如是强酸溶解、或用过强酸处理过：在加硫代乙酰胺试液前,应先加氨水成呈中性再加PH 3.5醋酸盐缓冲液调节溶液酸度。,4.供试品处理,1.溶液如有色： （1）在对照管中
13、加入少量稀焦糖溶液，使之与供试品颜色一致。 （2）供试品加硫代乙酰胺试液后用微孔滤膜过滤，加入规定量的标准铅液作对照液 2.供试品如有微量高铁盐：高铁氧化硫化氢析出硫，产生浑浊干扰测定。 加入抗坏血酸0.51.0克,第二法 炽灼后硫代乙铣胺法,适用于在水、乙醇中难溶，或能与重金属形成配位化合物的有机药物。 1.原理：将供试品炽灼破坏后，加硝酸加热处理，使有机物分解、破坏完全后，再按第一法进行检查。,2.方法：,3.注意事项： 炽灼温度应控制在500-600，温度越高，重金属损失越多； 炽灼残渣加硝酸加热后，必须蒸干、除尽氧化氮，否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色 含钠盐或氟的有机物在炽灼时
14、能腐蚀瓷坩埚而引入重金属，改用铂坩埚或硬质玻璃蒸发皿。,第三法 硫化钠,适用于难溶于稀酸而溶于碱性水溶液的药物。 1. 原理：碱性介质中，硫化钠为显色剂，使Pb2+生成PbS微粒的混悬液，与一定量标准铅溶液同法处理后所呈颜色比较，不得更深。,2. 方法：,第四法、微孔滤膜法,适用于重金属含量低的药物 1. 原理：使重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上，与标准铅溶液同法处理产生的色斑比较，确定重金属是否超标。,2. 装置：,2. 方法：,4. 注意事项： 供试品如有颜色或浑浊，应进行预滤，更换滤膜，直至滤膜无污染。再制备铅斑，检查。,五.砷盐检查法,（一）古蔡(Gutzeit)氏法 原理：金属锌与
15、酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色砷斑，与标准砷溶液比较，不得更深。,装置： 醋酸铅棉花 C 导气管 A 砷化氢发生瓶,标准砷斑的制备： 在A瓶中 加2ml标准砷溶液 5ml盐酸，21ml水 5ml碘化钾试液酸性氯化亚锡试液5滴 （室温10min）加锌粒2g，立刻连上导气管C 将A瓶置于25-40度水浴45min，取出溴化汞试纸即得。 标准砷斑的制备： 在A瓶中 加规定量供试品溶液 5ml盐酸，21ml水 （照标准的步骤）,注意事项： 1.标准液 三氧化二砷配制储备液，临用前取储备液新鲜制备标准砷溶液，每1ml标液相当于1g的As 2
16、.加入试剂的作用： 氯化亚锡与碘化钾还原五价砷为三价，提高生成砷化氢速度； 氯化亚锡与碘化钾抑制锑化氢生成，排除干扰； 醋酸铅棉花吸收产生的硫化氢气体，排除干扰。,供试品处理,1. 若是硫化物： 会生成硫化氢，加硝酸处理，氧化成硫酸盐排除干扰。 2. 若是铁盐：（氧化砷化氢干扰测定） 加酸性氯化亚锡，将高价铁离子还原为低铁离子 3. 环状有机药物（砷共价结合）： 先进行有机破坏，在进行测定。,（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag（DDC）法）,1.原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，与微量砷反应，生成具有挥发性的砷化氢；砷化氢遇二乙基二硫代氨基甲酸银，使其还原产生红色的胶态银，用目视比色法或在510nm处测定吸收度，在与一定量标准液用同法处理后得到的有色溶液进行比较。,2.装置与方法：,方法： 在砷化氢发生瓶A中，供
